黄曲霉毒素B_1检测能力验证分析

实验十一-食品中黄曲霉毒素B1的检测

4．植物油：
用小烧杯称取4.0g样品，用20.0mL石油醚，将样品移于125mL分液漏斗中，用20.0mL 甲醇水(55 ＋45）溶液分次洗烧杯，溶液一并移人分液漏斗中。（精炼油 4.0g样为4.575mL，可直接用移液器加入分液漏斗再加溶剂后振摇）振摇2min，静置分层后，放出下层甲醇水溶液于750mL蒸发皿中。再用5.0mL甲醇水溶液重复振摇提取一次，提取液一并加入蒸发皿中，以下按自“65℃水浴通风挥干”起，依法操作。
二、实验原理：
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，样品中的黄曲霉毒素B1经提取、脱脂、浓缩后与定量特异性抗体反应，多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合，加入酶标记物和底物后显色，与标准曲线比较测定含量。
三、仪器与试剂
（一）试剂盒组成 1、 AFB1抗原包被16孔×6条形带框酶标板； 2、抗体； 3、酶标二抗； 4、空白对照液； 5、底物（1mg×4）； 6、底物液A； 7、底物液B； 8、终止液； 9、PBS一T洗液； 10、一次性手套。（二）仪器 1、酶标仪； 2、离心机。
5．其它食品：可按照G8 5009有关章节提供的方法操作，最终提取物（相当于4.0g样品）应收集于2.0m1 甲醇一PBS(20＋80)中。
（二）样品测定
1、将下列试剂稀释后备用 PBS一T洗液：390mL蒸榴水稀释（1:40）；底物液A: 9mI蒸溜水稀释（1:9）；抗体: 7.0mL洗液稀释（1:140）；酶标二抗:10mL洗液稀释（1:200）；阴性对照液:200μl抗体十200μl空白对照液在玻
3．花生（脂肪含量15.0－45.0％）：
样品去壳去皮粉碎后称取20.0g，加入250mL具塞三角瓶中，准确加人100.0mL甲醇水(55 ＋45）溶液和30mL石油醚,盖塞后滴水封严，150rpm振荡30min，静置15min后用快速定性滤纸过滤于 125mL分液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇水溶液于100mL烧杯内，从中取20.0 mL（相当于4.0g样品）置于另一125mL分液漏斗中，加入20.0mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层（如有乳化现象可滴加甲醇促使分层）．放出三氯甲烷于75mL蒸发皿中，再加 5.0mL三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷层一并于蒸发皿中，以下按上述“65℃水浴通风挥干”起，依法操作。

对食品中黄曲霉毒素B1的检测方法及分析

２０１０ＮＯ．２３S c i enc e a nd T ech n ol o gy I nno v at i on Her a l d研　究　报　告1 黄曲霉毒素B t测定原理与步骤方法在食品中黄曲霉毒素B1检测方法很多,有些样品如薯类及部分酱料、油类样品受样品杂质干扰的影响,因而使方法的灵敏度降低。

目前通常采用双向展开法,可以提高了检测方法的灵敏度,如测定了一份薯类样品,按灵敏度由原法的25ppb提高到5ppb,同时测定了含杂质较多的花生油、酱油及曲种等样品,情况亦是如此。

而原法灵敏度为5ppb的样品(如花生及部分花生油样品等)用双向展开法展开,其灵敏度亦可以进一步提高,有的可提高到1.25ppb。

今将双向展开法的原理及操作步骤介绍如下。

1.1原理因无水乙醚不能推动黄曲霉毒素B-(以下简称B。

)。

在用乙醚将薄层板横展时,可以把干扰的杂质推到样品点的旁边,而不像用乙醚纵展时,有时在样品的过道中留有部分杂质的底色。

在乙醚横展后再用丙酮:氯仿纵展,可以使样品在B1标准点相应处的杂质底色大量的减少.从而提高了原有方法的灵敏度。

1.2试剂(补充的)无水乙醚,分析纯,在无水乙醚中加入少许无水硫酸钠贮存。

1.3操作步骤主要补充双向展开法的操作步骤,其它参照B1测定法。

1.3.1滴加方法由于在具体测定条件下,用无水乙醚展开后Bt仍有很少的移动(因无水乙醚中含微量的水或醇以及空气中的湿度太大等均可以使B,移动),因此在滴加时必需同时滴加两块层析板。

