流感病毒检验

流感病毒检验

发表时间：2009-08-10T09:20:24.920Z 来源：《中外健康文摘》2009年第20期供稿作者：谭耀武 (黑龙江省宝清县八五三农场疾控中心黑龙江宝清

[导读] 流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0277-01

流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒。流感病毒属正粘病毒科，可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）3型。甲、乙、丙不仅反映了病毒被发现的前后顺序，更重要的是反映了对人危害程度的顺序，甲型常以流行的形式出现，可造成世界性的大流行，乙型常以局部流行的形式出现，丙型主要是侵犯婴幼儿。

1 样本采集

1.1采样液 Hank平衡盐、细胞培养液、牛肉浸液（小牛肉浸膏l0g、牛血清白蛋白2g，加蒸馏水至400ml、庆大霉素40mg、多粘菌素

B 0. 8mg，过滤除菌）等均可作采样液。

1.2采集鼻咽腔拭子标本（1）咽拭子：用棉签擦拭双侧扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸人2～3ml采样液中。（2）鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插人鼻腔、接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液刷洗收集器3次。（3）含漱液：用8～10以采样液漱口。

1.3收集血清标本血清标本应包括急性期和恢复期双份血清。急性期应在发病7天内采集，恢复期则在发病后2～4周采集。血液标本以2500r/min离心l5min，收集血清，弃血凝块。

1.4标本运送病毒分离标本采集后应立即低温保存，应尽快送至实验室。24～48h内样品可置4℃保存，如48h内未能进行接种，应置－70℃或以下保存。血清标本可在4汇存放一周，在－20℃长期保存。

1.5标本处理咽拭子标本，收集管于混合器充分震荡，用无菌镊子取出棉拭子并在管壁上反复挤压棉拭子后弃拭子，标本加入双抗（青霉素、链霉素）终浓度为l000IU/ml，混匀置4℃2h方可接种或低温保存；含漱液标本，混匀后自然沉淀，取上清液3ml，加双抗；鼻咽抽取物标本，取无菌毛细吸管将洗液反复吹打，把粘液打散，而后按上述方法进行处理；器官组织标本，先用无菌的乳钵磨碎，用生理盐水配成20％悬液，2000r/min离心l0min，取上清液3ml按上述方法进行抗菌处理。

2 检验方法

2.1材料和方法

2.1.1器材孵卵箱（38℃、33～35℃：各一个）、照卵器、卵盘、注射器、消毒剂、镊子、无菌生理盐水、毛细吸管、试管、液体石蜡和封口胶等。

2.1.2方法当今国内外常用狗肾传代细胞（MDCK）。将已长成单层的细胞管弃生长液，用含有l00IU/ml双抗HanK's液洗2遍，用0.2～0.4ml处理过的标本液接种于细胞管，每份标本接种4管，置35T吸附1～2h后弃标本液，加入病毒培养液，其量为生长液的2倍。如标本液清亮和进行病毒传代时，可不必吸附，直接加入。置33～35℃孵育7d。从第3d开始观察细胞病变（CPE），如细胞出现颗粒增多、变圆、脱落达+++～++++时进行收获。如果7d还不出现CPE，可收集病毒培养液做血细胞凝集试验，在做试验前将细胞管冻融1～2次，以提高病毒滴度。阳性者可测定其血凝滴度并鉴定之，阴性者混合4管细胞液盲传2代，仍为阴性则弃去。

2.3病毒鉴定新分离的病毒可用血细胞凝集抑制试验、补体结合试验和中和试验等方法进行鉴定。最常用和简单的方法是血细胞凝集抑制试验，必要时采用补体结合试验。

2.4快速诊断流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮细胞，在病人呼吸道标本的脱落细胞中含有流感病毒抗原，通过直接检查脱落上皮细胞内抗原即可诊断。标本最好采用负压抽吸法收集呼吸道分泌物。

2.5血清学诊断病毒分离是诊断流感最常用的方法之一，如因各方面因素未分离出病毒，血清学亦可作为一种代替手段，但必须收集急性期和恢复期双份血清，如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上，即可诊断。本章介绍两种常用的方法：血凝抑制试验和中和试验。