方法学评价试验——重复性试验(TP)剖析
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酚试剂法（Lowry法） 蛋为白液非质；蛋显甘白色氨氮相酸，似，但，各可但种用能硫三满醇氯足)乙临，酸床颜沉要色深
ห้องสมุดไป่ตู้
比浊法（沉淀）
求淀，浅蛋是随白目不质前同而临蛋分床白离测质）定变，蛋化不白，适质较用的适于一合常种单 首规选一测方蛋定法白，。质目测前定多。用近于年蛋来白逐质渐的被定考
(3) 合成障碍。主要是肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白 蛋白的下降最为显著。
(4) 蛋白质丢失。大出血时大量血液丢失；肾病时尿液中长期丢失蛋白 质；严重烧伤时，大量血浆渗出等。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
蛋白质检测方法
测定原理（特有的结构和性质）
重复的肽链结构 酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收 与某些染料特异结合的能力 采用沉淀反应借助浊度或光折射原理测定 电泳的迁移率大小
(2) 血清蛋白质合成增加(主要是球蛋白的增加)。总蛋白可超过 100g／L，多见于多发性骨髓瘤病人。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
4．病理性降低：
(1) 血浆中水分增加，血浆被稀释。因各种原因引起的水钠潴留或输注 过多的低渗溶液。
(2) 营养不良或长期消耗性疾病。如严重结核病和恶性肿瘤等。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
分析测量范围(analysis measure range，AMR)是 指对没有进行任何预处理（稀释、浓缩等）的标本，分析方 法能够直接测定出的待测物的范围，也就是系统最终的输出 值（活性或浓度）与被分析物的活性或浓度成线性比例的范 围，即线性范围。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
准确度(accuracy)是指测定值与真值之间的 符合程度，由于真值实际上也是一个近似值，所 以准确度往往用不准确度来表示。
精密度(precision)是指在重复性条件下对同 一标本进行多次测定时，各测定值之间随机误差 的大小。精密度常用标准差(s)或变异系数(CV%) 来表示。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价试验
——重复性试验
实验目的与要求
掌握：批内精密度评价的基本原理、实验步骤及 统计方法。 熟悉：重复性实验的注意事项和评价标准。 了解：批间、日内及日间重复性实验的区别
方法学评价试验---重复性试验
什么是方法学评价
方法学评价（evalution of methodology）是 通过实验的途径客观评价实验方法及其试剂分析性能 的重要手段。其基本内容是通过实验途径，测定并评 价方法的精密度与准确度，在实验中测定的是不精密 度与不准确度，不论精密度还是准确度，强调的都是 误差，评价实验的过程就是对误差的测定。
临床可报告范围 (clinical reportable range，CRR)， 是允许应用样本稀释、浓缩和预处理后，分析方法可测定样 本中分析物的可靠范围浓度。CRR是扩展的AMR。
方法学评价试验---重复性试验
重复性试验
重复性试验是在相同条件下，用同一方法、同一试 剂和校准品、同一台仪器、在同一实验室由同一人操作 对同一标本在尽可能短的时间内进行多次分析测定（一 般为20次），以获得批内精密度实验数据。其结果反映 各次测定结果间相互接近的程度。其目的在于评价或验 证试验方法的随机误差或不精密度。 包括批内重复性试 验、日内重复性试验和日间重复性试验等。
方法学评价试验---重复性试验
批内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本， 在尽可能短的时间内平行测定20次；
日内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本， 在1天内作5轮，每轮4次测定，获得20个测定数据；
日间重复性试验是将同一材料分成20份实验标本， 每天测定1份，连测20天。
分别作统计处理即可测得候选方法的批内、日内和 日间的随机误差。
些氮氨5测基μg定酸，，)通，是常在蛋为10白2~01质~220测5g0/定μL浓g的，度参使范考用围方很内广
双缩脲法（肽键）
成法良泛，好，但的但由线花于形费操关时作系间复，长杂批（、内4费C0V~时值60＜分2钟%）。，