在一块5×20cm的薄层板上距下端3cm的基线上滴加以下两个点:第1个点离左边边距0.8～1cm处滴加B。

标准液Ⅲ(0.04微克/毫升)10微升;第2个点离第一个点的间隔距离约1.8～2.0cm处滴加样液20微升。

在另一块上的滴加样式完全与第一块相同,祗在第二个样品点上再滴加B1标准液Ⅲ0.04(微克/毫升)10毫升。

1.3.2展开方法①横展:在展开槽内的长边放置玻璃支架一个,再加无水乙醚10毫升。

黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡技术性能评测

黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡性能评估测试摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。

该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。

与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。

该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点，非常适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的进行快速定量测定。

关键词：黄曲霉毒素B1快速检测卡；荧光定量免疫层析；黄曲霉毒素B1；粮食谷物饲料黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），具有强致癌性以及剧毒性，是迄今发现的各种真菌毒素中最稳定的一种。

从1993年开始黄曲霉毒素被认定为世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定的一类致癌物，是世界公认的三大强致癌物质之一，而黄曲霉毒素B1由于毒性最大，污染最重，是危害最大的一种黄曲霉毒素。

黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。

目前，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对粮食谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。

GB13078-2001《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中黄曲霉毒素B1的最高限量标准从10-50μg/kg。

目前，国标法测定黄曲霉毒素B1采用HPLC法，需要大型的仪器设备，价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。

除此之外，也有采用黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测卡用于大量样品的筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。

金标免疫层析法检测黄曲霉毒素b1的方法

金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法1.引言黄曲霉毒素B1是一种广泛存在于食品、饲料中的毒素，对人体和动物健康造成严重威胁。

对黄曲霉毒素B1进行有效的检测至关重要。

金标免疫层析法作为一种快速、准确并且易于使用的检测方法，被广泛应用于食品安全和质量控制领域。

本文将就金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法进行探讨，并提供深度和广度兼具的分析，以期帮助您更全面地了解这一检测技术。

2.金标免疫层析法的原理金标免疫层析法是一种基于抗体和抗原之间特异性识别和结合原理的检测方法。

简单来说，它利用了抗体对特定分子的高度特异性识别能力，通过在复杂样品中将目标分子与标记有金纳米颗粒的抗体结合，从而实现对目标分子的定量和定性检测。

金标免疫层析法具有操作简便、快速灵敏、不需要仪器设备等特点，因此在食品安全领域得到了广泛的应用。

3.黄曲霉毒素B1的特性和对人体健康的危害黄曲霉毒素B1是一种热稳定性很强的毒素，它容易在食品和饲料中积累。

长期摄入受污染的食品或饲料会导致人类和动物出现急性或慢性中毒，表现为呕吐、腹泻、免疫抑制等严重症状，甚至可能导致肝癌等疾病的发生。

对黄曲霉毒素B1的检测至关重要，金标免疫层析法作为一种快速、敏感的检测方法，能够有效地帮助人们及时发现并控制食品中的黄曲霉毒素B1污染。

4.金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤通常包括样品制备、抗体标记金纳米颗粒、检测纸条制备和数据读取等。

