临床微生物室质量控制讲解

室内质控的方法建立及步骤
室内质控的方法建立及步骤
• 初控（新实验室的建立） 方法学的建立 操作手册、程序文件
室内质控的方法建立及步骤
药物敏感性试验的质量控制建立步骤 • 质控菌株应按标准方法与临床标本种分离菌同 步进行药敏试验 • 更换药物或培养基时必须用相应质控菌株测试 • 所有质控菌株在实行常规监控（一周一次质控） 前应连续监测30天 • 对每种药、每种菌，30次试验中失控结果不能 超过3个
质控测试频率的参考指南(续)
• 注 3: 工厂制备试剂/纸片时,按自己规程 运作. • 注 4: 出现异常结果,按指南中 M2-A8 / M7-A6中QC 章解决. • 注5: 接种用的肉汤, 盐水,水不需常规QC
• 接种物制备 :
– 目测改为Prompt 法– 20或 30天 – 目测改为光比浊计 – 5 天 – Prompt改为光比浊计 – 5天
仪器设备的功能监测
• 灭菌器械的效果检测 化学指示剂测试法：无色 黑色 • 恒温孵育箱、冰箱 每天记录， 孵育箱35℃ ± 1 ℃ 普通冰箱4 ℃ ± 2 ℃ 冰格-5 ℃ ± 1 ℃ 低温冰箱-20 ℃ ± 5 ℃ 超低温冰箱-80 ℃ ± 10 ℃
仪器设备的功能监测
• 二氧化碳培养箱 每天记录，5% CO2 • 生物安全柜： 定期年检,滤器3个月校正一次， 合格后使用 • 其它仪器（天平、显微镜、加样器、游标卡尺） 保养、定期维修、正确使用、年检
药敏试验中存在的问题
• 不能及时获得新的NCCLS标准 • 纸片储存不标准，M－H琼脂平皿为4mm厚 度未定量。纸片未置－20℃保存。现用纸片 置4 ℃冰箱（一周用量〕 • 不会做苛养菌的药敏 肺炎链球菌 嗜血杆菌 淋病奈瑟菌
自动化仪器的质量控制
仪器自带的质控程序 • 温度记录的监测 • 清洁程度的监测 • 产品维护程序 • 配套标准菌株的鉴定及药敏试验标准
室内质控
• • • • • • • 细菌检验人员及其培养教育 仪器设备的功能监测 培养基的质量控制 试剂、染色液及抗血清的质量控制 处理临床标本的质量控制 质量控制用标准菌株 抗生素敏感试验的质量控制
室间质评
• 历史 • 必要性 • 内容及方法
室间质评
室间质评
• 历史
起源于美国，1966年开始，国内于1985年卫生 部临检中心正式组织了全国性的细菌学质控工 作，质控工作使我国临床细菌室在鉴定和药敏 试验的正确性和标准化方面有了长足的进步， 并且逐渐与国际标准接轨。
生长，蓝色菌落
生长，无色菌落 生长，无色菌落 生长，无色菌落 生长被抑制 部分被抑制 生长 生长，产气 生长 部分或完全抑制
厌氧血琼脂 沙保罗琼脂
脆弱拟杆菌 产气荚膜梭菌 白色念珠菌 大肠埃希氏菌
培养基的质量控制
例： • 血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、5％ 羊血、软琼脂或加适量抑制剂有利于肺炎链球 菌生长 • 巧克力琼脂：脑心浸液、5％兔血、5mg/100ml 去甲万古霉素有利于嗜血杆菌生长
细菌检验人员及其培养教育
操作手册的建立包括以下内容： • 规章制度 • 检验项目 • 细菌鉴定的最低要求及药敏试验 • 培养基及其制备 • 试剂、染色剂的制备 • 生物安全防护 • 参考数据及书籍 • 室内及室间质量控制
细菌检验人员及其培养教育
建立严格的质控制度 • 严格的QC记录制度，点图、表格或文字。 如：孵箱温度、冰箱温度、培养基质量记录 • 室内质控中失控记录 • 全民质控意识，不要把质控作为个别人的活 动 • 质控资料妥善保管，至少保存三年
处理临床标本的质量控制
• 分离培养和鉴定 操作手册、接种要求、鉴定程序 操作手册：每4－5年重新编写一次，开 展循诊医学，不断淘汰无价值的试验， 增加新的有临床价值的试验 • 注意： 鉴定应按照科、属、种的顺序进行鉴定
处理临床标本的质量控制
例： • 卡它莫拉菌识别： * 可在血琼脂或巧克力上生长 * 灰略黄、干燥但可在盐水中乳化 * 35℃培养24－48h
室内质控
细菌检验人员及其培养教育
