花粉与花药的培养
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成愈伤组织或胚状体，进而分化成再生植株。 4. 花粉均等分裂途径
花粉进行均等分裂形成两个均等的子核，以后二核 间产生壁，形成两个子细胞，由两个子细胞形成多细胞 团，迅速生长，穿破药壁而形成胚状体或愈伤组织。
第二节 花粉的培养
花粉培养是指把花粉从花药中分离出来， 以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。
三、材料的处理与培养
1. 取材：健壮无病植株中采集花蕾 2. 消毒：
a. 仅用70％酒精棉球将花的表面擦洗即可 b. 花蕾→→ 70％的酒精浸一下→→饱和漂白粉 溶液中浸10~20min或0.1％升汞液消毒7~l0min →→无菌水洗3~5次
花药在消毒前，也可进行预处理，将花蕾剪下
放入水中，在冰箱4~5℃下保持3~4d。低温贮藏后，
遗传等基础理论的最好方法
❖ 快速获得纯合二倍体植株（纯系） ❖ 有利于尽早淘汰隐性的有害个体，筛选出具有优
良性状的个体
花药的培养
第二节 花药培养 一、培养基的选择 二、花药材料的选择 三、材料的处理与培养 四、花粉发育途径
花药的培养
一、培养基的选择
基本培养基： MS、N6、B5等 ❖ 诱导愈伤组织的培养基：添加2，4-D(1~3mg/L ) 。 ❖ 分化培养基：添加6-BA ( 2~3mg／L )和IAA
由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤 组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株。且 不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。 但缺点是培养难度大。
花粉的培养
一、材料的预处理
❖ 花粉经过预处理不但有利于改变正常的发育途径，而
且还可以促进花粉植株的形成。
❖ 处理方法：
1. 低温处理 花蕾剪下放入水中，在4~5℃下保持3~4d。 2. 重力的作用 在烟草花粉培养中，在从花蕾中取出花药 前1h，在5℃条件下进行低温离心机离心，可提高单倍体 的诱导率。
花药的培养
四、花粉的发育过程
1. 营养细胞发育途径 由营养细胞经多次分裂增生形成愈伤组织或胚状体，
进而分化成再生植株。 2. 生殖细胞发育途径
由生殖核经多次分裂发育形成愈伤组织或胚状体， 进而分化成再生植株。
花药的培养
3. 营养细胞和生殖细胞同时发育的途径 营养细胞和生殖细胞各自脱分化、分裂增生共同形
N6+2，4-D的培养基→经10~30d→诱导生成愈伤组织（或 少数生成胚状体） →愈伤组织增殖到1~3mm左右→分化 培养基（附加细胞分裂素和微量生长素） →再经20~30d，
可获花粉植株。
花药的培养
❖ 胚状体为类似于胚的组织，它经过原胚、球形
胚、心形胚、鱼形胚、子叶期的顺序继续分化形成 小植株。
第六章 花药和花粉的培养
本章主要内容 ❖ 花药和花粉的培养的意义 ❖ 花药的培养 ❖ 花粉粒的培养
花药和花粉的培养——意义
第一节 花药和花粉培养的意义
花药是植物花的雄性器官，包括体细胞性质的药壁 和药隔组织，以及雄性性细胞的花粉粒。按染色体的倍 性来看，前者为二倍体细胞，后者为单倍体细胞。
因此，花药培养属器官培养，花粉培养属细胞培养， 但花药培养和花粉培养的目的一样，都是要诱导花粉细 胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。
花粉的培养
三、培养基成分 基本培养基选用Nitsch培养基 培养基中可添加一些物质，诸如硝酸钙、
硫酸、柠檬酸铁、酵母浸出液和椰子胚乳等， 有促进生长的作用。
花粉的培养
四、花粉培养方法
采用看护培养法： 无菌条件下，将花药接种在
固体培养基上→在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸 →用 移液管吸取l滴 每毫升含10个花粉粒的悬浮液接种在滤 纸中央→形成胚状体→分化为单倍体植株。
花粉的培养
二、花粉粒的分离
新鲜未开的花蕾→自来水冲洗10min → 75％的 酒精浸 10~15min →无菌水冲洗2次→ 10％漂白粉浸 泡20min →无菌水冲洗3~4次→将花药放到加有液体培 养基的小烧杯中→在烧杯的壁上挤压花药，散发出花 粉粒→过滤→滤液再经低速离心(100~160r／min) → 再加入新鲜培养基→过滤（滤液每毫升含100~1000个 花粉粒）。
❖ 此途径避免了经由愈伤组织这一复杂过程，可