将样品进行处理，提取其中的黄曲霉毒素B1，并将其与标记有金纳米颗粒的抗体结合。

将混合物加载到检测纸条上，金标免疫层析法会在纸条上形成不同程度的色带，根据色带浓度的变化可以判断出样品中黄曲霉毒素B1的含量。

通过专门的读取设备或者肉眼观察检测纸条上色带的变化来获得测试结果。

5.金标免疫层析法的优势金标免疫层析法作为一种快速、准确、便捷的检测方法，具有以下几点优势。

它无需昂贵的仪器设备，操作简便，使用者无需专业的技术背景即可进行检测。

黄曲霉毒素B_1检测能力验证分析

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谷物化学与品质分析
粮食储藏
２０１４（３）
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黄曲霉毒素Ｂ１检测能力验证分析＊
马冰雪宋立山何建华刘海顺胡瑞丰白福军郭伟薛民杰窦鑫鑫（中储粮北京分公司质量检测中心０６７１００）
第４３卷
黄曲霉毒素Ｂ１检测能力验证分析
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审机构、法定技术机构考核组、实验室的顾客等所进行的评价，同样对实验室进行自我评定也尤为有用。１．２．２补充、完善实验室内部质量控制程序的有效方法。１．２．３补充评审员、技术专家对实验室现场评审的手段。１．２．４增加实验室顾客对实验室持续地出具可靠结果的信任，增强实验室自身的信心。１．２．５为确定某种新的检测方法的有效性和可比性、识别实验室间的差异、为标准物质赋值等其他目的提供信息。
摘要为确保实验室对黄曲霉毒素Ｂ１实验项目的检测能力，保证检测结果的可靠性，实验室在ＣＮＡＳ认可周期内参加了黄曲霉毒素Ｂ１能力验证活动。对能力验证的定义、目的、实施过程、统计方法及结果评价进行了介绍，并对黄曲霉毒素Ｂ１能力验证的测量结果进行了不确定度分析。黄曲霉毒素Ｂ１能力验证Ｚ比分数为ＺＡ＝０．１８、ＺＢ＝－１．３５，能力验证获得满意结果。结果表明我中心黄曲霉毒素Ｂ１实验数据准确、可靠，ＣＮＡＳ认可项目有效。

黄曲霉毒素B1测定

黄曲霉毒素B测定-计算1将浓度为0，0.1，0.25，0.5，1，2ng/ml的AFB系列标准工作溶液，及相对应的吸光1度A值，绘制成标准曲线。

横坐标为标准液浓度的常用对数值（1gC），纵坐标为各标准液孔A值与标准液为0ng/ml 的A值的比值（A标准液/A（0ng/ml））。

A/A0(%)LgC（ng/ml）以样品孔A值与0ng/ml标准孔A比值(A样品/A0×100)在标准曲线上查对应值，可得到相应浓度值C。

按样品浓度（C）的常用对数值lgC，对其求反对数，可求得样品稀释液中AFB1下列公式计算出样品中AFB的含量：1含量（ng/g）=C×V×D/MAFB1浓度（ng/ml）；式中：C:稀释后样品提取液中AFB1V:样品提取液（甲醇水）体积（ml）；M:样品质量（g）；D:样品稀释倍数。

经验计算法：只需做0.1和1ppb两个标样即可。

1）将吸光度A值代入下列公式A3－A样A3－A样LgX=(Lg1-Lg0.1)+Lg0.1=—1A3－A2A3－A2A3－0.1ppb的标样A2－1ppb的标样A样－样品2）将计算出来的数据用计算机反log。

步骤Step：1按计算机上的SHIFT键，再按log键2输入lgX的数值3按=键4得出X值3）再将X值代入下列公式V×DC=X×mX—样品中AFB1稀释后的浓度；C—样品AFB1含量（μg/kg）；D—样品稀释倍数【（提取液+稀释液）/提取液】；m—样品称重g；V—样品提取液体积ml（1:1甲醇水）；。

饲料中黄曲霉毒素B1的检测

中国果菜质量控制黄曲霉毒素B1（AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，是已知的化学物质中致癌性最强的一种。

AFB1污染的物质包括食品中的花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等农产品及其加工产品；且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。

黄曲霉毒素无臭、无味、无色，在饲料中及其稳定，对家禽、家畜的健康威胁极大，作为饲料强制性卫生监控指标，目前有半定量薄层色谱法[1]、免疫亲和柱净化———高效液相色谱法[2]、免疫亲和荧光光度法[3]、酶联免疫吸附法[4]。

高效液相色谱法虽然灵敏度高，但是样品前处理繁琐，操作复杂；薄层色谱法虽然简便，但是灵敏度差，因此研究能够准确、快速检测饲料中AFB1的检测方法是十分必要且具有现实意义的。

1实验部分1.1材料与试剂甲酸，优级纯；乙腈，色谱纯；超纯水；饲料中黄曲霉毒素B1的检测刘超景赞（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）摘要:采用高效液相色谱串联质谱法对饲料中黄曲霉毒素B1进行检测。