其（缺干8点~扰1是0因h灵）素敏，较度影多较响(低硫因(酸1素~铵2较0；m少gT)（，ri主不s缓要同冲
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
灵敏度(sensitivity)是指检测系统可检测出的 最低分析物浓度，或称检测限。
特异度 (specificity，SPE)，又称真阴性率 (true negative rate，TNR)，即实际无病按该 诊断标准被正确地判为无病的百分比。它反映筛 检试验确定非病人的能力。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
血清总蛋白质（ total protein ，TP）是血清中各种蛋白质的总称， 是血浆固体成分中含量最多的一类物质，具有维持血液正常胶体渗透压和 pH、运输多种代谢物、免疫、催化、营养作用等多种功能。 90%以上的血 清总蛋白由肝脏合成，如清蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原等，当 肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生 质和量的变化。临床上用各种方法检测血浆蛋白的含量来协助诊断肝脏疾 患，并作为疗效观察，预后判断的指标。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
蛋白质检测方法
化学法
18早83期年用建于立酪，氨是酸经和典色的氨蛋酸白的质定测量
此定法测方操定法作。。简该该便方法、法结准较果确双准、缩确重脲，复法精性反密好应度，灵
凯式定氮法（N）
干高扰敏，物1灵质00敏少倍度(左硫低右酸，，铵适检；用测Tr于i范s缓0围.2冲~最1液.低0；m可g某达
但由于肝功能有很大代偿能力及清蛋白半衰期较长，因此肝脏病变往 往达到一定程度和一定病程后才能出现血清总蛋白和清蛋白量的改变。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
1．生理性升高：剧烈运动后。
2．生理性降低：妊娠。
参考区间：65~85g/L
3．病理性升高（相对少见）：
(1) 血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高。常见于急性失水引 起血液浓缩(如呕吐、腹泻等)；休克时，毛细血管通透性发生变化， 血浆浓缩；慢性肾上腺皮质机能减退的病人，由于钠的丢失继发水分 丢失，血浆也发生浓缩。
ห้องสมุดไป่ตู้
比浊法（沉淀）
求淀，浅蛋是随白目不质前同而临蛋分床白离测质）定变，蛋化不白，适质较用的适于一合常种单 首规选一测方蛋定法白，。质目测前定多。用近于年蛋来白逐质渐的被定考
(3) 合成障碍。主要是肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白 蛋白的下降最为显著。
(4) 蛋白质丢失。大出血时大量血液丢失；肾病时尿液中长期丢失蛋白 质；严重烧伤时，大量血浆渗出等。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
蛋白质检测方法
测定原理（特有的结构和性质）
重复的肽链结构 酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收 与某些染料特异结合的能力 采用沉淀反应借助浊度或光折射原理测定 电泳的迁移率大小
(2) 血清蛋白质合成增加(主要是球蛋白的增加)。总蛋白可超过 100g／L，多见于多发性骨髓瘤病人。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
4．病理性降低：
(1) 血浆中水分增加，血浆被稀释。因各种原因引起的水钠潴留或输注 过多的低渗溶液。
(2) 营养不良或长期消耗性疾病。如严重结核病和恶性肿瘤等。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
分析测量范围(analysis measure range，AMR)是 指对没有进行任何预处理（稀释、浓缩等）的标本，分析方 法能够直接测定出的待测物的范围，也就是系统最终的输出 值（活性或浓度）与被分析物的活性或浓度成线性比例的范 围，即线性范围。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
准确度(accuracy)是指测定值与真值之间的 符合程度，由于真值实际上也是一个近似值，所 以准确度往往用不准确度来表示。
精密度(precision)是指在重复性条件下对同 一标本进行多次测定时，各测定值之间随机误差 的大小。精密度常用标准差(s)或变异系数(CV%) 来表示。