直接由花粉形成胚状体，免去生根阶段，具有保持 遗传稳定性，发育速度快的特点，所以越来越受人 们研究的重视
花药的培养
❖ 培养花药是直接产生胚状体还是产生愈伤组织，主要
取决于培养基中激素的状况。
❖ 一种植物的花药可以在一种培养基上长幼苗，而在另一
种培养基上则形成愈伤组织。如水稻通常在含有生长素的培 养基上诱导出愈伤组织，而在不含任何激素的N6培养基上 长出胚状体。但在辣椒的花药培养中，只要培养基合适，甚 至可以在同一花药上一部分花粉形成胚状体，而另一部分只 形成愈伤组织。
为什么? ❖ (3)花药培养时培养基配制有什么特点? ❖ (4)花粉培养时怎样使用看护培养。
花药和花粉的培养——意义
一、花药和花粉培养的概念
1. 花药培养的概念：是指将花粉发育到一定阶段的 完整花药接种到培养基上，诱导形成单倍体再生植 株的技术。
2. 花粉培养的概念：是指将离体的花粉粒接种到培 养基上，诱导形成单倍体再生植株的技术。
花药和花粉的培养——意义
二、 花药和花粉培养的意义
❖ 研究减数分裂，花粉生长机制的生理、生化、
(0.2~0.5mg／L) ❖ 生根培养基：单独添加生长素(0.5~lmg／L)。
花药的培养
二、花药材料的选择
根据花粉粒的发育时期选择合适的花药。 具体依据： 1.生理状态：花粉粒发育到单核靠边期。 2. 外观状态：花蕾未开放，达到一定长度。
（按照花蕾长度大小与花粉发育年龄的相关性 ）
Hale Waihona Puke Baidu药的培养
花药容易发生胚状组织。
花药的培养
3. 接种 接种时把花蕾用解剖刀、镊子小心剥开
花蕾，取出花药，注意去掉花丝，然后散落 接种到培养基上，一个l0ml的试管可接种20 个花药。
花药的培养
4. 培养
培养条件：温度23~28℃，光强2000~4000Lx，光照时 间11~16h。
培养过程： 脱分化培养可用MS+2，4-D的培养基或
由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的 物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
花粉的培养
花粉培养发育形成胚的途径：
1. 花粉核分裂产生营养核和生殖核，以后生 殖核退化，营养核则继续分裂2~3周，形成多 核花粉，由此形成多核的原胚；
2. 花粉核直接分裂，再形成胚。
花粉的培养
复习思考题 ❖ (1)花药培养和花粉培养有何区别? ❖ (2)花药培养时选择什么发育时期的花药?
花粉进行均等分裂形成两个均等的子核，以后二核 间产生壁，形成两个子细胞，由两个子细胞形成多细胞 团，迅速生长，穿破药壁而形成胚状体或愈伤组织。
第二节 花粉的培养
花粉培养是指把花粉从花药中分离出来， 以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。
三、材料的处理与培养
1. 取材：健壮无病植株中采集花蕾 2. 消毒：
a. 仅用70％酒精棉球将花的表面擦洗即可 b. 花蕾→→ 70％的酒精浸一下→→饱和漂白粉 溶液中浸10~20min或0.1％升汞液消毒7~l0min →→无菌水洗3~5次
花药在消毒前，也可进行预处理，将花蕾剪下
放入水中，在冰箱4~5℃下保持3~4d。低温贮藏后，
遗传等基础理论的最好方法
❖ 快速获得纯合二倍体植株（纯系） ❖ 有利于尽早淘汰隐性的有害个体，筛选出具有优
良性状的个体
花药的培养
第二节 花药培养 一、培养基的选择 二、花药材料的选择 三、材料的处理与培养 四、花粉发育途径
花药的培养
一、培养基的选择
基本培养基： MS、N6、B5等 ❖ 诱导愈伤组织的培养基：添加2，4-D(1~3mg/L ) 。 ❖ 分化培养基：添加6-BA ( 2~3mg／L )和IAA
由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤 组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株。且 不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。 但缺点是培养难度大。
花粉的培养
一、材料的预处理
❖ 花粉经过预处理不但有利于改变正常的发育途径，而
且还可以促进花粉植株的形成。
❖ 处理方法：
1. 低温处理 花蕾剪下放入水中，在4~5℃下保持3~4d。 2. 重力的作用 在烟草花粉培养中，在从花蕾中取出花药 前1h，在5℃条件下进行低温离心机离心，可提高单倍体 的诱导率。
花药的培养
四、花粉的发育过程
1. 营养细胞发育途径 由营养细胞经多次分裂增生形成愈伤组织或胚状体，
进而分化成再生植株。 2. 生殖细胞发育途径