建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以0.1%甲酸水、乙腈（0.1%甲酸）为流动相，质谱使用电喷雾离子源，正离子扫描，以313.0/285.0为定量离子对的LC-MS/MS 检测方法。

结果表明：该方法所测得的黄曲霉毒素B1在0~100.0ng/mL 内具有良好线性，检出限为2.8μg/kg ，加标回收率在93.3%~98.3%。

该方法适合饲料中黄曲霉毒素B1的分析检测。

与传统的薄层色谱、高效液相色谱法相比较，该方法具有分析速度快、操作方便、重现性好、灵敏度高等特点。

关键词:饲料；黄曲霉毒素B1；液质联用中图分类号:TS207文献标志码:A文章编号:1008-1038(2015)12-0025-03Detection of AFB1in FeedLIU ChaoJING Zan(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,LeShan 614000,China)Abstract:We tested aflatoxin B1in feed with LC -MS/MS method.A method was developed with novel HPLC columnInertsil ODS -3,Mobile phase was 0.1%methanoic acid water,0.1%methanoic acid acetonitrile,combined with MS,which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 313.0/285.0.A good linear in 0~100.0ng/mL.detection limit was 2.8μg/kg.Adding standard recovery was 93.3%~98.3%.This method has advantages of being fast,easy,reproducible and relatively sensitive compared with TLC and HPLC.Key words:Feed;AFB1;LC-MS/MS收稿日期:2015-06-26作者简介:刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全25. All Rights Reserved.中国果菜质量控制AFB1标准品（2μg/mL，农业部环境保护科研所）。

高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量

分析检测高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量韩宇（四川省甘孜藏族自治州食品药品检验所，四川康定 626000）摘要：目的：建立高效液相色谱法联合免疫磁固相萃取法测定农产品食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）含量的分析方法。

方法：采用70%乙腈溶液提取花生、玉米、大豆、小麦、豌豆和绿豆样品中的AFB1，然后利用免疫磁珠净化、萃取和富集提取液中的AFB1，采用高效液相色谱法进行定量分析。

结果：方法的检出限为0.03～0.92 μg·kg-1，回收率为79.52%～97.53%。

利用该方法对市场上购买的20份花生、玉米、大豆、小麦、豌豆、绿豆样品中的AFB1进行检测，除了玉米和绿豆中未检测出AFB1外，其余实验样品中均检测出一定含量的AFB1。

结论：该方法简便、快速、准确，适用于复杂样品中黄曲霉毒素B1的测定。

关键词：高效液相色谱法；免疫磁固相萃取；黄曲霉毒素B1Determination of Aspergillus Flavus B1 in Agricultural Products by High-Performance Liquid ChromatographyHAN Yu(Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control, Kangding 626000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of Aflatoxin B1 (AFB1) in agricultural products by high performance liquid chromatography combined with immunomagnetic solid phase extraction. Method: AFB1 was extracted from samples of peanuts, corn, soybeans, wheat, peas, and mung beans using a 70% acetonitrile solution, and then AFB1 was purified, extracted and enriched by immunomagnetic beads, and quantitative analysis was performed by HPLC. Result: The limits of detection were 0.03～0.92 μg·kg-1, and the recoveries were 79.52%～97.53%. AFB1 in 20 samples of peanut, corn, soybean, wheat, pea and mung bean purchased from the market was detected by this method. AFB1 content was detected in all the other samples except corn and mung bean. Conclusion: The method is simple, rapid, accurate and suitable for the determination of aﬂatoxin B1 in complex samples.Keywords: high-performance liquid chromatography; immunomagnetic solid-phase extraction; aspergillus flavus B1黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，在自然界中分布广泛，在粮食和饲料等农产品中广泛存在。

