猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较分析
三种常见猪肺炎支原体疫苗的免疫效果对比试验
三种常见猪肺炎支原体疫苗的免疫效果对比试验胡晓;韦学凤【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2023(50)2【摘要】为筛选出适合内江猪保种场的最佳猪肺炎支原体疫苗,本试验选用市场上常见的三种商品化疫苗进行免疫效果对比。
将60头刚出生的健康哺乳仔猪随机分成三组,于7日龄接种疫苗,A组接种A疫苗,B组接种B疫苗,C组接种C疫苗,试验猪分别于7、30、60日龄采血并分离血清,进行ELISA抗体检测。
结果显示:7日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率均为0;30日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为80%、20%、90%;60日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为90%、20%、100%。
从ELISA抗体检测结果来看,以C组免疫效果最好。
本试验同时对仔猪的体重、料肉比、呼吸道病发病率等指标进行了观察统计,结果得出:60日龄时,A、B、C三个试验组的平均体重为11.325、13.546、11.632kg;料肉比分别为2.28、1.95、2.03;呼吸道发病率分别为4.35%、2.21%、3.39%,从料肉比及呼吸道发病率来看,以B组效果最好。
【总页数】3页(P26-27)【作者】胡晓;韦学凤【作者单位】四川省内江市畜牧业发展中心;西南大学动物科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.52【相关文献】1.三种奶牛口蹄疫疫苗免疫效果对比试验2.猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验3.猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价4.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估5.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪支原体肺炎的的药物和疫苗预防分析
猪支原体肺炎的的药物和疫苗预防分析猪支原体肺炎的的药物是初期的防治措施，那个时候，猪的疾病还不是特别复杂，生物环境也相对净化的比较好，而随着规模的不断扩大，科技和产业的不断交流融合，猪的疾病也随之复杂化，为了有效应对猪气喘病，猪支原体肺炎疫苗也被研发出来，目前市面上的猪地方性肺炎有灭活和弱毒疫苗两类，他们之间的免疫和防治猪支原体肺炎的效果如何呢?相对之间有哪些区别呢?猪支原体肺炎的药物防治：(1)尽管使用四环素类药物如金霉素、土霉素、多西环素等可以控制猪肺炎支原体在呼吸道黏膜的感染，以及使用大环内酯类药物如泰乐菌素、泰万菌素、替米考星可以控制猪肺炎支原体在肺部的感染，但是猪肺炎支原体在猪群感染具有持续性与群体性特征，因此长时间使用上述两类药物控制猪肺炎支原体感染是不可行的，同时是不现实的。
(2)药物预防可以降低猪肺炎支原体在猪群中感染水平，减少带毒和排毒，特别是在潜伏性感染和排毒机会更大的初产母猪以及在应激条件下的断奶仔猪与生长育肥猪群。
(3)药物治疗可以减轻感染肺炎支原体猪只的临床症状，但不能改善感染肺炎支原体导致的肺组织损伤。
猪支原体肺炎的疫苗免疫：目前用于猪支原体肺炎免疫的疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两大类，灭活疫苗以进口为主，国产灭活疫苗这两年陆续上市，弱毒疫苗以国产为主。
灭活疫苗在疫苗佐剂方面有独到之处，采用肌肉接种，接受程度较高，主要产生体液免疫，黏膜免疫弱。
弱毒疫苗采用肺内注射，可产生较强的局部黏膜免疫、细胞免疫、体液免疫、占位效应作用，在猪场形成优势菌群利于猪肺炎支原体自然净化。
弱毒苗除了比灭活苗在减轻肺部病变、提高日增重和饲料转化率方面显现更加明显的优势外，因可以有效建立起黏膜免疫，以及起到占位效应作用，因此在阻止猪肺炎支原体感染方面与灭活苗相比同样显示出不可比拟的优势。
猪支原体肺炎活疫苗和灭活疫苗性能对比：1、市场角度：(1)中国有近1亿多土猪或带有土猪血缘的内三元猪，对猪肺炎支原体感染敏感并会造成临床发病以及较大经济损失。
211088004_猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价
312023年40卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学主题策划F E A T U R E猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原，由于感染后临床症状不明显，多以慢性消耗性感染为主，猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。
但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞，导致其他呼吸道病原体频繁入侵，是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）的重要诱因。
因此，猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。
1 猪肺炎支原体的感染率猪肺炎支原体只感染猪只，该病原随着养猪业的发展分布于全球各地。
如果没有特意净化，几乎全世界所有的国家和猪场都有发现，并且有超过70%以上的猪群感染。
从美国国家猪病报告系统（SDRS ）2020—2022年的统计数据来看，猪场猪肺炎支原体整体阳性率在10%～30%左右，母猪场和育肥场阳性率差异不大。
阳性率随季节变化而波动，每年的9—12月是肺炎支原体阳性率较高的季节，如图1所示。