由生殖核经多次分裂发育形成愈伤组织或胚状体， 进而分化成再生植株。
花药的培养
3. 营养细胞和生殖细胞同时发育的途径 营养细胞和生殖细胞各自脱分化、分裂增生共同形
N6+2，4-D的培养基→经10~30d→诱导生成愈伤组织（或 少数生成胚状体） →愈伤组织增殖到1~3mm左右→分化 培养基（附加细胞分裂素和微量生长素） →再经20~30d，
可获花粉植株。
花药的培养
❖ 胚状体为类似于胚的组织，它经过原胚、球形
胚、心形胚、鱼形胚、子叶期的顺序继续分化形成 小植株。
第六章 花药和花粉的培养
本章主要内容 ❖ 花药和花粉的培养的意义 ❖ 花药的培养 ❖ 花粉粒的培养
花药和花粉的培养——意义
第一节 花药和花粉培养的意义
花药是植物花的雄性器官，包括体细胞性质的药壁 和药隔组织，以及雄性性细胞的花粉粒。按染色体的倍 性来看，前者为二倍体细胞，后者为单倍体细胞。
因此，花药培养属器官培养，花粉培养属细胞培养， 但花药培养和花粉培养的目的一样，都是要诱导花粉细 胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。
花粉的培养
三、培养基成分 基本培养基选用Nitsch培养基 培养基中可添加一些物质，诸如硝酸钙、
硫酸、柠檬酸铁、酵母浸出液和椰子胚乳等， 有促进生长的作用。
花粉的培养
四、花粉培养方法
采用看护培养法： 无菌条件下，将花药接种在
固体培养基上→在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸 →用 移液管吸取l滴 每毫升含10个花粉粒的悬浮液接种在滤 纸中央→形成胚状体→分化为单倍体植株。
花粉的培养
二、花粉粒的分离
新鲜未开的花蕾→自来水冲洗10min → 75％的 酒精浸 10~15min →无菌水冲洗2次→ 10％漂白粉浸 泡20min →无菌水冲洗3~4次→将花药放到加有液体培 养基的小烧杯中→在烧杯的壁上挤压花药，散发出花 粉粒→过滤→滤液再经低速离心(100~160r／min) → 再加入新鲜培养基→过滤（滤液每毫升含100~1000个 花粉粒）。
❖ 此途径避免了经由愈伤组织这一复杂过程，可
直接由花粉形成胚状体，免去生根阶段，具有保持 遗传稳定性，发育速度快的特点，所以越来越受人 们研究的重视
花药的培养
❖ 培养花药是直接产生胚状体还是产生愈伤组织，主要
取决于培养基中激素的状况。
❖ 一种植物的花药可以在一种培养基上长幼苗，而在另一
种培养基上则形成愈伤组织。如水稻通常在含有生长素的培 养基上诱导出愈伤组织，而在不含任何激素的N6培养基上 长出胚状体。但在辣椒的花药培养中，只要培养基合适，甚 至可以在同一花药上一部分花粉形成胚状体，而另一部分只 形成愈伤组织。
为什么? ❖ (3)花药培养时培养基配制有什么特点? ❖ (4)花粉培养时怎样使用看护培养。
花药和花粉的培养——意义
一、花药和花粉培养的概念
1. 花药培养的概念：是指将花粉发育到一定阶段的 完整花药接种到培养基上，诱导形成单倍体再生植 株的技术。
2. 花粉培养的概念：是指将离体的花粉粒接种到培 养基上，诱导形成单倍体再生植株的技术。
花药和花粉的培养——意义
二、 花药和花粉培养的意义
❖ 研究减数分裂，花粉生长机制的生理、生化、
(0.2~0.5mg／L) ❖ 生根培养基：单独添加生长素(0.5~lmg／L)。
花药的培养
二、花药材料的选择
根据花粉粒的发育时期选择合适的花药。 具体依据： 1.生理状态：花粉粒发育到单核靠边期。 2. 外观状态：花蕾未开放，达到一定长度。
（按照花蕾长度大小与花粉发育年龄的相关性 ）
Hale Waihona Puke Baidu药的培养
花药容易发生胚状组织。
花药的培养
3. 接种 接种时把花蕾用解剖刀、镊子小心剥开
花蕾，取出花药，注意去掉花丝，然后散落 接种到培养基上，一个l0ml的试管可接种20 个花药。
花药的培养
4. 培养
培养条件：温度23~28℃，光强2000~4000Lx，光照时 间11~16h。
培养过程： 脱分化培养可用MS+2，4-D的培养基或
由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的 物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
花粉的培养
花粉培养发育形成胚的途径：
1. 花粉核分裂产生营养核和生殖核，以后生 殖核退化，营养核则继续分裂2~3周，形成多 核花粉，由此形成多核的原胚；
2. 花粉核直接分裂，再形成胚。
花粉的培养
复习思考题 ❖ (1)花药培养和花粉培养有何区别? ❖ (2)花药培养时选择什么发育时期的花药?