黄曲霉毒素B1的测定

4、注意事项
黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一大类结构相似的次级代谢产物。
以外，其他均为衍生物。
黄曲霉主要污染谷物（玉米，大麦，粟，稻子，高粱，小麦），花生、大豆和牛奶及奶制品等。黄曲霉可以诱发多种试验动物发生肝癌。在这些毒素中又以AFB1的毒性及致癌性最强。AFB1的毒性为氰化钾的10倍，砒霜的68倍。
④ 振荡提取3~5min。
⑤ 静置样品，用定性滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。
⑥ 按照AgraQuant® 黄曲霉毒素B1试剂盒步骤进行检测。 ⑦ AFB1含量计算公式为： AFB1(μg/kg)＝N×V×10logc/M
饲料中黄曲霉毒素B1的测定（酶联免疫吸附法）
3、测定步骤
饲料中黄曲霉毒素B1的测定（酶联免疫吸附法）
饲料中黄曲霉毒素B1的测定
内容提要
什么是霉菌毒素
霉菌毒素的产生条件及种类
霉菌毒素的危害及造成的影响
什么是黄曲霉毒素饲料中黄曲霉毒素B1的测定方法
什么是霉菌毒素？
霉菌毒素是由霉菌产生的具有生物毒性的次级代谢产物。
霉菌毒素的特征：
由多种霉菌产生
几乎所有的农作物都可能被污染
已知的霉菌毒素多达300多种
化学性质稳定（耐高温、耐持久、耐加工过程中的各种处理）
霉菌毒素的产生条件
适宜的含水量（自由水或活性水）霉菌生长的适宜的温度
充足的氧气
作物的物理性破坏真菌孢子的存在
霉菌毒素
饲料中常见的真菌毒素(Mycotoxins)包括：
黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1 , AFB1)
T2 肠道出血
霉菌毒素造成的影响
生产性能
• 采食量下降/拒食 • 生长不良

牛乳中黄曲霉毒素B1、M1的检测及降解研究

牛乳中黄曲霉毒素B1、M1的检测及降解研究牛乳中黄曲霉毒素B1、M1的检测及降解研究黄曲霉毒素是一类由产生黄曲霉菌产生的毒素，广泛存在于各种粮食和饲料中，从而进入人和动物的食物链。

其中，黄曲霉毒素B1（AFB1）和黄曲霉毒素M1（AFM1）是最为常见的两种。

牛乳作为重要的食品和饮品之一，其安全性受到广泛关注。

牛乳中若存在黄曲霉毒素B1或其代谢产物黄曲霉毒素M1可能对人体健康带来潜在风险。

因此，牛乳中黄曲霉毒素B1和M1的检测及降解研究具有重要的科研和应用价值。

首先，我们来讨论黄曲霉毒素B1和M1的检测方法。

目前，常用的检测方法主要包括高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）、高效液相色谱-紫外检测器法（HPLC-UV）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。