对于母猪来说，感染率随着胎次的增加而下降，头胎次占73%，2～4产次为42%，6～7产次为50%，而8～11产次为6% 。
因此，猪场的保育猪、育肥猪和后备种猪是防控猪支原体肺炎的关键群体。
2 猪肺炎支原体疫苗是否需要免疫关于猪肺炎支原体疫苗是否需猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价张择扬 1，张 军 2（法国诗华动物保健公司，北京 100102）图1 不同日龄阶段猪群肺炎支原体阳性率变化曲线（SDRS 2020—2022）图2 不同感染压力的猪场免疫建议（D. Maes ）要免疫，一直是个有争议的话题。
赞同的观点认为猪肺炎支原体危害巨大，是其他呼吸道病原的“共犯”，要坚决堵死防疫漏洞，必须免疫。
而反对的观点则认为自己的猪场支原体的感染压力看上去不大，也不知道如何评估；另一方面认为就算投资进行猪肺炎支原体免疫，也不知道怎么去看免疫效果。
对于猪场支原体是否免疫，全球著名支原体专家Dominiek Maes 给出了他的答案，他认为这取决于猪群的感染压力。
猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
211088012_猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估
50猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第3期主题策划F E A T U R E猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）感染可导致种猪繁殖障碍以及生长育肥猪生长缓慢、日增重降低、料重比升高，并发其他疾病，导致死亡率增加等。
猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae ，M.hyo ）遍布世界上绝大部分养猪国家，是猪呼吸道综合征（PRDC ）的原发性病原之一，可造成养猪生产严重的经济损失。
疫苗免疫是控制这两种疾病的最重要手段，PCV2与M.hyo 两种疫苗免疫时间接近，免疫持续期要求类似（越长久越好）。
圆支二联疫苗可以减少注射次数，节省劳力，降低猪的应激，有利于生物安全管理。
本试验对猪圆环支原体二联疫苗免疫的猪群进行跟踪，综合生产数据、实验室检测以及屠宰场评分等评估其安全性和有效性。
1 材料与方法1.1 试验动物及材料选择猪蓝耳病和猪伪狂犬病均为阴性的规模猪场中3周龄健康、体重相近的断奶仔猪240头为试验动物开展试验。
试验用疫苗：A 厂家圆环灭活疫苗，法国诗华猪圆环支原体二联疫苗（诗圆静®，2 mL/ 头份）。
猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估吴丽艳 1，全雪容 1，张冰洁 1，申世川 2，赵永旭 3，戴江河 2，齐小东 2，秦 云 2，张 军 2（1.佳和农牧股份有限公司，湖南 长沙 410016；2.法国诗华动物保健公司，北京 100102；3.诗华SSIU ，浙江 杭州 310018）作者简介：吴丽艳（1981—），女，佳和农牧股份有限公司，中级兽医师，硕士，主要从事养猪生产模式优化和生产操作以及丹系母猪饲养管理研究，E-mail ：***************1.2 试验设计与分组将240头断奶仔猪，随机分为2个组，每组120头。
对照组在3周龄肌注A 疫苗1头份；试验组在3周龄肌注2 mL 诗圆静®（圆支二联疫苗）。
4种猪支原体肺炎疫苗免疫效果的对比研究
保育出栏重分析。各试验组保育均重差异性不显著， 最大为疫苗B组，其大小为疫苗B组>疫苗A组>疫苗C组>疫 苗D组>空白对照E组。空白对照组，免疫生理盐水，其均 重最低，同最高的疫苗B组相差了1.12 kg，且其95%置信区 间最宽、变异系数最大，说明其均匀度相对其他疫苗组较 差[3]。
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11
Experimental research | 试验研究
表1 不同支原体疫苗对保育出栏重的影响
组别
疫苗A
疫苗B
疫苗C
疫苗D 空白组E
头数
85
91
89
83
40
12.74a± 均重/kg
1 试验方法
1.1 试验动物及分组 选一栋产房（50头母猪）同期分娩仔猪，每窝选出9头
仔猪（共450头），初生重不低于1 kg，随机分成A、B、 C、D、E5个组，A、B、C、D为疫苗组，每个组100头仔 猪，每窝分别2头；E为对照组，共50头仔猪，每窝1头。免 疫前按要求打好耳缺并加打双耳牌，标识分别为A1-100、 B1-100、C1-100、D1-100、E1-50，以区别不同的组别。 1.2 疫苗
每组随机抽取10头试验动物于出栏前（180日龄）屠 宰，根据MADEC评判标准进行盲评并记录。根据肺部损伤 面积百分比率，将0～10%记为1分；11%～20%记为2分； 21%～30%记为3分；31%～40%记为4分，41%～50%记为5 分，统计每个试验猪肺部病变指数，用统计学方法进行分 析。
猪支原体肺炎活疫苗与灭活苗比较分析
大提 高 了疫 苗 的免 疫 原性 。瑞 富 特应 用 Ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｐ ｏ ｌ 水 质佐
剂 ，它是 一种 交 联的 丙烯 酸 聚合 物 ，具 有 ５项 主要 功 能 ： ①有 效浓 缩 抗 原 ；② 使 不溶 的成 分 持 久 悬 浮 ；③使 水 包
毒 活疫苗和灭活苗的优缺 点进行比较分析 ，以期为猪肺 体产 生较 强 的体液 和 细胞 免疫 应答 。 瑞 富特 灭活 苗 由美 国辉 瑞 公 司生 产 ，选 用二 乙 烯 亚 胺 （ Ｂ Ｅ Ｉ ）作 为 灭活 剂 ，使 Ｐ ９ ７ 蛋 白暴 露 出来 （ Ｐ ９ ７ 蛋白 被普 遍 认 为是 保护 性 抗原 ） ，可 诱 导机 体 产生 更 好 的局部
和 双 重 佐 剂 的 疫 苗在 田 间显 示 出对 猪支 原 体 肺 炎 较为 理
