地中海贫血基因检测系统

z 2 e2
a2 g2
a 2 b2
(a2d2)
-地中海贫血

α-地中海贫血（简称α-地贫）是一种由于α-珠蛋
白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因 遗传血液病。多由α-珠蛋白基因的缺失突变所 致。 研究发现中国地区常见的3种 α-地贫主要由 -SEA、-α3.7、 -α4.2缺失(左缺失）引起。
654M/71-72M
17M/N
β EM/β EM
41-42M/N
公司地贫产品市场
1
2
3 4
华南地区:广东,广西，海南 西南地区:四川,贵州 福建、江西 湖北
市场上同类产品生产厂家

益生堂(深圳创益生物科技) 广州达安 上海博星



上海透景公司
地贫的临床治疗和预防

Leabharlann Baidu治疗

定期输血 定時注射除铁药物 骨髓或脐带血移植 基因治疗 遗传咨询 基因筛查 产前检查
a2a1T< a2- < - a1<a2Ta1< -a1T < - -
b地贫的基因型与表现型
• 重型b-地中海贫血 b＋/ b＋、b0/ b0 、b0/ b＋ 所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中 （纯合子或双重杂合子） 海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体
积小且低色素。过剩的游离α链形成α链包 涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。
M DNA Marker 1. (aa /aa ) 1.8kb 2. (aa / -a 4.2) 1.8kb; 1.6kb 3. (aa / -a 3.7) 2.0kb; 1.8kb 4. (-a 4.2 / --SEA ) 1.6kb; 1.3kb 5. (-a 3.7 / --SEA ) 2.0kb; 1.3kb 6. (aa/--SEA ) 1.8kb; 1.3kb
于42℃轻摇洗涤15分钟
显 色



1）POD溶液孵育30分钟 2）洗涤 用A液室温洗两次，每次5分钟。 3）显色 将膜条浸泡于显色液中避光显色10-15分钟即可 见斑点显现。
N/N
654M/N
41-42M/N
结果判读
41-42N 41-42M 43M 654N 654M －32M －28N －28M －29M 71-72N 71-72M －30M 17N 17M 14-15M β EN β EM CAP 31N 31M IntM 27/28M IVS1-1M IVS1-5M
缺失型 -a4.2 /-n 39 38 9 11 7 17 121 % 28.7 27.9 16.4 40.8 18.4 7.5 19.6 2 2 -a2.7 /-n % 1.5 0.3
广西 广东 四川 江西 香港 台湾 合计
136 136 55 27 38 225 617
a地贫疾病严重程度的单倍型顺序
频率(%)
2.54 0.92 0.63
--SEA
-a3.7
-a4.2
-aCS --THAL -aQS --11.1 ξ-a-gene缺失
0.95
0.18 0.04 0.04 0.02 0.02
-28
CD26 CD17 CD71-72 CD43 -29 CD27-28
0.42
0.13 0.10 0.09 0.09 0.05 0.05
地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一
地中海贫血

地中海贫血的共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红 蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成， 致使血红蛋白的组成成分改变。

地中海贫血分为α-地中海贫血和β-地中海贫血。
人类不同时期血红蛋白的组成

胚胎期血红蛋白：

Hb Gower 1 （x2 e2 ） Hb Gower 2 (a2 e2) Hb Portland (x2 g2) 即Hb Portland 1 另有少量Hb Portland 2 (x2 b2)，Hb Portland 3 (x2 d2) HbF （a2 g2 ） HbA （ a2 b2）约占血红蛋白总量96.5—97.5% HbA2 （a2 d2 ） 约占血红蛋白总量2.5—3.5% HbF （ a2 g2）约占血红蛋白总量1%以下。
肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，HbH含 量
较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血， 症重
Hb H disease (- α 3.7/--SEA) (- α 4.2/--SEA)
者甚至需切除脾脏。
a地贫的基因型与表现型
• Hb Bart’s 水肿胎儿综合症 －4个a基因缺失或丧失功能
患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水
地中海贫血基因检测 在临床诊断上的应用
亚能生物技术（深圳）有限公司
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地中海贫血

地中海贫血，又称海洋性贫血，是一种常见的 单基因遗传性溶血性血液疾病。 广泛分布在全世界沿海地区。 中国常见于东南沿海、西南 地区以及台湾地区。


地中海贫血的分布
注： a -珠蛋白基因型 PCR产物片段长度 • -a 3.7
•aa • -a 4.2 •--SEA 2.0kb 1.8kb 1.6kb 1.3kb
β-地中海贫血基因诊断


可对17个突变位点 (8个常见位点及9个少见位点)进行 检测 合理的探针设计明显减少了非特异性杂交反应的发生。 位点设计更合理，绝大部分突变位点都有相应正常对照， 结果易于判定

β-地贫基因诊断；携带者检出
HBB gene
HBB1
HBB2
HBB3
41
42
71
72
654
41-42M/N
71-72M/654M
β-地中海贫血基因诊断操作流程
PCR扩增

用生物素标记的引物扩增待测样品DNA
PCR-Mix-I DNA模板 Total 23μL 2μL 25μL
50℃ 95℃ 94℃ 50℃ 72℃ 72℃

-
α-地贫基因缺失示意图
a2 a1 a2 -a3.7 -a4.2 --SEA a1 1
b-地中海贫血

b-地中海贫血是一种由于b-珠蛋白基因突变导致
肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，
多由b-珠蛋白基因点突变所致。

