细菌的生化试验PPT课件
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5．在滤纸片上滴加试剂时不要过多，以刚润湿纸片 为宜，如滤纸片过湿，可能妨碍空气与细菌接触，延 长反应时间，造成假阴性。
过氧化氢酶试验
【原理】 过氧化氢酶试验又称触酶试 验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过 程中与空气中的氧发生反应，形成过氧 化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会 破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己 ，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解 过氧化氢，形成水和氧气。
2．结果：发酵 特征试管颜色不变而 氧化特征试管颜色变 黄，表明试验细菌的 葡萄糖分解代谢为氧 化型；两管颜色均变 黄色为发酵型；两支 培养管颜色均不变为 产碱型或不活动型。 O管 F管
O管 F管
糖发酵试验
三．甲基红试验：
原理：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸 、乳酸和琥珀酸等，使培养pH下降至4.5以下 时，加入甲基红指示剂呈现红色。如细菌分解 葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其 它物质(如醇、酮、醛、气体和水)，培养基pH 在5.4以上，甲基红(MR)试验呈橘黄色。
VP阴性
VP阳性
五．β—半乳糖苷酶试验(ONPG试验) ：
细 菌需 分二 解种 乳酶
糖
半乳糖苷渗透酶 β—半乳糖苷
迟缓分解乳糖的细菌可产生β—半乳糖苷酶， 能分解邻硝基酚-β-半乳糖苷(ONPG)而释放出黄 色的邻硝基酚。故此试验又称为ONPG试验。
六．七叶苷水解试验：
1．原理：七叶苷可被细菌水解，生成葡 萄糖和七叶素。七叶素与培养基中的枸橼酸铁 的二价铁离子反应生成黑色的化合物，使培养 基变黑。
硝酸盐还原试验是测定还原过程 中生成的亚硝酸。
硝 酸 盐 还 原 试 验
阴性
阳性
氧化酶试验
【原理】 氧化酶又称细胞色素氧化酶 ，能将还原型细胞色素C氧化形成水和 氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再 使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应 。
氧化酶试验
【试剂与器材】 1．菌种 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 2．试剂 氧化酶试剂（1%四甲基对苯
U阳性 U阴性
四．苯丙氨酸脱氨酶试验：
细菌分解氨基酸，
可通过脱氨基或羧基生 成反应物，这些反应由 酶反应进行的，试验应 选择合适底物。有些细 菌能产生苯丙氨酸脱氨 酶，使苯丙氨酸氧化脱 氨后生成苯丙酮酸，与 三氯化铁试剂产生深绿 色反应。
苯丙氨酸脱氨酶试验 阴性 阳性
第三 碳源利用试验
枸橼酸盐利用试验
过氧化氢酶试验
2．结果： 呈现红色者为阳性； 橘黄色为阴性； 橘红色为弱阳性。
MR阴性 MR阳性
四．V-P试验：
某些细菌分解葡萄糖后生成丙酮酸， 丙酮酸的分解产物则因细菌种类不同而有 差别，如产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧产生 中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱 性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰，在α奈酚的催化作用下与培养基中氨基酸如精 氨酸中的胍基化合物络合形成红色的化合 物，即V-P试验阳性。
氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）
氧化酶试验
【注意事项】
1．实验中的菌种要求新培养的，不宜用陈旧的培养 物。
2．刮取细菌时不可碰到培养基，不可用接种环等金 属物品取菌。
3．氧化酶试剂要新鲜配制，一般装在棕色瓶中，放 在冰箱中可保存一周，时间长了易被空气氧化变色。
4．结果要立刻观察，1min内变色者为阳性，超过 1min变色的为阴性。
2．结果：培养基变为黑色或棕黑色者为 阳性，不变色者为阴性。
第二 蛋白质和氨基酸代谢试验
一．吲哚试验(靛基质试验)
有些细菌具有色
氨酸酶，能分解培养 基中的色氨酸，生成 吲哚。吲哚与试剂对 位二甲氨基苯甲醛作 用，形成玫瑰吲哚而 呈红色。
I阴性
I阳性
二．尿素酶试验：
某些细菌能 产生尿素酶，分 解尿素产生氨， 使培养基变碱， 使酚红指示剂变 红色。
二胺） 3．器材 2cm×2cm滤纸片、污物缸
氧化酶试验
【操作步骤】 1．将滤纸片叠成四方块状。 2．用滤纸片的中心尖角小心刮取大肠埃
希菌菌落，注意不可碰到培养基。
3．轻轻展开滤纸片，刮取的菌落正好在 滤纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二 胺。
4．立刻观察菌落颜色的变化。