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价试验
——重复性试验
实验目的与要求
掌握：批内精密度评价的基本原理、实验步骤及 统计方法。 熟悉：重复性实验的注意事项和评价标准。 了解：批间、日内及日间重复性实验的区别
方法学评价试验---重复性试验
什么是方法学评价
方法学评价（evalution of methodology）是 通过实验的途径客观评价实验方法及其试剂分析性能 的重要手段。其基本内容是通过实验途径，测定并评 价方法的精密度与准确度，在实验中测定的是不精密 度与不准确度，不论精密度还是准确度，强调的都是 误差，评价实验的过程就是对误差的测定。
临床可报告范围 (clinical reportable range，CRR)， 是允许应用样本稀释、浓缩和预处理后，分析方法可测定样 本中分析物的可靠范围浓度。CRR是扩展的AMR。
方法学评价试验---重复性试验
重复性试验
重复性试验是在相同条件下，用同一方法、同一试 剂和校准品、同一台仪器、在同一实验室由同一人操作 对同一标本在尽可能短的时间内进行多次分析测定（一 般为20次），以获得批内精密度实验数据。其结果反映 各次测定结果间相互接近的程度。其目的在于评价或验 证试验方法的随机误差或不精密度。 包括批内重复性试 验、日内重复性试验和日间重复性试验等。
方法学评价试验---重复性试验
批内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本， 在尽可能短的时间内平行测定20次；
日内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本， 在1天内作5轮，每轮4次测定，获得20个测定数据；
日间重复性试验是将同一材料分成20份实验标本， 每天测定1份，连测20天。
分别作统计处理即可测得候选方法的批内、日内和 日间的随机误差。
些氮氨5测基μg定酸，，)通，是常在蛋为10白2~01质~220测5g0/定μL浓g的，度参使范考用围方很内广
双缩脲法（肽键）
成法良泛，好，但的但由线花于形费操关时作系间复，长杂批（、内4费C0V~时值60＜分2钟%）。，
其（缺干8点~扰1是0因h灵）素敏，较度影多较响(低硫因(酸1素~铵2较0；m少gT)（，ri主不s缓要同冲
方法学评价试验---重复性试验
方法学评价常用技术性能指标
灵敏度(sensitivity)是指检测系统可检测出的 最低分析物浓度，或称检测限。
特异度 (specificity，SPE)，又称真阴性率 (true negative rate，TNR)，即实际无病按该 诊断标准被正确地判为无病的百分比。它反映筛 检试验确定非病人的能力。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
血清总蛋白质（ total protein ，TP）是血清中各种蛋白质的总称， 是血浆固体成分中含量最多的一类物质，具有维持血液正常胶体渗透压和 pH、运输多种代谢物、免疫、催化、营养作用等多种功能。 90%以上的血 清总蛋白由肝脏合成，如清蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原等，当 肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生 质和量的变化。临床上用各种方法检测血浆蛋白的含量来协助诊断肝脏疾 患，并作为疗效观察，预后判断的指标。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
蛋白质检测方法
化学法
18早83期年用建于立酪，氨是酸经和典色的氨蛋酸白的质定测量
此定法测方操定法作。。简该该便方法、法结准较果确双准、缩确重脲，复法精性反密好应度，灵
凯式定氮法（N）
干高扰敏，物1灵质00敏少倍度(左硫低右酸，，铵适检；用测Tr于i范s缓0围.2冲~最1液.低0；m可g某达
但由于肝功能有很大代偿能力及清蛋白半衰期较长，因此肝脏病变往 往达到一定程度和一定病程后才能出现血清总蛋白和清蛋白量的改变。
血清(浆)总蛋白(TP)测定
血清总蛋白质检测有何临床意义？
1．生理性升高：剧烈运动后。
2．生理性降低：妊娠。
参考区间：65~85g/L
3．病理性升高（相对少见）：
(1) 血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高。常见于急性失水引 起血液浓缩(如呕吐、腹泻等)；休克时，毛细血管通透性发生变化， 血浆浓缩；慢性肾上腺皮质机能减退的病人，由于钠的丢失继发水分 丢失，血浆也发生浓缩。