黄瓜霜霉病菌保存方法
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1. 3 不同处理条件下保存 12 个月后孢子囊致病 性测定
采用子叶人工接种方法测定孢子囊的致病性 。 寄主选用感病黄瓜品种长春密刺 。将其种子消毒 后播种于灭菌土中 , 每处理设 3 次重复 , 共计 30 钵 。在子叶期取保存于上述不同条件下的孢子囊 悬浮液 , 孢子囊浓度为 2 000 个 /mL 进行点滴接 种 ,接种量为 0. 04 mL。接种后置于保湿箱中防止 空气中其它菌源污染 ,温度保持白天 20 ～25℃、夜 间 10 ～15 ℃, 相对湿度 90 % ～100 % , 接种后 9 d 调查发病率及病情指数 。病情分级标准 [ 1 ]如下 :
2. 2 孢子囊的致病性
孢子囊在不同保存液处理条件中保存 12个月 后 ,进行了苗期人工接种以测定其致病性 。接种后 3 d对照即开始出现症状 , 5 d 后保存于二甲基亚 砜及脱脂乳中的孢子囊接种的黄瓜子叶开始出现 症状 , 9 d发病率及病情指数调查结果见表 1。从 表 1可以看出 ,发病率及病情指数结果与孢子囊萌 发率测定结果较为符合 ,保存于二甲基亚砜及脱脂 乳中的孢子囊多具有致病性 。其中以孢子囊在 10%二甲基亚砜加 5%脱脂乳保存液中预先在
收稿日期 : 2006 206 219; 修回日期 : 2006209 212 基金项目 : 黑龙江省教育厅科学技术研究项目 ( 11511038) ; 国家“863 ”项目 ( 2006AA10 Z1B9 ) 通讯作者 : 秦智伟 ,教授 ,主要从事蔬菜育种研究 ; Tel: 0451 255190058 , E2mail: zwqin727@ 163. com。
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
440
植物病理学报
37卷
Ta b le 1 Th e p e rc e n ta g e o f sp o ra n g ia g e rm in a tio n , in c id e n ce a n d
- 20 ℃ fo r 24 h p rio r to - 70 Hale Waihona Puke Baidu w e re s till h igh ly p a thogen ic af te r 12 m on ths p rese rva tion. The p e rcen tage of
ge rm ina tion of sp o rang ia, inc idence and d isease index w e re 46 % , 50. 0 % and 40. 0 resp ec tive ly 9 d af te r inocu la tion. Th is m e thod so lved the p rob lem of P. cubens is p rese rva tion. Ke y w o rd s : P seudop e ronosp o ra cubens is; p rese rva tion; sp o rang ia; d im e thy l su lfox ide and sk im m ilk;
[ P seudop e ronosp o ra cubensis (B e rk. &M . A. C u r2 tis) R ostovzev ]侵染引起的一种气传病害 。古巴 假霜霉无性繁殖产生孢子囊 , 孢子囊抗逆性差 , 寿 命短 ,一般只存活 1 ～5 d; 离体叶片上干燥孢子囊 和离体孢子囊干燥 8 d 以后均无致病力 。由于该 病菌是一种专性寄生菌 ,因此用人工培养基无法培 养和保 存 [ 1 ] 。目前 菌种 保存 主要 有下 列几 种 方 法 : ①寄主活体保存 :在适宜环境条件下 ,定期将病 菌接到新的寄主上 。这种方法简单却费时 ,并且要 求一定的设备 , 但可较长时间保存 [ 1 ] 。 ②离体叶
以上或整株枯死 。
计算病情指数 ,公式为 :
病情指数
=
ρ (各级病叶数 ×各级代表值 ) 调查总叶数 ×最高一级代表值
×100
2 结果与分析
2. 1 孢子囊萌发率
经过 20℃保湿培养 1. 5 h后 ,在二甲基亚砜及 脱脂乳保存液中保存 12 个月的孢子囊即开始萌 发 ,产生游动孢子 。游动孢子无色 , 圆形 。保湿后 5～6 h 游动孢子全部变为休止孢 , 不再运动 。保 湿 24 h孢子囊萌发率调查结果见表 1。从表 1 可 以看出 ,在二甲基亚砜及脱脂乳保存液中保存 12 个月的孢子囊多具有萌发力 , 其中孢子囊在 10% 二甲基亚砜加 5%脱脂乳保存液中预先在 - 20℃ 冷冻 24 h, 然后在 - 70℃保存的萌发率为最高 , 达 到 46% ; 而保存在无菌水及离体叶片上的孢子囊 均不能萌发 。对照新鲜孢子囊的萌发率为 81% 。