氧化酶试验
【结果】 滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立 刻变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变 色，为氧化酶阴性。
第三节 细菌的生化鉴定技术
细菌的基本鉴定技术
生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和 降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基 酸的能力可以了解其生化活性，从而识 别和鉴定细菌。
免疫学鉴定（血清学鉴定） 编码鉴定
第一 碳水化合物代谢试验
一、糖（醇、苷）类发酵试验：
原理：各种细菌含有 发酵不同糖类的酶，分糖 类的能力各不相同，且不 同细菌分解同一种糖的代 谢产物也不一定相同。
糖发酵试验结果判断
反应现象
结果描述
酸性变色、有气泡 酸性变色、无气泡
培养基不变色
分解××糖产酸、产气
分解××糖产酸、不产 气
不分解××糖
二．葡萄糖的氧化/发酵试验：
1．原理：细菌在分解葡萄糖的代谢过程 中根据对氧分子参加的需要，分成三种类型 ：需要分子氧参加的为氧化型；能进行无氧 降解的为发酵型，发酵型细菌无论在有氧或 无氧环境中都能分解葡萄糖。在有氧和厌氧 环境中都不能分解葡萄糖的细菌为产碱型或 不活动型细菌。
在枸橼酸盐培养基
中，细菌能利用的碳源 只有枸橼酸盐，分解后 生成碳酸钠，使培养基 变碱性，pH指示剂溴麝 香草酚蓝由淡绿色变为 深蓝色。能利用枸橼酸 盐作为碳源的细菌也可 利用氮源。
C阴性
C阳性
第四 呼吸酶类试验
硝酸盐还原试验
硝酸盐还原反应包括两个过程：即细菌在合成代 谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，由氨转化为 氨基酸和细胞内其它含氮化合物；细菌在分解代谢过 程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的 终末受氢体。硝酸盐还原的过程可因细菌不同而产物 各异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐；有的细 菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌还 能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮；有的细菌还可以将 其还原产物在合成代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸 盐如果还原生成气体的终末产物，如氮和氧化氮，称 为脱硝化作用。
过氧化氢酶试验
【原理】 过氧化氢酶试验又称触酶试 验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过 程中与空气中的氧发生反应，形成过氧 化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会 破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己 ，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解 过氧化氢，形成水和氧气。
2．结果：发酵 特征试管颜色不变而 氧化特征试管颜色变 黄，表明试验细菌的 葡萄糖分解代谢为氧 化型；两管颜色均变 黄色为发酵型；两支 培养管颜色均不变为 产碱型或不活动型。 O管 F管
O管 F管
糖发酵试验
三．甲基红试验：
原理：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸 、乳酸和琥珀酸等，使培养pH下降至4.5以下 时，加入甲基红指示剂呈现红色。如细菌分解 葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其 它物质(如醇、酮、醛、气体和水)，培养基pH 在5.4以上，甲基红(MR)试验呈橘黄色。
VP阴性
VP阳性
五．β—半乳糖苷酶试验(ONPG试验) ：
细 菌需 分二 解种 乳酶
糖
半乳糖苷渗透酶 β—半乳糖苷
迟缓分解乳糖的细菌可产生β—半乳糖苷酶， 能分解邻硝基酚-β-半乳糖苷(ONPG)而释放出黄 色的邻硝基酚。故此试验又称为ONPG试验。
六．七叶苷水解试验：
1．原理：七叶苷可被细菌水解，生成葡 萄糖和七叶素。七叶素与培养基中的枸橼酸铁 的二价铁离子反应生成黑色的化合物，使培养 基变黑。
硝酸盐还原试验是测定还原过程 中生成的亚硝酸。
硝 酸 盐 还 原 试 验
阴性
阳性
氧化酶试验
【原理】 氧化酶又称细胞色素氧化酶 ，能将还原型细胞色素C氧化形成水和 氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再 使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应 。
氧化酶试验
【试剂与器材】 1．菌种 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 2．试剂 氧化酶试剂（1%四甲基对苯