产的 “ 茵格发” ， 西班牙海博莱公司生产的 “ 喜可舒”等，
这 些疫 苗 都 是 利 用新 型佐 剂 研 制 成 功 的 猪肺 炎 支 原 体 灭
想 的控制效果。现仅从以下几个方面对猪肺炎支原体 弱 活疫苗 ， 并进行 了商 品化生产 ， 其共 同点是可以刺激机
猪 支原体肺 炎活疫 苗 与灭活 苗比较分析
王 留 ／河南 商丘 职业 技 术学 院动 物工 程系
猪支 原 体肺 炎是 由猪肺 炎支 原 体 引起 的 一 种慢 性 呼 而 对 照组全 部发 病 。 吸道传染病 ， 又 称 猪 气 喘病 和 猪地 方 流 行 性 肺 炎 ， 广 泛 猪肺 炎支 原 体 １ ６ ８ 株 无细 胞 弱毒 苗于 ２ ０ ０ ６ 年 由江苏 流 行 于 世 界 各 养 猪 国家 和 地 区 ， 是 一 种 顽 固性 慢 性 传 染 省 农 科 院 兽 医研 究所 和 南 京 天 邦生 物 科 技 有 限 公 司研 制
评价猪支原体肺炎疫苗使用效果的4个方法，您知道吗？
评价猪支原体肺炎疫苗使用效果的4个方法，您知道吗？一、临床观察通过试验猪的临床症状记录，对对照组猪群和试验组猪群的发病情况和副反应情况进行比较，主要记录咳嗽指数和过敏反应两个指标。
（1）咳嗽指数统计方法：以典型的连续性干咳为统计目标，测定咳嗽指数，方法如下：对每栋猪舍的猪进行随机选择（以栏为单位），通过喊叫、拍手和惊吓三分钟后的一段时间观察，咳嗽十秒后不再咳嗽，计下咳嗽数。
对同一批猪，重复一次，并以同样的方式对另一批猪进行测试；或对每栋猪舍的猪进行随机选择（以栏为单位），通过喊叫、拍手和惊吓三分钟后的一段时间观察，计下连续性干咳猪头数，对同一批猪间隔一周后重复计数，计算平均值。
平均咳嗽指数=咳嗽猪的数量/总检测的猪数×监测总时间。
（2）过敏反应数：免疫后一天内出现呕吐、呼吸困难、抽搐、精神委顿、食欲减退的猪只数，不同症状出现在同一猪只时，不重复计数。
免疫过敏反应率=过敏头数/免疫头数×100%；二、生产性能记录免疫组和对照组各阶段均重和饲料消耗量等指标或从对照组猪群和试验组猪群中抽样进行检查测定其出栏体重和饲料消耗量等指标，比较对照组猪群和试验组猪群生产性能，关键参数如下：（1）断奶均重=断奶总重/断奶头数；（2）免疫到断奶死亡率=[（免疫头数－断奶头数）/免疫头数]×100%（3）保育转育肥均重=转育肥总重/转育肥头数；（4）保育期平均日增重=（保育转育肥均重－断奶均重）/保育期天数。
（5）保育期料肉比=保育期料耗/转育肥总重（6）保育期死淘率=[（断奶头数－转育肥头数）/断奶头数]×100%（7）出栏均重=出栏总重/出栏头数（8）育肥期料肉比=育肥期料耗/出栏总重（9）育肥期平均日增重=(出栏总重－转育肥总重）/育肥天数（10）育肥期死淘率=[（转育肥头数－出栏头数）/转育肥头数]×100%（11）全程料肉比=全程料耗/出栏头数（12）全程死淘率=[（免疫头数－出栏头数）/免疫头数]×100%（13）全程药费三、观察肺部病变每个猪场在猪出栏后跟踪到屠宰场按屠宰顺序进行抽样，从对照组和试验组中各抽样10头，观察屠宰后肺部病变，根据Madec F和Kobisch M评判方法记录左尖叶、左心叶、左膈叶、右尖叶、右心叶、右膈叶、副叶病变百分比率，将0～25%记为1；26～50%记为2；51～75%记为3；76～100%记为4，统计每个试验猪肺部病变指数（最高为28）。
猪气喘病防控大家谈：疫苗的选择及接种方式大PK？
猪气喘病防控大家谈：疫苗的选择及接种方式大PK？问题1：猪场如何选择猪支原体肺炎疫苗？怎样评价疫苗的免疫效果？吴家强（山东省农业科学院畜牧兽医研究所研究员）猪场选择猪支原体肺炎疫苗可根据猪场实际情况、疫苗性价比等综合考虑，相对来说，国产疫苗价格较低。
如果选择灭活疫苗，其抗原含量足够，一针免疫也可以，但建议两针免疫，因为其免疫应答持续时间更长。
猪支原体肺炎对猪群的影响主要表现在三方面：一是引起猪的剧烈咳嗽、气喘；第二，影响饲料转化率；第三，影响出栏时间，如果有猪肺炎支原体感染，猪的出栏时间可从5个半月延长到至少6个月。
评价疫苗免疫效果的指标也与之有关，首先，看使用疫苗后中大猪咳嗽、气喘等临床症状是否减轻；其次，看生长速度和饲料转化率；另外，看屠宰猪肺部病变程度，肺脏肉变程度越轻，说明猪肺炎支原体感染控制得越好。
陈杰（海南罗牛山畜牧有限公司技术服务总监）猪场是否免疫猪支原体肺炎疫苗？肯定是猪和猪场条件说了算，猪场决策人员会结合猪场的实际情况决定是否免疫及制定合适的免疫程序。
一般来说，一条龙的传统养猪场，如果使用灭活疫苗，选择两针免疫的效果会更好；如果是两点式、三点式生产，从性价比角度考虑，也可以选择一针免疫，当然，如果猪场比较注重猪肉产品质量，为减少抗生素的使用，选择两针免疫更好，因为一旦未控制好，可能导致大猪发病，届时难免会使用抗生素等药物。
王保有（天津市宁河原种猪场兽医总监）疫苗的选择和评价要考虑投入产出比。
主要根据以下两个指标来选择猪支原体肺炎疫苗：一是疫苗免疫后，猪群气喘的症状减轻了多少；二是日增重、料肉比的变化。
在评价猪支原体肺炎疫苗的免疫效果时，除了前述两个指标，还会结合直观看到的屠宰猪肺部病变情况来综合考量。
张国龙（重庆南方金山谷农牧有限公司生产技术总监）从毒株、抗原含量和佐剂三方面来选择猪支原体肺炎疫苗。
譬如，对于灭活疫苗，要求每头份抗原含量不低于107.0TCID50；佐剂：要求抗原融合性好，产生免疫力快，无应激，无诱发猪圆环病毒病的风险。
猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗联合免疫效果评价
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为探寻一种更加合理高效的猪支原体肺炎（MPS ）免疫方式，本研究使用MPS 弱毒疫苗进行基础免疫后14 d 再使用灭活疫苗进行加强免疫，通过人工感染猪肺炎支原体来评价其免疫效果。
同时将这种免疫程序在规模化猪场进行应用，通过计算一定时期内的日增重来评价其免疫效果。
结果显示：联合免疫在保证黏膜免疫效果的同时并未降低体液免疫水平；更为重要的是，联合免疫不但具备较高攻毒保护率，而且在攻毒后剖杀时其肺泡灌洗液中抗原含量远低于其他免疫方式。