- 20 ℃冷冻 24 h, 然后在 - 70℃保存的致病力最 高 ,其发病率与病情指数分别为 50. 0%和 40. 0。 保存于无菌水及离体叶片上的孢子囊均无致病力 。 以新鲜发病叶片上的孢子囊接种发病率与病情指 数分别为 78. 6 %和 50. 0。
3 讨论
二甲基亚砜简称 DM SO , 具有高极性 、高吸湿
保存 :沈阳农业大学傅淑云研究出了带菌叶离体培 养法 ,在 - 5℃条件下 , 可将病叶保存 26 d, 但其孢 子囊萌发率只有 3. 5 % 。 Pa rkash 用含有 5 %蔗糖 液或者一定浓度激动素液的棉花保湿 ,可将病叶保 存 30 d[ 2 ] 。 ③低温冷冻保存 : 周凤珍等 1987 年报 道 ,采用低温保存 , 在 - 20℃条件下 , 孢子囊保存 60 d后仍有致病力 。 S h i等 [ 3 ] 通过低温和干燥对 病菌孢子囊致病力影响的研究指出 ,离体叶片冷冻 保存 10个月的霜霉菌仍然具有致病力 , 但致病力 下降 , 病 情 指 数 仅 为 1. 60, 而 对 照 病 情 指 数 达 96. 2,同时冷冻菌种潜育期长达 17 d, 而对照潜育 期为 4 d。低温 ( - 20℃)降低了霜霉病菌孢子囊 的致病力 ,低温时间越长 ,孢子囊的致病力越低 ,同 时低温使潜育期延长 。 ④液氮保存 : G u lya 等 [ 4 ]报
d is e a s e in d e x a t 1 2 m o n th s p re s e rva tio n
P reserva tion m e thod 10 % DM SO + 5% sk im m ilk 10% DM SO + 10% sk im m ilk
S terilized w ater L eaves in vitro
1. 2 不同处理条件下保存 12 个月后孢子囊萌发 率的测定
在灭菌的载玻片上滴入上述不同处理条件下 保存 12个月的孢子囊溶液 , 放入垫有湿滤纸的无 菌培养皿中 , 20℃保湿培养 , 1 h 后开始观察 , 每次 检查 10个视野 。每个处理 3次重复 。记录孢子囊 萌发率 ,以当年新病斑上的孢子囊为对照 。
植物病理学报 A C TA PH YTO PA THOLO G ICA S IN ICA 37 ( 4 ): 438 2441 ( 2007 )
研究简报
黄瓜霜霉病菌保存方法
张艳菊 , 秦智伟3 , 周秀艳 , 徐生军 , 苏亚非 , 蔡 宁
(东北农业大学 , 哈尔滨 150030)
Th e p re s e rv a tio n o f P s e u d op e ro n o sp o ra c u b e n s is ZHAN G Yan2ju, Q IN Zh i2w e i, ZHOU X iu2yan, XU S heng2jun, SU Ya2fe i, CA I N ing (N o rtheast A gricultural U nive rsity, H a rb in 150030, C hina)
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
4 期
张艳菊 ,等 :黄瓜霜霉病菌保存方法
439
道向日葵等霜霉病菌的干孢子囊无需保护剂可在 液氮中保存 ,但该方法需要有液氮设备 , 并常年存 放于液氮中 。
上述关于黄瓜霜霉病菌种的保存方法 ,可见到 目前为止还没有找到理想的 、简单有效的保存方 法 。通过对离体孢子囊在不同保存液及保存条件 的研究 ,本研究确定了该病菌长期离体保存方法 , 为开展有关黄瓜霜霉病的基础和应用研究提 供参考 。
1 材料与方法
1. 1 病原菌的保存处理
采集黄瓜霜霉病新鲜病叶 ,冲去叶面上的杂物 和原有的孢子囊 ,在 20～25 ℃下保湿 24 h, 长出大 量浓密新鲜的孢子囊之后 , 检测孢子囊的萌发率 。 当孢子囊萌发率在 80%以上时 , 用于霜霉病菌保 存方法的研究 。用消毒软毛刷将孢子囊刷入保存 液 (表 1 ) ,并在不同温度条件下保存 12 个月 。以 新鲜发病叶片上的孢子囊为对照 ,进行孢子囊萌发 率及子叶人工接种试验 , 测定其致病力 , 确定适宜 保存方法 。
0级 ,无病症 ; 1级 ,接种点有微小病斑 ,其直径
小于 0. 5 cm; 2级 ,病斑直径 0. 5～1. 3 cm; 3级 ,接
种点黄化面积占整个叶片面积的 1 /3以下 ,坏死斑
占 1 /3以下 ; 4 级 , 坏死斑面积占整个叶片面积的
1 /3～2 /3; 5级 ,坏死斑面积占整个叶片面积的 2 /3
