级研究生生第四章-放射性核素标记化合物

二、放射性核素标记化合物 （一）放射性核素标记化合物的特点 （二）同位素标记与非同位素标记
（2）非同位素标记(non-isotopic labelling) ：非固有元素 131I---蛋白质、 125I---蛋白质 125I---类固醇激素 特点： 组成不完全相同 物理化学及生物特性有所改变
（三） 放射性核素标记化物的命名
联结到一个小分子载 体上,再将这个小分子 物质与蛋白质结合。
2. 间接标记法优缺点
优点：◎ 避免了蛋白质和氧化剂直接接触 ◎ Bolton-Hunter试剂主要联接到
1.直接标记法 (3)固相氧化剂法
原理：将氧化剂交联在琼脂糖凝胶上或 涂在塑料管或塑料珠子表面,形成不溶性 的固相氧化剂。
特点：能简化标记 中止反应不需加还原剂
1.直接标记法 (3)固相氧化剂法
① 固相酶法 将乳过氧化物酶或葡萄糖氧化酶
交联到琼脂糖凝胶（Sepharose 4B） 上, 反应条件仍同于上述酶法。
二、放射性核素标记化合物 （一）放射性核素标记化合物的特点 （二）同位素标记与非同位素标记
（1）同位素标记(isotopic labelling)：
被标记化合物中固有元素被其放射性 核素的同位素取代所形成的标记。 • 有机化合物：14C 、3H • 硫、磷化合物：35S 、 32P
特点：所得化合物的物理化学及生 物特性与原化合物基本相同
缺点：体内实验可能产生微量毒性
三、蛋白质与多肽的放射性碘标记技术
1. 直接标记法
(1)氯胺T法 (2)乳过氧化物酶法 (3)固相氧化剂法 ① 固相酶法 ② 氯甘脲(Iodogen)法 ③ Iodo-Beads法 (4)N-溴替丁二酰亚胺
2. 间接标记法
3-丙酸-N-琥珀酰亚脂
又称联接标记法 是先将放射性碘
特点：反应十分温和 放射性比活度高 能保持生物和免疫活性
缺点：标记率比氯胺T法低,30%～40%。
还原剂：缓冲液或半胱氨酸或巯基乙醇
乳过氧化物酶法注意事项
① H2O2应分次加入 ②乳过氧化物酶用量应控制
在标记蛋白量的1%以下 ③ 采用双酶标记法(葡萄糖氧化酶) ④ pH 3.0-8.0 ⑤反应时间：30-60min
（4）全标记 （General labeling） G-3H-胆固醇
（三） 放射性核素标记化物的命名
（5）双标记或多标记 （Double labeling and multiped labeling）
C3H3-35S-CH2CH2CH(NH2)-COOH 13CH3-14COOH
（四）放射性比活度与放射化学纯度
1.直接标记法 (3)固相氧化剂法
① 固相酶法
② 氯甘脲(Iodogen)法
③ Iodo-Beads法
1.直接标记法 (4)N-溴替丁二酰亚胺 (N-Bromosuccinimide) 原理： 溴代瑚玻酰亚胺的作用与氯胺T
和Iodogen法相似。
特点：标记率高、操作简单、快、安全
可标记较低浓度蛋白质
放射性比活度 Specific activity 放射化学纯度 Radiochemical purity
（四）放射性比活度与放射化学纯度
（五）不稳定性 1.核衰变 2.辐射自分解 3.脱落 4.位移
第二节 蛋白质与多肽放射性碘标记
碘标记化合物的基本特性
125I、131I、123I: 半衰期、能量适宜
1.直接标记法 (3)固相氧化剂法
② 氯甘脲(Iodogen)法
1，3，4，6-四氯3α ,6α -二苯甘脲
将氯甘脲用氯仿溶解后涂于反应管 底部，用N2气吹干，置-20oC冷藏备用。
1.直接标记法 (3)固相氧化剂法
③ Iodo-Beads法
将氯胺T的衍生物N-氯苯磺胺共价 连接到无孔的聚苯乙烯小珠表面。
一、放射性核素标记技术和放射性核素 标记化合物的含义
放射性核素标记化合物是化合物的 分子结构中某一分子或原子被放射性核 素原子取代后的化合物。 14C-尿素------14CO2 〔 γ -32P〕ATP 〔 1-14C〕乙酰胆碱
二、放射性核素标记化合物 （一）放射性核素标记化合物的特点
•结合牢固 •有合适的放射性物理半衰期 •容易测量
氯胺T法注意事项 ① 氯胺T溶液应新鲜配制 ② 氯胺T 用量应严格控制 ③ 偏重亚硫酸钠也应新鲜配制、
1.5-2倍于氯胺T ④ pH7.4-7.8, 0.2-0.5M磷酸缓冲液 ⑤ 减少反应体积 ⑥ 反应时间：10s-3min ⑦ 室温进行
1.直接标记法 （2）乳过氧化物酶法
原理：当少量H2O2存在时,乳过氧化物酶与 H2O2结合,释放出新生氧,使*I-氧化。
125I、131I：价廉易得 125I：易于探测
Xian 氙
124Xe(n, γ) 125I 124Xe + 1n ------- 125I + γ
第二节 蛋白质与多肽放射性碘标记
碘标记化合物的基本特性 一、蛋白质与多肽的放射性碘标记技术 特点：苯环ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ直链易于标记且稳定 （一）基本原理 形式：Na*I--*I- --- *I2 或 *I+ （二）常用标记方法
第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述
一、放射性核素标记技术和放射性核素 标记化合物的含义
放射性核素标记技术 Radionuclide labeled technique 放射性核素标记化合物 Radionuclide labeled compounds
第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述
分类：直接标记法间接标记法
1. 直接标记法
Na *I
氧化剂
lao
*I2或*I+
酪氨酸残基
1.直接标记法
(1)氯胺T法
原理： 次氯酸使*I-氧化 特点： 简便、快速
便宜易得、 标记效率高、 重复性好、反应易控制 是使用最广泛的碘标记技术 还原剂：偏重亚硫酸钠（焦亚硫酸钠）
1.直接标记法
(1)氯胺T法
无机化合物：131I-NaI、35S-硫酸 有机化合物：1-14C-醋酸 （1）定位标记（Specific labeling ）
5(S)-3H-尿嘧啶 （2）准定位标记（Normal labeling）
6,7(n)-3H-雌二醇
（三） 放射性核素标记化物的命名
（3）均匀标记（Uniform labeling） U-14C-葡萄糖