以上结果表明，联合免疫可以产生较好的免疫协同作用，从而提高了机体的综合免疫保护能力。
田间试验结果发现：联合免疫组猪群从21日龄至80日龄平均增重27.31 kg ，比活疫苗免疫组猪群多增重3.02 kg ，比灭活疫苗免疫组猪群多增重3.73 kg ；其平均日增重可达0.46 kg/d 。
本研究为防治猪支原体肺炎提供了新的思路。
关键词：猪支原体肺炎活疫苗和灭活疫苗；初免-加强免疫策略；攻毒保护；日增重中图分类号：S858.28文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）04-0089-07Evaluation of the Combined Vaccination Strategy of Attenuated and InactivatedVaccines against Mycoplasma hyopneumoniae Infection收稿日期：2021-03-01基金项目：江苏省农业科技自主创新资金项目（CX(20)1006）作者简介：郝飞，男，博士，助理研究员，主要从事动物支原体感染与黏膜免疫防控技术研究；白昀，男，硕士，副研究员，主要从事动物支原体感染与黏膜免疫防控技术研究通信作者：冯志新，E-mail:***************猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗联合免疫效果评价郝 飞1,2，白 昀1,2，袁 厅1,2，张 磊1,2，刘蓓蓓1,2，谢 星1,2，韦艳娜1,2，甘 源1,2，熊祺琰1,2，邵国青1,2，冯志新1,2（1. 江苏省农业科学院兽医研究所 农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，南京210014；2. 兽用生物制品（泰州）国泰技术创新中心，泰州 225300）2023,31(4):89-95Abstract: In order to explore a more reasonable and effi cient immunoprotection method for Mycoplasmal pneumonia of swine (MPS), a combined vaccination strategy was developed in the present study. Piglets were primed with the attenuated Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp) vaccine and then boosted with the inactivated vaccine 14 days later. The vaccinated piglets were challenged with the virulent strain to evaluate the effi cacy of this combined vaccination method. At the same time, this immunization procedure was applied on the large-scale pig farms, and the effi cacy was evaluated by comparing the daily weight gain of piglets at different stages. The experiment result shows that the combined vaccination with the attenuated vaccine and inactivated vaccine did not reduce the humoral immunity level while ensuring the mucosal immunity effect. More importantly, the combined vaccination not only provided better protection but also reduced the Mhp antigen level in bronchoalveolar lavage fluid. These results indicated that the combination of Mhp attenuated vaccine with inactivated vaccine had good immune synergism and enhanced host immunoprotection. The fi eld experiment showed that the averageHAO Fei 1,2, BAI Yun 1,2, YUAN Ting 1,2, ZHANG Lei 1,2, LIU Beibei 1,2, XIE Xing 1,2, WEI Yanna 1,2,GAN Yuan 1,2, XIONG Qiyan 1,2, SHAO Guoqing 1,2, FENG Zhixin 1,2(1. Key Laboratory for Veterinary Bio-Product Engineering, Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. GuoTai (Taizhou) Center of Technology Innovation for VeterinaryBiologicals, Taizhou 225300, China)· 90 ·中国动物传染病学报2023年8月猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS）又称猪气喘病或猪喘气病，是一种由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp）感染引起的以咳嗽、气喘、腹式呼吸和生长速度缓慢为主要特征的慢性呼吸道传染病。