在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M，
-28M， IVS-II-654M，CD71-72M等

预防

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胎儿期主要血红蛋白：

成人主要血红蛋白：

血红蛋白
Chromosome 16 a-globin gene cluster
Hemoglobin
z a2 a1
e
Chromosome 11 b-globin gene cluster
g
g
d
b
EMBRYONIC
FETAL
ADULT
Predominant Haemoglobin
Hb Bart's Hydrops (--SEA/--SEA)
肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成a亚基，脐血 血红蛋白（ Hb Bart’s ，g4）含量高。
中国南方HbH病基因的主要构成
省份
例数
n
非缺失型 aaT/--、aaT /aaT n 60 27 19 8 5 114 233 % 44.1 19.9 34.5 29.6 13.2 50.7 37.8 -a3.7 /-n 35 71 27 8 26 94 261 % 25.7 52.2 49.1 29.6 68.4 41.8 42.3
地区
广州 广西 携带率（％）
α 地贫 β 地贫
8.53 14.95
2.54 6.78
四川
贵州 台湾 香港
1.92
4.20 5.02
2.18
4.72 1.10 3.41
广州人群中地贫的携带者频率
基因变异
a 地贫
频率(%)
8.53 4.14 3.10
基因变异
b 地贫 CD41-42 IVS-2-654
a1CD118(+TCA) 0.02
未知突变
0.04
b-gene 缺失
0.01
0.04
未知突变
a地贫的基因型与表现型
• 正常
Normal (αα/αα)
• 静止型－单一α基因缺失或丧失功能 临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅
α+ thal trait (αα/-α3.7) (αα/-α4.2)
突变类型

编码区的移码突变、无义突变和起始密码突变：
如CD41-42，CD71-72 ，CD17突变后形成终止子，表现 为b0。

非编码区IVS-1和IVS-2突变
如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为b＋。

影响转录的突变：
如-28，-29的突变影响基因的转录，表现为b＋ 。
中国南方α和β地贫的人群携带率
15min 10min 1 min 30s 30s 5min
35 cycles
变性及杂交

取15 mL 塑料离心管，放入膜条，加入A液5-6 mL及PCR 产物。将塑料管放入沸水中加热10分钟，取出拧紧盖子， 放入42℃杂交箱杂交1.5—4小时。
洗膜
取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中，
平均红细胞体积(MCV) 位于正常值下限。
a地贫的基因型与表现型
• 标准型－2个α基因缺失或丧失功能
临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细 胞大小不均一，平均红细胞体积(MCV) 及平均
αo Thal trait (αα /--SEA) ( - α/ - α)
血红蛋白含量(MCH)明显偏低。
•血红蛋白H病－3个α基因缺失或丧失功能
海贫血。 可检出无临床症状的静止型a-地贫（aa/ -a3.7、 aa /-a4.2），


应用：婚前检查、产前检查及产前诊断。
a -地中海贫血基因诊断操作流程
待测样品DNA的制备

全血DNA快速提取试剂盒

应用

全血DNA的提取 培养细胞基因组DNA的提取

注意事项


抗凝剂:不能用肝素。 红细胞裂解 干燥环节：乙醇干燥须完全,有机溶剂抑制PCR扩增.
• 轻型b-地中海贫血
bA/ b＋、bA/ b0 （杂合子）
患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。 红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCV、 MCH较低。
b地贫的基因型与表现型
• 中间型b-地中海贫血 b＋/ b＋、b＋/ b0 患者临床症状介于重型和轻型之间，如中 （纯合子或双重杂合子） 度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血
液检查呈小细胞低色素贫血症。
中国南方高发区的主要突变类型
广州 突变类型 n CD41-42 654 -28 CD17 CD71-72 Cd26 -29 CD43 184 100 67 41 15 11 10 9 % 40.7 22.1 14.8 9.1 3.3 2.4 2.2 20. n 202 228 44 38 3 9 1 1 % 36.3 40.7 7.9 6.8 0.5 1.6 0.2 0.2 n 45 20 7 9 0 1 1 % 47.9 21.3 7.4 9.5 0 1.1 1.1 n 83 12 36 36 4 4 3 % 44.2 6.4 19.2 19.2 2.1 2.1 1.6 n 17 9 6 24 1 7 1 % 23.6 12.5 8.3 33.4 1.4 9.7 1.4 n 17 7 1 16 0 1 0 % 40.5 16.7 2.4 38.1 0 2.4 0 n 12 17 3 3 1 3 2 % 29.3 41.5 7.3 7.3 2.4 7.3 4.9 n 14 13 1 4 0 1 1 % 41.2 38.3 2.9 11.8 0 2.9 2.9 台湾 香港 广西 四川 贵州 湖北 福建
广州市主要出生缺陷的发生率 (1998-2001)
排序 1 2 3 4 5 出生缺陷 先天性心脏病 重型a地贫 多指 肢体短缩 唇裂/腭裂 例数 260 208 200 111 109 发生频率 (/10000) 19.66 15.73 15.12 8. 39 8.24
a-地中海贫血基因诊断

可同时检测 --SEA、-a3.7、-a4.2等3种缺失型a-地中
PCR扩增
PCR反应液Mix-A DNA模板 Total 96℃ 98℃ 64℃ 72℃ 72℃ 21μL 4μL ( 200-500ng) 25μL 15min 45s 1min30s 3min 5min
35 cycles
a-地中海贫血基因诊断试剂盒：
----采用电泳结果判读
M 1 2 3 4 5 6 M