这些方法能够准确、灵敏地检测出牛乳中的黄曲霉毒素B1和M1含量，并且具备一定的经济性和快速性。

其次，我们来探讨黄曲霉毒素B1和M1的降解研究。

降解黄曲霉毒素B1和M1的方法包括物理方法、化学方法和生物方法。

物理方法主要是通过高温、压力或辐射来降解毒素，但这些方法会导致牛乳中其他营养成分的降解和改变。

化学方法采用化学试剂进行降解，但可能产生不安全的副产物，对人体健康产生潜在威胁。

相比之下，生物方法是一种相对安全有效的降解黄曲霉毒素B1和M1的方法。

常见的生物方法包括微生物降解、酶降解和吸附剂抗毒降解等。

这些方法可以在不破坏牛乳中其他成分的情况下，有效地降解黄曲霉毒素B1和M1。

最后，我们应该加强对牛乳中黄曲霉毒素的监测与控制。

对于批次检测出高含量黄曲霉毒素的牛奶，应采取积极的措施，包括封存、销毁及全面追查等，以保障消费者的食品安全。

此外，应加强对牛奶生产环节的监管，做好质量控制和风险评估。

通过合理的饲料管理和原料筛选，可以减少牛乳中黄曲霉毒素的含量，确保牛奶的质量和安全。

综上所述，牛乳中黄曲霉毒素B1和M1的检测及降解研究是重要的科研领域。

通过准确检测牛乳中的黄曲霉毒素B1和M1含量，并采取合适的降解方法，可以保障牛乳的质量和安全性。

调味品中黄曲霉毒素B1含量结果的不确定度分析

调味品中黄曲霉毒素B1含量结果的不确定度分析目的对调味品中黄曲霉毒素B1结果的不确定度进行评价，建立实验结果的溯源性。

方法采用GB/T5009.23-2006《食品卫生检验方法理化部分》中高效液相色谱法（第三法）；应用测量不确定度理论建立数学模型计算。

结果调味品中黄曲霉毒素B1结果的扩展不确定度为u95=1.43 μg/kg。

结论通过对实验结果不确定度的化学定量分析掌握导致实验结果误差的关键因素，提高实验数据结果的可信性和有效性。

标签：调味品；黄曲霉毒素B1；不确定度评价黄曲霉毒素B1是已知化学物质中致癌性最强的一种，耐热，裂解最低温度为280 ℃，一般烹调加工温度下难以破坏。

花生、玉米、稻谷、小麦等粮油食品是黄曲霉毒素B1污染的主要食物，酿制调味品所使用的稻谷类等可能被黄曲霉毒素B1污染，致使调味品中可能含有这种毒性物质，因此，必须使用适宜的检测方法测定调味中黄曲霉毒素B1含量。

为此笔者应用GB/T5009.23-2006《食品卫生检验方法理化部分》中高效液相色谱法（第三法）检测调味品中黄曲霉毒素B1含量，应用测量不确定度理论建立数学模型，分析掌握导致实验结果误差的关键因素，提高实验数据结果的可信性和有效性。

现将结果报道如下。

1实验部分1.1实验样品来源该单位卫生科采集的调味品安全风险检测黄曲霉毒素B1样品。

1.2实验方法《食品卫生检验方法理化部分》GB/T5009.23-2006。

1.3实验试剂及器材黄曲霉毒素B1标准品制造商给出扩展不确定度为（2.0±1.5）%（农业部环境科研监测所提供）；1、10、20 mL移液管；25、100 mL容量瓶；Aglent1260型液相色谱仪（认证编号BCSJK-LH-039）。

1.4实验操作按《食品卫生检验方法理化部分》GB/T5009.23-2006操作。

1.5计算公式和实验结果2各不确定度来源黄曲霉毒素B1检测过程中各不确定度来源，见表1。

黄曲霉毒素b1国标检测方法

黄曲霉毒素b1国标检测方法
黄曲霉毒素B1的国标检测方法包括薄层分析法（TLC）、液相色谱法（HPLC）、酶联免疫法（ELISA）、毛细管电泳法（CE）和荧光光度法（IAC/SFB）等。

其中，薄层分析法是经典的检测方法，其原理是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将黄曲霉毒素B1从样品中提取出来，经溶剂萃取纯化，再在薄层板上层析展开，分离，利用黄曲霉毒素B1的荧光特性，根据荧光斑点的大小和强弱，比较测定黄曲霉毒素含量。

液相色谱法是一种定性和定量准确的方法，检测速度快且检测限低，可作为仲裁法使用。

酶联免疫法是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应，最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度。

毛细管电泳法是一种国际上较为新的分析方法，该方法与激光减弱荧光检测器（LIF）连用可以很好地提高灵敏度。

荧光光度法也是常用的国标方法。

此外，胶体金检测法也是一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法。

该方法以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液到达指定位置反应、显色来检测样品中黄曲霉毒素B1的含量。

具体操作时，样品中的黄曲霉毒素B1与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体与检测线（T线）上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物之间的结合，导致T 线颜色变化，通过T线颜色的有无来判断黄曲霉毒素B1是否超标。

无论样品中黄曲霉毒素B1的含量高低，质控线（C线）均显色，以示检测有效。

金标免疫层析法检测黄曲霉毒素b1的方法

金标免疫层析法检测黄曲霉毒素b1的方法金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法黄曲霉毒素B1是一种常见的真菌毒素，它主要由黄曲霉（Aspergillus flavus）和黄曲霉（Aspergillus parasiticus）产生。