猪场如何选择猪支原体肺炎疫苗？
猪场如何选择猪支原体肺炎疫苗？猪，又称猪喘气病或猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性慢性呼吸道传染病，普遍存在于世界各地。
单纯的支原体感染一般不引起猪只死亡，但容易继发其他呼吸道病原的感染，是造成养猪业经济损失的主要疾病之一。
作为一种慢性消耗型疾病，猪支原体肺炎主要表现为咳嗽、气喘；生长迟缓，饲料转化率低；发病慢、病程长；发病率高，死亡率低。
各种年龄的猪都可感染本病。
在大部分的情况下从感染到表现临床症状大约是4周。
依据喘气病发生的时间可分为早发型（10周龄以前），中发型和晚发型（16周龄以后）。
仔猪对猪肺炎支原体的易感性较高，容易形成早期感染，在亚洲国家猪支原体肺炎大都属于早发型。
由于猪肺炎支原体破坏呼吸道的防御系统，强化呼吸道细菌和病毒的继发感染，在猪呼吸综合征中扮演重要角色，有效控制猪肺炎支原体的感染，有利于减少猪呼吸综合征带来的经济损失。
初步统计，该病每年给我国造成的直接经济损失高达40亿元，接种是防控该病的重要途径之一。
研究表明，疫苗可以使肺部支原体肺炎病变减少50% 到80%。
显著降低支原体肺炎的临床症状。
提高日增重2%~8%，提高饲料转化率2%~5%，提高产肉量和肉品质量，降低动物死亡率，节约治疗费用。
但是支原体疫苗无法阻止支原体感染，ELISA抗体与保护之间无显著相关性。
在许多国家，有超过70%的猪群使用猪支原体肺炎疫苗对该病进行防控。
虽然许多抗生素类药如泰乐菌素、四环素、土霉素、卡那霉素、金霉素等及喹诺酮类药，对猪支原体肺炎均有效，但不能彻底根除猪肺炎支原体，这是因为抗菌剂的使用有其受限的地方，大多数抗菌剂无法接近在纤毛外围的微生物，不能阻止再感染，而且停药后往往容易复发。
因此，疫苗免疫配合使用抗生素更经济有效，这也意味着制定完整的猪支原体肺炎疫苗计划非常重要。
目前国内市场上的猪支原体肺炎疫苗有弱毒活疫苗、灭活疫苗两类。
有资料表明，从疫苗临床应用效果看，弱毒疫苗、灭活疫苗均能显著减少试验动物肺炎病变，两类疫苗间没有明显的差异。
猪肺炎支原体灭活疫苗使用效果观察_王林
针对性地进行免疫。
３．２致水肿病大肠杆菌血清型流行规律的探讨，在分离的３２株致病性菌株中，有３株不能鉴定出血清型，占整个致病性菌株的１０．７％。
这预示着致病性大肠杆菌新的血清型的出现，将会增加水肿病的预防难度。
３．３国内外进行预防仔猪水肿病的各种类型疫苗研究，取得了一定进展，血清型鉴定结果显示，大肠杆菌多致病血清型的存在，给防制工作增加了难度。
而优势血清型的确定，可用相应血清型制备疫苗，并为最大限度的控制该病提供了条件。
通过以上的研究可以看出，致水肿病大肠杆菌流行病学具有极其复杂的特征，这也是仔猪大肠杆菌病难以采取针对性预防的关键所在。
因此，定期对猪场的致水肿病大肠杆菌进行分离鉴定，选用具有针对性的菌株作为抗原制备菌苗，配以敏感的药物治疗和良好的卫生措施，才能收到较好的防治效果。
参考文献［１］张心如，杜干英，张炜．仔猪水肿病综合防制技术的研究［Ｊ］．养猪，１９９８，（２）：３８～４２．［２］傅伟文．仔猪水肿病的防治［Ｊ］．广西畜牧兽医，１９９９，１５（５）：３２．［３］陈德元，曹军平，朱爱萍等．猪水肿病灭活菌苗的免疫效果观察［Ｊ］．１９９９，（６）：５７～５８．［４］周尧坤．猪水肿病病例［Ｊ］．中国兽医杂志，１９９９，４（２５）：４９～５１［５］杨威，李军，等．仔猪水肿病的诊疗报告［Ｊ］．广西畜牧兽医，２００２，１８（２）：２３～２５目前国内部分猪场已使用了猪肺炎支原体疫苗预防气喘病，取得了较理想的效果。
但还有很多猪场没有意识到喘气病的隐性危害，对其造成的损失有所怀疑，没有采取有效的预防措施。
为了表明猪肺炎支原体感染在养猪生产中造成严重的损失和疫苗免疫实际使用效果，特设计了这次实验。
本试验挑选了一个气喘病较严重的猪场，进行疫苗试验，观察记录猪气喘病的发病情况和猪的生长情况。
现将试验结果报告如下：１试验材料１．１疫苗猪肺炎支原体灭活疫苗，由辉瑞动物保健品公司提供，批号为０５０１２２。
１．２实验动物初产仔猪２０窝２０６头，系大白×长白×杜洛克三元杂交猪，其中母猪１１２头，公猪９４头。
猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗保育期临床效果对比试验
试 验 分 组 及 疫 苗 免 疫
使 用 药 物难 以根 治 ， 易复 发 ， 严重 危 害 我 国养 猪业 的健
４ ０窝 猪分 为 ２组 ， 每组 ２ ０窝 ， 每 组猪 舍 阴 、 阳 面各
康 发展 。疫苗 免疫 是 目前控 制 该病 的首 选 。高 效 、 安 全 疫苗 的选 择必 不 可少 ， 本 文初 步探 索 支原 体 活苗 及灭 活
叶 埘 称 肉 不ｆ Ｉ Ｊ 】
三、 讨 论
表５ ． 试 验 数 刈 比
一 １ 实验珂 １（ 疫茁） 刊照｝ ｆ ｌ（ 火 活 莳） 增 减
１ ． 猪肺 炎支 原体 足 一种慢 性病 ， 致死 率 低 ， 主要 是影
响生 长及 容易继 发 其他 呼吸道 病 感染 、无论足 活疫 省还
苗保 育 期 的使 用效 果 ，对 选择 疫 苗 防 控猪 肺 炎 支原 体 具有 临 床指 导意 义 。
１ Ｏ窝 ， 试 验组 ２ ０ １头 猪 ， ４ — ７日龄 喷 鼻免 疫 活疫 苗 ｌ头 份ｆ 支宜捷） ； 对照组 ２ ０ ０头猪 ， 免 疫灭活疫 苗 ， ２ ｍ ｌ ／ 头
份， ７日龄首 免 ， ２ １日龄二 免 ， 每次 免疫 １ 头份。
埘 照 转 入 Ｉ ５ ９、 大． 仃活 ｌ ５ ２又（ ９ ５ ． ６ ％） ， 达抓 ｌ ４ ２头 ； 试 验 【 ｊ 增
咂４ ４ ２ ． １ ２ ｇ ， 刈 ｊ ｛ （ ｛ 绀 ¨增 重 为 ４ １ ９ ． １ ８ ｇ ， 每 口多 Ｋ Ｉ 勾２ ２ ． ９ ４ ｇ ； 试 验 料 肉 比 １ ． ５ ０ ４ ： １ ， ｘ ， Ｊ ‘ 组为 １ ． ７ １ ３ ： １ ， 降低 ０ ． ２ ０ ９ 表２ 、 表５
猪肺炎支原体疫苗对沂蒙黑猪和杜洛克猪免疫效果的差异