C on tro l
P reserva tion cond ition ( ℃)
- 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70
A b s tra c t: P seudop e ronosp o ra cubensis (B e rk. & M . A. C u rtis) R os tovzev, the causa l agen t of cucum be r dow ny m ildew , is an ob liga te p a ras itic fungus. U p to now it can no t be p rese rved on cu ltu re m ed ium. In th is s tudy, the sp o rang ia of P. cubens is w e re p rese rved in p ro tec tive substances of 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 5 % sk im m ilk, 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 10 % sk im m ilk, ste rilized w a te r and leaves in vitro, and s to red a t
- 20 ℃, - 70 ℃, and p re lim ina ry freez ing a t - 20 ℃ fo r 24 h p rio r to - 70 ℃ resp ec tive ly. The resu lts
show ed tha t the sp o rang ia p rese rved in 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 5 % sk im m ilk, p re lim ina ry f reez ing a t
p a thogen ic ity
文章编号 : 041220914 ( 2007 ) 04 20438204
黄瓜霜霉病是黄瓜生产中的重要病害 ,在适宜 发病条件下 ,其传播流行速度很快 , 对黄瓜生产威 胁极大 ,是保护地黄瓜上的一种毁灭性病害 。该病 害是由鞭毛菌亚门 , 卵菌纲 , 霜霉科 , 古巴假霜霉
采用子叶人工接种方法测定孢子囊的致病性 。 寄主选用感病黄瓜品种长春密刺 。将其种子消毒 后播种于灭菌土中 , 每处理设 3 次重复 , 共计 30 钵 。在子叶期取保存于上述不同条件下的孢子囊 悬浮液 , 孢子囊浓度为 2 000 个 /mL 进行点滴接 种 ,接种量为 0. 04 mL。接种后置于保湿箱中防止 空气中其它菌源污染 ,温度保持白天 20 ～25℃、夜 间 10 ～15 ℃, 相对湿度 90 % ～100 % , 接种后 9 d 调查发病率及病情指数 。病情分级标准 [ 1 ]如下 :
2. 2 孢子囊的致病性
孢子囊在不同保存液处理条件中保存 12个月 后 ,进行了苗期人工接种以测定其致病性 。接种后 3 d对照即开始出现症状 , 5 d 后保存于二甲基亚 砜及脱脂乳中的孢子囊接种的黄瓜子叶开始出现 症状 , 9 d发病率及病情指数调查结果见表 1。从 表 1可以看出 ,发病率及病情指数结果与孢子囊萌 发率测定结果较为符合 ,保存于二甲基亚砜及脱脂 乳中的孢子囊多具有致病性 。其中以孢子囊在 10%二甲基亚砜加 5%脱脂乳保存液中预先在
收稿日期 : 2006 206 219; 修回日期 : 2006209 212 基金项目 : 黑龙江省教育厅科学技术研究项目 ( 11511038) ; 国家“863 ”项目 ( 2006AA10 Z1B9 ) 通讯作者 : 秦智伟 ,教授 ,主要从事蔬菜育种研究 ; Tel: 0451 255190058 , E2mail: zwqin727@ 163. com。
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
440
植物病理学报
37卷
Ta b le 1 Th e p e rc e n ta g e o f sp o ra n g ia g e rm in a tio n , in c id e n ce a n d
- 20 ℃ fo r 24 h p rio r to - 70 Hale Waihona Puke Baidu w e re s till h igh ly p a thogen ic af te r 12 m on ths p rese rva tion. The p e rcen tage of