该毒素存在于多种食品和饲料中，对人类和动物的健康造成严重威胁。

准确、快速、方便的检测方法对于食品和饲料的安全具有重要意义。

金标免疫层析法是一种常用的快速检测方法，它基于免疫学原理，通过专门设计的抗体和标记物来检测目标物质的存在。

在金标免疫层析法中，黄曲霉毒素B1作为目标物质，抗体作为特异性识别元素，标记物质作为信号放大剂。

金标免疫层析法的操作简便、快速，并且不需要复杂的仪器设备，因此在食品和饲料安全领域得到了广泛应用。

下面，我将详细介绍金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的具体步骤和注意事项。

一、样品处理1. 准备样品，可以是食品或饲料样品。

将样品均匀混合，并按照指定的方法制备样品提取液。

2. 进行固相萃取（SPE），用于去除样品中的干扰物质，保证检测结果的准确性。

二、金标免疫层析法操作步骤1. 将经过样品处理的提取液加入金标免疫层析试剂盒中，与试剂盒内的检测试剂混合均匀。

2. 将混合液滴加到试剂盒上的免疫纵向条上，留意不要超过标注线。

3. 将试剂盒放在水平面上，等待约15分钟，待试剂充分反应。

4. 观察试剂盒上是否出现对应黄曲霉毒素B1的条纹。

出现条纹表示样品中存在黄曲霉毒素B1。

三、注意事项1. 操作前请仔细阅读试剂盒的使用说明书，确保准确操作。

2. 使用金标免疫层析法时，请严格按照实验室规范和安全操作流程操作。

3. 样品处理和操作步骤中，应保持操作环境的清洁和无菌。

4. 试剂盒的配套试剂应储存于指定的温度下，避免暴露于高温或阳光直射。

通过金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1，我们可以快速了解食品和饲料中是否存在该有害物质。

然而，金标免疫层析法也存在一些限制，如无法提供毒素的定量信息。

黄曲霉毒素B1检测方法的分析

黄曲霉毒素B1检测方法的分析叶雪珠王小骊赵燕申董秀金(浙江省农科院农产品质量标准研究所,杭州,310021)摘要黄曲霉毒素B1是一种致癌物质,许多国家已将其限量标准提高,黄曲霉毒素B1检测方法的检出限已因其毒性而提高,并已成为国际贸易中新的技术壁垒。

文中介绍了黄曲霉毒素B1的几种常见检测方法,并对其特点及检出限进行了概括性的分析。

关键词黄曲霉毒素B1,检测方法,第一作者:硕士,助理研究员。

收稿时间:2003-07-11黄曲霉毒素(AFT)是公认的天然强致癌物质之一,其中以黄曲霉毒素B1(AFTB1)毒性最大,它们常存在于各种动物饲料和人类食品中。

用污染的饲料饲养畜禽,会导致肉、乳及其制品的污染,人类食用被污染的食品会导致急性中毒,引起肝脏坏死出血,慢性中毒可引起肝癌。

同时用被污染的饲料饲养畜禽会使畜禽生产率降低,增重减慢,造成重大经济损失[1,2]。

迄今为止,急性AFT 中毒病例在世界上许多国家,尤其在发展中国家报道较多。

因此各国对食品及饲料中AFTB1的限量进行了规定[3],欧盟等国在2002年对粮食、花生及其产品中的AFT B1的限量进行了修订,再次提高上述农产品中的AFTB1的限量标准,如供人类直接食用的花生AFTB1限量为 2 g/kg,作为食品原料进口的花生AFTB1限量为 8 g/kg 。

我国也先后于1982、1992和1998年制定并实施了食品和饲料中AFTB1允许含量的强制性国家标准,但限量要求仍低于国外。

目前在出口食品中AFTB1已经成为限制出口的技术壁垒,为保障食用者的健康,应对技术壁垒,在全球贸易竞争中立于不败之地,必须加强AFT B1的监测工作,提高AFTB1的检测技术已是势在必行。

