第二节血涂片制备与染色

合格的血涂片：厚薄适宜，头、体、尾分明，两端和两侧留 有空隙，血膜至少长 30~50mm，两侧空隙 2~3mm。
如果用力不均匀、载片不清洁可造成血涂片分布不均
（2）仪器推片法：目前有多种型号的血细胞分析仪或 血细胞形态分析仪配有血涂片仪和染色仪，可以根据需 要进行自动送片、取血、推片、标记和染色等操作。
（二）质量保证
2．pH 蓝。 3．染色时机 血涂片干透后才能染色，否则易脱落。 如环境 pH＜PI（PI 为该蛋白质的等电点），易与酸性伊红结合，
染色偏红；当环境的 pH＞PI 则带负电荷增多，易与亚甲蓝结合，染色偏
4．染液用量 以刚好覆盖血膜为宜。用量过多，会造成深染；过少，会
导致血涂片局部未着色，或易干使染料沉积。 5．混匀 染液与缓冲液需充分混匀，否则细胞着色不均。 6．染色时间 环境温度越低、细胞越多，染色时间越长；反之亦然。
（二）质量保证
1．瑞特染液质量
在密封条件下，贮存时间愈久， 亚甲蓝转化的天青 B 愈多，染色 效果愈好。 可用吸光度比值（RA）作为瑞特 染液的质量评价指标 RA=A650/A525， RA 降至 1.3±0.1即可使用。 瑞特染液需适当加入甘油，密封严 实，以防止甲醇挥发或氧化，影响 染液质量。
加等量缓冲液
混匀→静置 5～10 分钟 流水冲洗、干燥
（4）染色效果
正常情况下，经瑞特染色后血膜外观呈淡紫红色。 显微镜下：红细胞呈粉红色圆盘状；白细胞的细胞核染紫红色，核染色质结构 清楚，胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色；血小板染成紫红色。
2．吉姆萨染色法 （1）原理：吉姆萨染色原理与瑞特染色相同，但提高了噻嗪类染料 亚甲蓝的质量，加强了天青的作用。与瑞特染色法比较，该法对细胞 核着色效果较好，但对中性颗粒着色较差。 （2）试剂：由吉姆萨染料、甲醇和甘油组成。 （3）简要操作：同瑞特染色法。 3．瑞-吉复合染色法 可取长补短，使血细胞获得满意的染色效果。
（一）方法
1．瑞特染色法 （1）染色原理：细胞的着色既有物理的吸附作用，又 有化学的亲和作用。
（2）试பைடு நூலகம் ①瑞特染液
酸性染料伊红（伊红化钠 ）
碱性染料美蓝（氯化美蓝）
复合物溶于甲醇。 ②磷酸盐缓冲液（PBS） （pH6.4～6.8）
（3）简要操作 血涂片制备 干燥、标记 加瑞特染液覆盖血膜 固定约 1 分钟
7．冲洗 用小流水将染液冲洗干净，不能先倒掉染液再用流水冲洗，以免
染料沉着于血涂片上，干扰血细胞形态观察。 8．脱色与复染 染色过深，可用甲醇或清水脱色。染色过浅，可以复染。
（三）方法学评价
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第一章 血液一般检验
第二节 血涂片制备与染色
一、血涂片制备
（一）主要器材
1．载玻片
2．推片
（二）简要操作
1． 薄血膜推片法 （1）手工推片法：采血→取血于载玻片上→推片→干燥。
取 1 小滴血于载玻片的一端（1.5cm 处或整片 1/3 处）； 推片时使推片与载玻片成 30°～45°角度，让推片接触血滴， 使血液沿推片下缘散开，再向血滴前方向匀速移动推片。
2．厚血膜推片法 采血→取 1 小滴血液于载玻片中央→以推片的一角将血 滴由内向外旋转涂布，制成直径约 1.5cm 的圆形厚血 膜，干燥→滴加蒸馏水，溶解红细胞，脱去血红蛋白→ 倾去水，干燥。
（三）质量保证
1．玻片 2．标本 3．制片 载玻片需清洁、干燥、中性、无油腻，勿用手触及玻片表面。 抗凝血需在 4小时内制备血涂片，否则细胞形态会发生改变。
①制备厚薄适宜的血涂片：
厚：血滴大、角度大、速度快—— 大、大、快 薄：血滴小、角度小、速度慢—— 小、小、慢
②制备血膜分布均匀的血片：
血膜分布不均主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致。
4．制片后处理
二、血涂片染色
血涂片染色是为了使血细胞着色，染料将细胞的胞膜、胞质、 胞核等染成不同的颜色，便于在显微镜下观察识别。