ge rm ina tion of sp o rang ia, inc idence and d isease index w e re 46 % , 50. 0 % and 40. 0 resp ec tive ly 9 d af te r inocu la tion. Th is m e thod so lved the p rob lem of P. cubens is p rese rva tion. Ke y w o rd s : P seudop e ronosp o ra cubens is; p rese rva tion; sp o rang ia; d im e thy l su lfox ide and sk im m ilk;
[ P seudop e ronosp o ra cubensis (B e rk. &M . A. C u r2 tis) R ostovzev ]侵染引起的一种气传病害 。古巴 假霜霉无性繁殖产生孢子囊 , 孢子囊抗逆性差 , 寿 命短 ,一般只存活 1 ～5 d; 离体叶片上干燥孢子囊 和离体孢子囊干燥 8 d 以后均无致病力 。由于该 病菌是一种专性寄生菌 ,因此用人工培养基无法培 养和保 存 [ 1 ] 。目前 菌种 保存 主要 有下 列几 种 方 法 : ①寄主活体保存 :在适宜环境条件下 ,定期将病 菌接到新的寄主上 。这种方法简单却费时 ,并且要 求一定的设备 , 但可较长时间保存 [ 1 ] 。 ②离体叶
以上或整株枯死 。
计算病情指数 ,公式为 :
病情指数
=
ρ (各级病叶数 ×各级代表值 ) 调查总叶数 ×最高一级代表值
×100
2 结果与分析
2. 1 孢子囊萌发率
经过 20℃保湿培养 1. 5 h后 ,在二甲基亚砜及 脱脂乳保存液中保存 12 个月的孢子囊即开始萌 发 ,产生游动孢子 。游动孢子无色 , 圆形 。保湿后 5～6 h 游动孢子全部变为休止孢 , 不再运动 。保 湿 24 h孢子囊萌发率调查结果见表 1。从表 1 可 以看出 ,在二甲基亚砜及脱脂乳保存液中保存 12 个月的孢子囊多具有萌发力 , 其中孢子囊在 10% 二甲基亚砜加 5%脱脂乳保存液中预先在 - 20℃ 冷冻 24 h, 然后在 - 70℃保存的萌发率为最高 , 达 到 46% ; 而保存在无菌水及离体叶片上的孢子囊 均不能萌发 。对照新鲜孢子囊的萌发率为 81% 。
- 20 ℃冷冻 24 h, 然后在 - 70℃保存的致病力最 高 ,其发病率与病情指数分别为 50. 0%和 40. 0。 保存于无菌水及离体叶片上的孢子囊均无致病力 。 以新鲜发病叶片上的孢子囊接种发病率与病情指 数分别为 78. 6 %和 50. 0。
3 讨论
二甲基亚砜简称 DM SO , 具有高极性 、高吸湿
保存 :沈阳农业大学傅淑云研究出了带菌叶离体培 养法 ,在 - 5℃条件下 , 可将病叶保存 26 d, 但其孢 子囊萌发率只有 3. 5 % 。 Pa rkash 用含有 5 %蔗糖 液或者一定浓度激动素液的棉花保湿 ,可将病叶保 存 30 d[ 2 ] 。 ③低温冷冻保存 : 周凤珍等 1987 年报 道 ,采用低温保存 , 在 - 20℃条件下 , 孢子囊保存 60 d后仍有致病力 。 S h i等 [ 3 ] 通过低温和干燥对 病菌孢子囊致病力影响的研究指出 ,离体叶片冷冻 保存 10个月的霜霉菌仍然具有致病力 , 但致病力 下降 , 病 情 指 数 仅 为 1. 60, 而 对 照 病 情 指 数 达 96. 2,同时冷冻菌种潜育期长达 17 d, 而对照潜育 期为 4 d。低温 ( - 20℃)降低了霜霉病菌孢子囊 的致病力 ,低温时间越长 ,孢子囊的致病力越低 ,同 时低温使潜育期延长 。 ④液氮保存 : G u lya 等 [ 4 ]报
d is e a s e in d e x a t 1 2 m o n th s p re s e rva tio n
P reserva tion m e thod 10 % DM SO + 5% sk im m ilk 10% DM SO + 10% sk im m ilk
S terilized w ater L eaves in vitro
1. 2 不同处理条件下保存 12 个月后孢子囊萌发 率的测定
在灭菌的载玻片上滴入上述不同处理条件下 保存 12个月的孢子囊溶液 , 放入垫有湿滤纸的无 菌培养皿中 , 20℃保湿培养 , 1 h 后开始观察 , 每次 检查 10个视野 。每个处理 3次重复 。记录孢子囊 萌发率 ,以当年新病斑上的孢子囊为对照 。
植物病理学报 A C TA PH YTO PA THOLO G ICA S IN ICA 37 ( 4 ): 438 2441 ( 2007 )