近年来,关于AFTB1的检测方法研究较多,大致可分为薄层层析法(TLC )、液相色谱法(H PLC)和酶联免疫法(ELISA)。

本文根据相关报道,总结分析了AFT B1的几种检测方法,并对其特点及检出限进行了比较。

黄曲霉毒素B1的常见检测方法分析

于５一ｌ２ ℃，并且通常不超过４５ ℃，在这个温度值域中，
仅２０１Ｏ年，我国出口产品就被欧盟通报多次。～方面我国国内的食品安全也需要得到更多重视，另一方面食品的国际市场则需要进一步拓展，因此，必须认真对待黄曲霉毒素Ｂｌ的检测工作。
其相关衍生物成为人类食品安全的重点关注方向。就目前的情况看，我国的食品安全状况并不乐观，
１黄曲霉毒素５０＂（７环境中，并且与２５－４０￣Ｃ环境下尤为活跃，黄曲霉毒素的形成维度则通常不低
以及缺氧的情况下同样可以滋生，并且广存在与定针对性的检测，力求能够准确获取到此种物质的存
ｐＨ２ — ９的环境中，且以ｐＨ２．５－６为最佳生成条件。在黄在状况。结合当前检测技术的发展看，主要存在于黄
检测方法分析以２０－３０ ℃作为其形成的最佳环境，并且当温度低于２常见黄曲霉毒素Ｂ１
１０￣（２时，则不会产生黄曲霉毒素。黄曲霉相对而言对于考虑到黄曲霉毒素Ｂｌ对于当前我国食品安全以及需要面向此种物质展开具有一湿度、含氧量和酸碱性的要求相对宽泛，在极为干旱经济发展的威胁问题，
曲霉毒素家族中，黄曲霉毒素Ｂ１具有加强的毒性，并曲霉毒素Ｂ１检测领域的方法存在如下几种。
且污染频率也居于首位，是当前已知的各种真菌毒素

薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定

实验三薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定(本法参照GB/T 5009·22-2003)一、原理样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。

二、试剂三氯甲烷（AR）正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）甲醇（AR）苯（AR）乙腈（AR）无水乙醚（AR）丙酮（AR）（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰）苯-乙腈(98:2)混合溶液甲醇-水（55:45）混合溶液三氟乙酸（AR）氯化钠（AR）无水硫酸钠（AR）硅胶G （薄层色谱用）5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。

另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。

黄曲霉毒素B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。

使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。

（在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为19800，可根据朗伯-比尔定律求出其浓度）。

黄曲霉毒素B标准应用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素1标准贮备液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

B1标准应用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

素B1标准应用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黄曲霉黄曲霉毒素B1标准应用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。

黄曲霉毒素B1在食品检测中的研究新进展

黄曲霉毒素B1在食品检测中的研究新进展黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB1）是一种由黄曲霉属真菌产生的毒素，是食品中的一种重要致癌物质。

长期摄入含有AFB1的食品会对人体健康产生严重危害，因此对食品中AFB1的快速、准确检测成为了食品安全领域的一大难题。

近年来，随着科技的不断进步，新的检测方法和技术不断涌现，为解决食品中AFB1检测难题提供了新的思路和途径。

本文将对AFB1在食品检测中的研究新进展进行介绍。

一、AFB1在食品中的危害AFB1在食品中主要来自于霉菌污染，常见于谷物、坚果、干果、豆类等多种食品中。

长期摄入含有AFB1的食品会导致慢性中毒，甚至增加患癌症的风险。

根据世界卫生组织的数据显示，全球约有数十亿人口面临着AFB1食品中毒的风险，其中亚洲、非洲地区的风险更为严重。

对食品中AFB1的快速、准确检测显得尤为重要。

二、传统的AFB1检测方法传统的AFB1检测方法主要包括色谱法、免疫测定法和生物学测定法。

色谱法主要包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC），这两种方法可以对AFB1进行准确测定，但需要昂贵的仪器设备和复杂的样品处理步骤，检测周期较长。

免疫测定法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析技术（ICA），这两种方法具有快速、简单、便捷的特点，但也存在着特异性、灵敏度不足的问题。

生物学测定法主要是通过小鼠或大鼠模型对AFB1进行毒性测定，这种方法存在着动物使用受到道德和法律的限制，同时对AFB1的毒性作用不会表现为生物学效应而产生假阴性结果。

传统的AFB1检测方法在特异性、灵敏度和快速性方面存在一定的局限性。

三、新技术在AFB1检测中的应用随着科技的不断进步，新的检测方法和技术不断涌现，为解决食品中AFB1检测难题提供了新的思路和途径。

近年来，基于纳米材料的检测技术在AFB1检测中得到了广泛的应用。

纳米材料具有较大的比表面积和较强的化学活性，能够与目标分子发生特异性作用，因此可以用于构建高灵敏度和高特异性的AFB1检测方法。

矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

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