高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪讲解

三重四级杆的概念
• 四极杆是质量分析器的一种三重四极杆也 就是一般的LC/MS/MS,一个MS就是一个四 极杆，但是第二个四极杆一般作碰撞室， 所以只有两个MS做质量分析器，即只有 MS/MS,但是一般都叫三重四极杆。当然碰 撞室也不一定是四极杆，也有六极杆的碰 撞室的，但是大家都叫习惯了
案例（目前还在探索过程中）
测定混合物； ➢ 生物大分子产生多电荷离子，其易形成多电荷离子的特
性可分析蛋白质和DNA等生物大分子； ➢ 通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）测定化
合物结构。
大气压化学离子化（APCI）
样品液从由具有雾化气套管的毛细管端流出，经氮气流雾化， 通过加热管被气化，后经电晕尖端放电，溶剂分子被电离形 成溶剂离子，然后雾化气和这些溶剂分子与气态样品分子反 应，得到样品分子的准分子离子
液相色谱——串联质谱法（HPLC-MS/MS) 同时测定地表水中的2,4-二氯酚，2,4,6-
三氯酚，五氯酚，苦味酸。
实验所需要的最佳条件
从以下几个方面来综合考虑 （1）缓冲溶液的选择 （2）缓冲溶液的PH （3）缓冲溶液和流动相甲醇比例的选择 （4）缓冲溶液的浓度
得出最佳的条件
经过不断的实验，和在电脑上观察苦味 酸，2,4-二氯酚，2,4,6-三氯酚，五氯酚 以及苦味酸的峰型并用积分工具得出峰 高峰宽和峰面积，最后发现采用80%的 甲醇与20%缓冲溶液（2mM乙酸铵 PH=4.00）
• 的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的 离
• 子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质 量
• 分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器， • 经记录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，
也 • 就是质谱 (mass spectrum)。
质谱的优点
质谱法的优点： 1、应用范围广 2、分析速度快
•
高灵敏度
• 一广：应用范围广。
• 与气相色谱法相比：高效液相色谱法不受 试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围 广
质谱法(MS)
• 质谱法(MS)：即用电场和磁场将运动 的离子按它们的质荷比分离后进行检 测的方法。
质谱技术
• 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源， 由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）
检出来自百度文库的确定
配制混标溶液，在夜质连用仪器上跑出 图谱后，观察其信号和噪音的比(s/n)， 然后不断的稀释数倍，直至其很小为止 （结合色谱图综合分析）。
标准曲线的绘制
配置储备液 用储备液配置标准物质绘制峰面积和质
量浓度的标准曲线（可是由于实验仪器 出现故障实验告一段落，并未开始做）
后续工作
大气压离子化接口（API）
（1）电喷雾电离（ESI） （2）大气压化学离子化（APCI)
（1）电喷雾电离（EPI）
流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子
电喷雾电离（ ESI）的特点
➢ 通常小分子得到[M+H]+ 、[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子； ➢ 最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接
样品 高效液相色 谱仪
接口
真空系统
质量分析器
数据处理
接口和离子化的方式
接口的作用
将流动相及其样品气化 分离出去大量的流动相分子 完成样品分子的电离
接口和离子化方式
接口的类型
传送带接口（MB） 粒子束接口（PB） 连续流动快原子轰击（CFFAB） 直接导入接口（DLI） 热喷雾接口（TSP） 大气压离子化接口（API）
改善样品分离和缩短分析周期
采取梯度洗脱的方法 不断的尝试设置不同的梯度发现在下面这个梯
度时分析周期较短，并且物质有较好的分离 0.01min 缓冲液b为0% 3.20min缓冲液b为0% 3.21min缓冲液b为20% 9.00min缓冲液b为20% 9.01min stop
考虑地下水基质效应的影响
质量分析器
➢ 双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). ➢ 四极质谱仪(Q). ➢ 离子阱质谱仪（TRAP） ➢ 飞行时间质谱仪(TOF). ➢ 傅里叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS).
┏四极+TOF（Q-TOF） ➢ 串列式多级质谱仪┫三重四极（QqQ）
(MS/MS) ┗TOF+TOF
高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪
高效液相色谱法
• 是色谱法的一个重要分支，以 液体为流动相，采用高压输液 系统，将具有不同极性的单一 溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定 相的色谱柱，在柱内各成分被 分离后，进入检测器进行检测， 从而实现对试样的分析 。
特点
• 四高：高压、高速、高效、
3、灵敏度高，耗样量少
它们的优点，你记住了吗？
高效液相色谱——质谱联用技术
HPLC—MS联用了两者的优点，包括 HPLC的高压、高速、高效、高灵敏度和 MS的分析速度快的优点。可以应用该技 术测定复杂生物样本中的微量药物，同 时也是进行药物及有关物质定性分析的 常用方法。
HPLC-MS仪器组成框架图
因为实验仪器问题和仪器问题我们的实 验告一段落，后续工作如回收率，定量 限，加标回收相对标准偏差，回收率只 能让秦博士独自来完成，希望老师能够 一切顺利。
比较在地下水的情况下和超纯水的情况 下，混标中各物质峰面积的百分比，由 数据得出物质在超纯水在地下水中的峰 面积大约是超纯水中的98%左右，说明 地下中基质效应无明显影响
源参数的优化
考虑电喷雾电离中参数CUR,IS,TEM,GS1， GS20，依次调节发现CUR=20，IS=4500，TEM=550，GS1=50，GS2=50时 峰高最高