研究简报
黄瓜霜霉病菌保存方法
张艳菊 , 秦智伟3 , 周秀艳 , 徐生军 , 苏亚非 , 蔡 宁
(东北农业大学 , 哈尔滨 150030)
Th e p re s e rv a tio n o f P s e u d op e ro n o sp o ra c u b e n s is ZHAN G Yan2ju, Q IN Zh i2w e i, ZHOU X iu2yan, XU S heng2jun, SU Ya2fe i, CA I N ing (N o rtheast A gricultural U nive rsity, H a rb in 150030, C hina)
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
4 期
张艳菊 ,等 :黄瓜霜霉病菌保存方法
439
道向日葵等霜霉病菌的干孢子囊无需保护剂可在 液氮中保存 ,但该方法需要有液氮设备 , 并常年存 放于液氮中 。
上述关于黄瓜霜霉病菌种的保存方法 ,可见到 目前为止还没有找到理想的 、简单有效的保存方 法 。通过对离体孢子囊在不同保存液及保存条件 的研究 ,本研究确定了该病菌长期离体保存方法 , 为开展有关黄瓜霜霉病的基础和应用研究提 供参考 。
1 材料与方法
1. 1 病原菌的保存处理
采集黄瓜霜霉病新鲜病叶 ,冲去叶面上的杂物 和原有的孢子囊 ,在 20～25 ℃下保湿 24 h, 长出大 量浓密新鲜的孢子囊之后 , 检测孢子囊的萌发率 。 当孢子囊萌发率在 80%以上时 , 用于霜霉病菌保 存方法的研究 。用消毒软毛刷将孢子囊刷入保存 液 (表 1 ) ,并在不同温度条件下保存 12 个月 。以 新鲜发病叶片上的孢子囊为对照 ,进行孢子囊萌发 率及子叶人工接种试验 , 测定其致病力 , 确定适宜 保存方法 。
0级 ,无病症 ; 1级 ,接种点有微小病斑 ,其直径
小于 0. 5 cm; 2级 ,病斑直径 0. 5～1. 3 cm; 3级 ,接
种点黄化面积占整个叶片面积的 1 /3以下 ,坏死斑
占 1 /3以下 ; 4 级 , 坏死斑面积占整个叶片面积的
1 /3～2 /3; 5级 ,坏死斑面积占整个叶片面积的 2 /3
C on tro l
P reserva tion cond ition ( ℃)
- 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70 - 20 - 70 - 20 (24 h) , - 70
A b s tra c t: P seudop e ronosp o ra cubensis (B e rk. & M . A. C u rtis) R os tovzev, the causa l agen t of cucum be r dow ny m ildew , is an ob liga te p a ras itic fungus. U p to now it can no t be p rese rved on cu ltu re m ed ium. In th is s tudy, the sp o rang ia of P. cubens is w e re p rese rved in p ro tec tive substances of 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 5 % sk im m ilk, 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 10 % sk im m ilk, ste rilized w a te r and leaves in vitro, and s to red a t
- 20 ℃, - 70 ℃, and p re lim ina ry freez ing a t - 20 ℃ fo r 24 h p rio r to - 70 ℃ resp ec tive ly. The resu lts
show ed tha t the sp o rang ia p rese rved in 10 % d im e thy l su lfox ide p lus 5 % sk im m ilk, p re lim ina ry f reez ing a t
p a thogen ic ity
文章编号 : 041220914 ( 2007 ) 04 20438204
黄瓜霜霉病是黄瓜生产中的重要病害 ,在适宜 发病条件下 ,其传播流行速度很快 , 对黄瓜生产威 胁极大 ,是保护地黄瓜上的一种毁灭性病害 。该病 害是由鞭毛菌亚门 , 卵菌纲 , 霜霉科 , 古巴假霜霉