实践案例54 中国动物保健 | 2018.07猪肺炎支原体疫苗对沂蒙黑猪和杜洛克猪免疫效果的差异范凤华（莒南县检验检测中心 山东临沂 276600）摘要：本试验旨在探究猪肺炎支原体疫苗对沂蒙黑猪和杜洛克猪免疫效果的差异。
试验分别选取山东省临沂市某沂蒙黑猪养殖场和杜洛克猪养殖场各11头抗猪支原体抗体阴性母猪所产的132头仔猪为研究对象，施以相同的免疫处理，比较血液抗猪支原体抗体水平及攻毒后猪肺病变指数情况。
结果：沂蒙黑猪试验组的血液抗猪支原体肺炎抗体阳性率显著高于杜洛克猪试验组，差异有统计学意义（P<0.05）；攻毒实验后猪肺部病变指数减少率显著高于杜洛克猪试验组，差异有统计学意义（P<0.05）。
因此，与杜洛克猪相比，沂蒙黑猪对猪肺炎支原体疫苗的敏感性更高，免疫效果更好。
关键词：肺炎支原体疫苗；沂蒙黑猪；杜洛克猪；免疫效果doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2018.07.030沂蒙黑猪又被称为沂南二茬猪和莒南黑猪等，主产于山东省临沂和日照等地区，2009年被列入《山东省畜禽资源保护名录》。
传统的沂蒙黑猪以散养为主，但随着市场对优质猪肉需求量的增加，规模化养殖逐渐增多。
而规模化养殖受沂蒙黑猪自身特点和外界环境等因素的影响，极易诱发多种传染病。
其中，支原体肺炎是猪规模化高密度养殖过程中常见的传染病，造成猪只生长缓慢、死亡增加和养殖成本升高等危害，给养殖企业带来的损失较大。
因此，探究沂蒙黑猪的免疫特点，对提高沂蒙黑猪支原体肺炎的免疫效果具有重要的现实意义。
文章对比了猪肺炎支原体疫苗对沂蒙黑猪和杜洛克猪的免疫效果差异，以期为沂蒙黑猪支原体肺炎免疫工作提供指导。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验动物 选取山东省临沂市某沂蒙黑猪养殖场和杜洛克猪养殖场各11头抗猪支原体抗体阴性母猪所产的132头仔猪为研究对象，由养殖场统一提供饲料。
1.1.2 试验疫苗 试验所使用的免疫疫苗为浙江诺倍威生产的RM48株。
不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力对比实验
中国动物保健2024.04实践案例摘要：本研究旨在评价不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫攻毒保护效果。
选择4周龄仔猪25头，随机分为5组，每组5头猪，分别免疫四种猪肺炎支原体灭活疫苗（即疫苗A 组、疫苗B 组、疫苗C 组、疫苗D 组），E 组为攻毒对照组，不做任何处理，在同等条件下隔离饲养。
各疫苗按照对应的说明书进行免疫，免疫后第14、28天进行采血，检测支原体抗体水平，一免后28d 时，所有免疫组连同攻毒对照组，各气管注射猪肺炎支原体CJ 株5mL/头（含0.01g 肺组织毒）。
攻毒后饲养观察28d ，对所有实验组动物进行观察临床症状。
A 组实验动物攻毒后未出现咳嗽、腹式呼吸等支原体临床症状，B-D 组实验猪攻毒后偶尔出现轻微间隔性咳嗽，E 组实验动物攻毒后出现连续性咳嗽，个别猪出现腹式呼吸等临床症状。
攻毒后第28天进行病理剖检。
结果表明，攻毒对照组猪4/5头出现典型猪肺炎支原体病变，在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶，出现“肉样”或“胰样”实质样病变，界限明显。
B ～D 组解剖后个别猪出现典型猪肺炎支原体病变，A 组实验动物解剖后个别猪肺脏出现零星病变，剩余实验动物肺脏均未出现猪肺炎支原体病变。
根据肺部病变较少率计算，A ～D 组病变率分别为71.4%、42.8%、60.7%、44.6%。
实验表明，4种猪肺炎支原体灭活疫苗均具有保护效果，但A 组灭活疫苗与其他免疫组相比较，免疫效果明显优于其他免疫组，在猪群免疫中能够起到更好的免疫效果。
关键词：猪肺炎支原体毒；灭活疫苗；免疫效力；对比不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力对比实验王鹏江，曹剑，刘强德，王钢，候凤，李新萍，袁科，丁占强，武天增，连凡平，张志鹏，贺笋*（天康生物制药有限公司乌鲁木齐830032）收稿日期：2023-05-31作者简介：王鹏江（1994—），男，甘肃定西人，本科，主要从事实验动物管理工作，E-mail:wangpengjiang@ 。
猪支原体肺炎的特点及免疫防控
| 2020年第40卷第12期 总第287期 |51猪支原体肺炎的特点及免疫防控吕伟光1，冯佩平2(1.莱州市朱桥畜牧兽医站，山东 烟台 261419；2.齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100)猪的呼吸道疾病是简单还是复杂？如果从简单的咳嗽和气喘等临床症状来说，看上去比较简单。
如果从病原体来说，则比较复杂。
众所周知，病毒类病原体，如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒和猪流感病毒，前两种病毒可分别使保育猪和育肥猪发生呼吸道疾病，后一种病毒可引起各生产阶段的猪出现呼吸道问题，如流鼻涕、呼吸障碍、咳嗽等；细菌类病原体如巴氏杆菌、波氏杆菌等可以加重呼吸道疾病的症状。
猪肺炎支原体既不是细菌也不是病毒，却可以打开通向猪肺的大门，长期悄悄地偷走猪场的利润。
1 认识误区有人认为给猪接种预防呼吸道疾病的疫苗后免疫效果不明显，仍然有呼吸道问题。
引起猪出现呼吸道问题的病因错综复杂，中医说外科不治癣，内科不治喘，说明喘气的问题涉及的病因比较多，不是解决一个方面就能万事大吉的，需要找到引起发病的主要原因，猪肺炎支原体是其中最重要的一个。
猪支原体肺炎疫苗作为经济效益疫苗，在猪瘟、猪伪狂犬病等病的基础免疫做好的情况下，可以让肺部更健康。
通过喷鼻方式接种的猪支原体肺炎活疫苗具有肺部黏膜占位优势，可直达肺部深处，保护更全面，能使猪生长得更快、更好。
接种猪支原体肺炎疫苗后，临床上评价免疫效果的标准不仅仅是猪的咳喘减少，更重要的是肺部对称性肉样特征性病变减少。