U阳性 U阴性
四．苯丙氨酸脱氨酶试验：
细菌分解氨基酸，
可通过脱氨基或羧基生 成反应物，这些反应由 酶反应进行的，试验应 选择合适底物。有些细 菌能产生苯丙氨酸脱氨 酶，使苯丙氨酸氧化脱 氨后生成苯丙酮酸，与 三氯化铁试剂产生深绿 色反应。
苯丙氨酸脱氨酶试验 阴性 阳性
第三 碳源利用试验
枸橼酸盐利用试验
过氧化氢酶试验
2．结果： 呈现红色者为阳性； 橘黄色为阴性； 橘红色为弱阳性。
MR阴性 MR阳性
四．V-P试验：
某些细菌分解葡萄糖后生成丙酮酸， 丙酮酸的分解产物则因细菌种类不同而有 差别，如产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧产生 中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱 性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰，在α奈酚的催化作用下与培养基中氨基酸如精 氨酸中的胍基化合物络合形成红色的化合 物，即V-P试验阳性。
氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）
氧化酶试验
【注意事项】
1．实验中的菌种要求新培养的，不宜用陈旧的培养 物。
2．刮取细菌时不可碰到培养基，不可用接种环等金 属物品取菌。
3．氧化酶试剂要新鲜配制，一般装在棕色瓶中，放 在冰箱中可保存一周，时间长了易被空气氧化变色。
4．结果要立刻观察，1min内变色者为阳性，超过 1min变色的为阴性。
2．结果：培养基变为黑色或棕黑色者为 阳性，不变色者为阴性。
第二 蛋白质和氨基酸代谢试验
一．吲哚试验(靛基质试验)
有些细菌具有色
氨酸酶，能分解培养 基中的色氨酸，生成 吲哚。吲哚与试剂对 位二甲氨基苯甲醛作 用，形成玫瑰吲哚而 呈红色。
I阴性
I阳性
二．尿素酶试验：
某些细菌能 产生尿素酶，分 解尿素产生氨， 使培养基变碱， 使酚红指示剂变 红色。
二胺） 3．器材 2cm×2cm滤纸片、污物缸
氧化酶试验
【操作步骤】 1．将滤纸片叠成四方块状。 2．用滤纸片的中心尖角小心刮取大肠埃
希菌菌落，注意不可碰到培养基。
3．轻轻展开滤纸片，刮取的菌落正好在 滤纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二 胺。
4．立刻观察菌落颜色的变化。
氧化酶试验
【结果】 滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立 刻变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变 色，为氧化酶阴性。
第三节 细菌的生化鉴定技术
细菌的基本鉴定技术
生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和 降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基 酸的能力可以了解其生化活性，从而识 别和鉴定细菌。
免疫学鉴定（血清学鉴定） 编码鉴定
第一 碳水化合物代谢试验
一、糖（醇、苷）类发酵试验：
原理：各种细菌含有 发酵不同糖类的酶，分糖 类的能力各不相同，且不 同细菌分解同一种糖的代 谢产物也不一定相同。
糖发酵试验结果判断
反应现象
结果描述
酸性变色、有气泡 酸性变色、无气泡
培养基不变色
分解××糖产酸、产气
分解××糖产酸、不产 气
不分解××糖
二．葡萄糖的氧化/发酵试验：
1．原理：细菌在分解葡萄糖的代谢过程 中根据对氧分子参加的需要，分成三种类型 ：需要分子氧参加的为氧化型；能进行无氧 降解的为发酵型，发酵型细菌无论在有氧或 无氧环境中都能分解葡萄糖。在有氧和厌氧 环境中都不能分解葡萄糖的细菌为产碱型或 不活动型细菌。
在枸橼酸盐培养基
中，细菌能利用的碳源 只有枸橼酸盐，分解后 生成碳酸钠，使培养基 变碱性，pH指示剂溴麝 香草酚蓝由淡绿色变为 深蓝色。能利用枸橼酸 盐作为碳源的细菌也可 利用氮源。
C阴性
C阳性
第四 呼吸酶类试验
硝酸盐还原试验
硝酸盐还原反应包括两个过程：即细菌在合成代 谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，由氨转化为 氨基酸和细胞内其它含氮化合物；细菌在分解代谢过 程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的 终末受氢体。硝酸盐还原的过程可因细菌不同而产物 各异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐；有的细 菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌还 能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮；有的细菌还可以将 其还原产物在合成代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸 盐如果还原生成气体的终末产物，如氮和氧化氮，称 为脱硝化作用。