蚕豆根尖微核试验

学生设计性实验论文

毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应

姓名雷旭红学号********** 专业生物科学班级132

相关实验课程名称细胞生物学实验＿指导教师郝雪峰

实验学期2014-2015学年第二学期

太原师范学院教务处编印

洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究

摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。结果表明：洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。

Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic

关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤

Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage

引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。所谓环境的一致性，即指环境中物理或化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性。目前环境污染中最主要的三致中的致突变、致畸、致癌的根本常常是致突变的结果。

微核是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅，一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体。在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块，当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。微核是常用的遗传毒理指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界因子的剂量呈正比。因此，可用微核出现的频率来评价环境诱发因子。

蚕豆根尖细胞微核试验(MCNT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核监测方法。它是一种灵敏度高，操作技术简单的用于监测环境致突变的诱变活性对人体和其他生物体遗传物质产生危害的技术。本实验用蚕豆做实验材料，采用MCNT技术，来检测洗衣粉、洗发露的毒性状况。

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1 实验材料：蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）立白洗衣粉奇强洗衣粉超能洗衣粉多芬洗发露沙宣洗发露

1.1.2 实验药品：

立白洗衣粉水奇强洗衣粉水超能洗衣粉水多芬洗发露沙宣洗发露力士洗发露卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1） Gmiesa染液自来水

1.2.3实验用具：

显微镜、试管、蚕豆培养盆、纱布、毛巾、三角瓶、载玻片、盖玻片、小刀、恒温水浴锅、镊子

1.2、实验方法

1.2 方法

1.2.1 浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25℃

下浸泡24小时，

在此期间至少换水两次，所换水应25℃预温。种子吸胀后，用毛巾松散包裹

置洗脸盆中，保持温度，在25℃温箱中催芽12～24小时，待初生根长出2～3mm，

再取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的洗脸盆中，25℃继续催芽，经约36-48小

时，大部分初生根长至1～2cm左右，根毛育良好，此时可用来进行实验。

1.2.2 检测因子处理根尖：选取初生根生长良好，根长一致的种

子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可。

1.2.3 根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水浸洗三次，每

次2～3分钟。洗净后再置入辅有混润滤纸的瓷盘中，25℃

下再恢复培养22～24h。

1.2.4 固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，

用甲醇：冰醋酸（3：1）液固定24小时。固定后的根如不

及时制片，可换入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备

用。

1.2.5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸

净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60℃下水浴酸

解15分钟，幼根软化即可。

1.2.6 染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。

截下1～2mm左右长的根尖，滴加Gmiesa染液，染色10～

15分钟,再用蒸馏水冲洗试材。

1.2.7 压片：将取好的材料放在载玻片上，盖上盖玻片，并用镊

子轻轻的压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。

1.2.8 镜检：细胞核呈紫红色，背景基本为无色，然后在视眼内统计微核数目。

2.结果与分析

2.1 结果

蚕豆根尖微核率和污染指数的统计

2.2 分析

通过分析实验结果，整体分析洗发露的伤害要比洗衣粉的伤害小。在洗发露中，力士洗发露的微核率最小，伤害最小，污染程度小，比较好。而海飞丝洗发露的危害比较大。在洗衣粉中，汰渍洗衣粉的微核率最大，伤害最大，其次是立白洗衣粉、奇强洗衣粉。