国际上通行的做法是对屠宰猪的肺进行评估，通过观察病变部位大小来评价疫苗效果，国内活疫苗生产厂家在这方面的评估相对较多。
猪不咳喘，需要接种猪支原体肺炎疫苗吗？猪肺炎支原体是环境常在病原体，在温度适宜、通风良好的环境中，即使猪没有明显的咳喘，甚至毫无咳现象，猪肺炎支原体对肺脏的侵害也会随时发生，在肺病变明显的时候出现咳喘，受到应激时症状会加重。
仔猪出生后就有存在感染猪肺炎支原体的风险，尤其是头胎母猪所产的仔猪，因此及时接种疫苗是必需的。
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猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4 疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5 疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6 疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7 疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表10附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表12附录6 抗体检测记录表13附录7 淋巴细胞增殖试验结果15附录8 血象分析15附录9 T淋巴细胞分类计数15附录10 黏膜抗体检测记录表15附录11攻毒记录单15附录12特殊情况记录表16附录13 攻毒后临床症状观察记录表17附录14日增重记录18附录15 攻毒后肺部剖检记录20附录16攻毒后剖检记录22附录17 攻毒后肺部病理损伤记录24附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测26猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由天邦生物科技提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由正业生物科技提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
有效期：_20150110__D.猪支原体肺炎灭活疫苗（P-5722-3株，Suvaxyn RespiFend MH），由硕腾（辉瑞）提供，规格为50头份/瓶，批号为1302777A。
有效期：15/11/16_2.1.1.2 试剂A．猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株）稀释液,批号：2014002；有效期：20170115 B．猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液C．猪支原体肺炎肌注活疫苗佐剂G-1-12.1.2动物选择猪肺炎支原体抗体、抗原均阴性的5-10日龄仔猪，54头.饲养地点：省农科院兽医所饲养员：_徐飞扬，才__仔猪免疫状况：未打气喘病疫苗。
2.1.3 动物饲料仔猪料:2.1.4 设备气雾免疫设备、滴鼻头、20（10、5、2）ml注射器、耳标、耳号钳、冰盒、相机、解剖器械、离心管。
2.1.5攻毒用强毒猪肺炎支原体强毒JS株组织强毒，来自本所，批号20130625，-20℃保存，有效期至：2014/06/25。
2.2方法2.2.1动物分组说明G1:-猪支原体肺炎活疫苗168株肺免疫组。
每头猪肺注射免疫1头份（1ml）即1×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G2: -猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺免疫组。
每头猪肺注射免疫1ml，即1×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗AN306株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
每头猪气雾免疫5×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫5×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
首免后两周二免，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫1头份(2ml)猪支原体肺炎灭活疫苗。
首后2周，加强免疫一次，首免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
每头猪胸腔注射免疫1头份（5ml）猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8: -健康对照组（不免疫，不攻毒）。
不接种疫苗。
不攻毒，其它组攻毒后28天剖杀。
G9: 攻毒对照组（不免疫，只攻毒）。
不免疫疫苗，只攻毒，攻毒后28天剖杀。
2.2.2动物分组与试验操作概表2.2.3免疫G1—猪支原体肺炎活疫苗168株肺免疫组用灭菌生理盐水50ml溶解168活疫苗冻干粉1瓶，使活疫苗终浓度为1×107 CCU/ml，1头份/ml。
每头猪肺免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G2—猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺免疫组用灭菌生理盐水溶解AN306活疫苗冻干粉，使活疫苗终浓度为1×107CCU/ml。
每头猪肺免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
将1瓶168株活疫苗用5ml无菌猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液溶解稀释成1×108CCU/ml浓度，取5ml疫苗溶液倒入喷雾器，对保温箱中的6头仔猪进行气雾免疫（0.2MPa，约10min）。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