培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念 • 什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中 存在的病原菌及其生化特征和抗药性 • 什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的 质量水平，并采取监测手段，这一过程称为质量 控制。 • 质量保证：为达到应有的质量水平而采纳的措施 • 质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个 实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程
肺炎链球菌
ATCC10211
ATCC6305
生长
生长
培养基的质量控制
液体及分离用培养基的质量控制（续）
培养基 营养琼脂 质控菌株 金黄色葡萄球菌 号码 ATCC25923 鉴定标准 生长
中国兰琼脂
SS琼脂
大肠埃希氏菌
普通变形菌 伤寒沙门氏菌 福氏志贺氏菌 粪肠球菌 大肠埃希氏菌
ATCC25922
ATCC12453 ATCC14028 ATCC12022 ATCC29212 ATCC25922 ATCC25285 ATCC13124 ATCC10231 ATCC25922
质控测试频率的参考指南
(用ATCC质控株每天试验,连续有20-30天满意结果 )
质控试验延续天数
MIC 试验改进
用新的邮寄品 或新批号 用新工厂的试剂 MIC 试验 软件更新能影响药敏试验 结果 X
1
X
5
20 或 30
注
X
实施室内的评估研究 要监测所有抗生素
质控测试频率的参考指南
注 1: 加用任何新抗生素,都要求有连 续的20-30天满意结果后,方可按指南 工作 注 2:质控可以在测试病人分离株之 前或之中进行. 报告结果则需在 QC 结果合格时.
纠控
仪器 • 硬件设备的维护与检修 • 软件程序的更新升级
注意事项
• 临时改变方法学，必须有文字记录， 并通知临床各科
谢谢
质量控制用标准菌株
• 用途 试剂的质量控制 培养基的质量控制 抗血清的质量控制 染液的质量控制
质量控制用标准菌株
• 种类
大肠埃希菌ATCC25922 大肠埃希菌ATCC35218 （仅被推荐用于B-内酰胺霉抑制剂复合药，如含克 拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦的复合药的试验质控。） 铜绿假单胞菌ATCC27853 金黄色葡萄球菌ATCC25923 粪肠球菌ATCC29212 （可用于监测M-H琼脂中药物抑制剂的水平是否低 得可以接受。也可用于高含量氨基糖苷类纸片的质控） 流感嗜血杆菌ATCC49247（HTM时用） 流感嗜血杆菌49766（HTM时用） 淋病奈瑟菌ATCC49226（GC琼脂时用） 肺炎链球菌ATCC49619（M-H羊血琼脂时用）
过氧化氢
氧化酶
处理临床标本的质量控制
• 标本的采集和运送 • 直接涂片 除血标本外的临床标本特别是痰标本应 做直接涂片 • 分离培养和鉴定 培养基的选择、培养方法、鉴定程序
处理临床标本的质量控制
• 标本的采集和运送 采集时间、操作全程无菌、采集样本量、 运送标本及时安全、特殊菌的采集、 • 直接涂片 意义
室间质评
• 必要性 发现系统误差促进和提高参控试验室的 理论水平和技术水平 室间质控是对室内质控的一种评价 促进各临床细菌室间的交流 有利于操作程序、方法的标准化和诊断 试剂的统一及商品化
室间质评
卫生部行业标准对临床细菌室室 间质评要求：
• ≥50％质控物为混合样本 • 要求操作者根据人口统计资料确定 需报告的病原菌 • 标本中含有细菌范围广，包括正常 菌群、条件致病菌和致病菌
培养基
血琼脂
质控菌株
化脓性链球菌 肺炎链球菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌
号码