将1瓶168株活疫苗用25ml佐剂G-1-1溶液稀释成2×107CCU/ml浓度，每头仔猪颈部肌肉注射免疫2.5ml，注射时分左右侧肌肉共2个注射点。
首免后14天二免，方法同上。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
按猪支原体肺炎灭活疫苗说明书，每头猪肌肉注射免疫1头份猪支原体肺炎灭活疫苗。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
按猪支原体肺炎乳兔活疫苗说明书，每头猪胸腔免疫1头份猪支原体肺炎活疫苗。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8—健康对照不免疫G9—攻毒对照不免疫2.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录免疫后观察并记录可能出现的临床症状，填写附录3。
尤其要记录如下重要的症状：咳嗽、呼吸困难、俯卧、呕吐、食欲不振、震颤、死亡等2.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、免疫后2、4、6周取3头猪各采血1ml（两次免疫组于首免前、首免后3、4、6周采血），分离血清，用自制P46-ELISA试剂盒检测IgG抗体。
对于阳性者继续用分型试剂盒检测IgG亚类。
2.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于首免后2、4、6周取3头猪各采集抗凝血5ml（两次免疫组于免疫后3、4、6周采血），其中1ml用于血液生化检测；1ml用流式细胞仪检测CD4+T细胞、CD8+T 细胞含量、CD4+CD8+双阳性细胞、CD4+/CD8+比率；另外3ml用于淋巴细胞增殖试验和IFN-γ检测2.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、首免后7、14、21、28、35、42天采集鼻拭子样品，检测吸呼道特异性sIgA抗体。
2.2.8攻毒将每瓶猪肺炎支原体组织强毒用50ml生理盐水稀释，气管途径接种试验组试验猪，每头5ml。
2.2.9攻毒后临床症状观察所有猪在攻毒后按附录2要求观察临床症状2.2.10日增重计算各组分别选定3头猪，不采集血样，分别于首免当天、攻毒当天和剖杀当天称重，计算日增重。
2.2.11攻毒后肉眼病变剖检所有仔猪在攻毒后的第28天进行宰杀，记录肺病变，用28分法统计确定肺病变程度，并记算攻毒保护率（见附录1）。
2.2.12攻毒后病理损伤观察剖杀后，采集所有猪左尖叶，福尔马列林溶液固定后，切片观察病理损伤。
2.2.13攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测剖杀后，每头猪用50ml生理盐水采集肺泡灌洗液，用定量PCR方法检测猪肺炎支原体抗原。
附录1 攻毒保护率计算攻毒保护率的统计与评判：试验猪扑杀后，分别记录左尖叶、左心叶、左膈叶、右尖叶、右心叶、右膈叶、副叶病变百分比率，将0～25%记为1；26～50%记为2；51～75%记为3；76～100%记为4，统计每个试验猪病肺病变指数（最高为28）。
试验猪病变指数大于10判为发病，小于4为健康（排除猪肺炎支原体感染），根据肺病变指数，按以下公式计算试验猪攻毒保护指数。
试验猪攻毒保护指数＝（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－试验猪肺病变指数）/（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－不攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值）％试验猪攻毒保护指数小于60％为无保护，大于或等于60％为有保护，再按以下公式计算试验猪攻毒保护率。
试验猪攻毒保护率＝有保护试验猪数/试验猪数试验在阳性对照组全部发病、阴性对照组至少全部健康时有效。
附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准评判参数0 1 2 10 最高分咳嗽无有严重 2呼吸困难无有严重 2呕吐无有严重 2俯卧无有严重(躺卧) 2食欲不振无有 1震颤无有 1死亡无有10 注射后第1日(D1)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出围注射后第2日(D2)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出围注射后第3日直肠温度较0.5℃以下0.5～1.0℃ 1.0℃以上 2对照组高出围累计总分28猪安检试验中，每头试验猪症状全部累计，总分不大于2判为安全，累计总分大于5判为不安全，累计总分2～5，可重检1次，重检累计总分不大于2安全。
附录3动物分组记录表附录4动物免疫记录表操作人: 复核人：附录5免疫后异常临床症状观察记录表组：猪数：附录6 抗体检测记录表附录7 淋巴细胞增殖试验结果附录8 血象分析附录9 T淋巴细胞分类计数附录10 黏膜抗体检测记录表附录11攻毒记录单攻毒株: 批号：来源：稀释液：批号：来源：操作人：复核人：附录12特殊情况记录表－如有特殊情况，比如转群，疾病，用药，换料等影响动物的事件。
填写“附录12: 特殊情况记录”注：试验负责人员（SGQ, LMJ）应定期现场核查饲养情况，以及攻毒后的临床症状等，并在临床观察以及饲养记录上签字及日期。
及时将原始数据传递至JAAS，便于沟通。
附录13 攻毒后临床症状观察记录表附录14日增重记录附录15攻毒后肺部剖检记录附录16攻毒后剖检记录日期：操作人：复核人：附录17攻毒后肺部病理损伤记录附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测。