ATCC19615 ATCC6305 ATCC25923 ATCC25922 ATCC43069 ATCC13090
鉴定标准
生长，ß -溶血 生长，α –溶血 生长 生长 生长 生长
巧克力琼脂
淋病奈瑟氏菌 脑膜炎奈瑟氏菌
流感嗜血杆菌
• 仪器 / 软件:
– 修仪器 – 1 天或多天 – 换硬件 (如温箱 ) – 20 - 30天
纠控
鉴定从以下几个方面进行（操作程序） • 标本的采集、运输 • 培养鉴定培养基的选择 • 鉴定方法流程（包括涂片染色） • 培养条件 • 仪器法的注意事项
纠控
药物敏感性试验从以下几个方面进行： • 培养基的制备（配方、厚度） • 抗生素的选择（效期、剂量） • 接种及贴纸片的过程 • 培养条件 • 判读
抗生素敏感性试验的质控菌株
细菌名称 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 绿脓假单胞菌 粪肠球菌 淋病奈瑟菌 流感嗜血杆菌 肺炎克雷伯菌 菌号 ATCC 25923 ATCC 29213 ATCC 25922 ATCC 27853 ATCC 29212 ATCC 49226 ATCC 49247 ATCC 700603 用途 纸片扩散质控 MIC测定质控 纸片和MIC 纸片和MIC 胸腺嘧啶含量测定 淋球菌药敏 嗜血杆菌药敏 ESBL阳性菌
临床微生物室质量控制
北京医院 艾效曼
内容提要
• 目的 • 涉及内容 室内质控 室间质评 • 建立方法及步骤（室内质控） • 纠控方法 • 范例 • 注意事项
细菌室质控工作目的及重要性
• 保证临床细菌检验技术更好地发挥 • 服务于临床 • 耐药监测
小结：临床细菌室（实验室〕的质量控制和方法 标准化是一对相互制约的矛盾，实验室只有建 立标准化方法学才可能进行质量控制才能获得 好的结果。而连续地质量控制可维护方法学的稳 定性和正确性，随时发现问题，解决问题。
质量控制用标准菌株
• 种类
金黄色葡萄球菌ATCC 29213 金黄色葡萄球菌ATCC 43300 粪肠球菌ATCC 51299 链球菌ATCC 49629（CAMHB时用）
抗生素敏感性试验的质量控制
• 方法学简介（纸片扩散法、肉汤和琼脂 稀释法、Etest法、仪器法） • 培养基 厚度4mm，是影响KB法准确性 最重要的因素 • 抗生素 • 培养条件 • 判读
试剂、染色液及抗血清 的质量控制
• 试剂的保存方法（温度、避光） • 染液 • 抗血清的质量控制
常用试剂的质量控制
试剂 凝固酶血浆 杆菌肽纸片 阳性质控菌种 阴性质控菌种 监控频度 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 每天 A群链球菌 B群链球菌 新制者：每 批，以后每 周 金黄色葡萄球菌 A群链球菌 每天 铜绿假单胞菌 大肠埃希氏菌 新制者：每 批
培养基的质量控制
• 制备培养基的记录 名称、配方、数量、灭菌、日期等 水质、PH ±0.2、 • 培养基的外观检查 颜色、透明度 • 无菌试验
培养基的质量控制
• 培养基的性能监测（1） 外观、灭菌、PH、平板深度、无菌试验、 硬度试验
Fra Baidu bibliotek
培养基的质量控制
• 培养基的性能监测（2） 液体及分离用培养基的质量控制
室内质控的方法建立及步骤
药物敏感性试验的质量控制建立步骤（续） • 如果30天监控结果完全符合上述要求，可转为 一周一次质控的方法 • 只要抑菌环直径超出可接收范围都必须校正 • 当失控原因不明时，可用相应质控菌株连续监 测 5 天；每种菌对质控中每种抗菌药物同时测 试 5 个抑菌环，如果结果全部达到可接收范围， 可恢复一周一次质控
质量控制用标准菌株（前言）
临床菌库建立 临床菌库组成 • 参考菌株 ATCC：美国典型菌株保存中心 NCTC：英国国家典型菌株保存中心 • 临床分离菌：实验中用标准方法鉴定，鉴定 值>95％典型菌株，并经多次传代，特征衡 定的菌株
临床菌库的用途
• • • • 科研 质量控制 新药评价 回顾性试验