发光原理介绍-罗氏-贝克曼
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
4.罗氏电化学发光原理
4.罗氏电化学发光原理罗氏电化学发光原理电化学发光免疫分析原理杨明忠 12/____罗氏电化学发光原理免疫检测技术的发展电化学发光系统及其原理电化学发光技术的优势罗氏电化学发光原理免疫检测技术的发展电化学发光系统及其原理电化学发光技术的优势罗氏电化学发光原理技术创新领先的免疫检测新技术-ECL电化学发光放免酶免荧光免疫化学发光1960‘S1970_80‘S____‘S1,抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2,从手工操作向全自动分析仪的转变 3,从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变罗氏电化学发光原理放射免疫测定法1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法(RIA),大大提高了免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域。
缺点半衰期短，试剂货架期不长。
标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。
反应时间长，操作步骤很难自动化。
使用放射性核素，对人体有一定的危害性。
分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。
罗氏电化学发光原理酶免疫测定法1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法(ELISA),这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。
缺点试剂制备困难。
操作步骤复杂，耗时长。
影响因素多，质量控制难以保证。
最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性不如发光免疫技术。
各实验室操作不规范，质量难以保证。
有学者认为ELISA 技术已逐步走向退化，可能会逐步退出临床实验室。
罗氏电化学发光原理化学发光免疫测定法化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。
由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA,而且试剂较稳定，并可进行全自动分析。
缺点采用标记催化酶(如辣根过氧化物酶)或化学发光分子(如鲁米诺)的方法，其化学反应一般不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中易发生裂变，导致反应结果不稳定。
全自动化学发光分析仪性能参数比较罗氏雅培贝克曼拜耳等收集自网络
附件一标准曲线稳定期28天（7天－lowvolume）28天（7天－lowvolume）28天（8天－lowvolume）28天56天28天56天●检测项目★甲状腺、激素、肿瘤标志物、肝炎、心肌标志物、贫血、骨标志、糖尿病、和免疫球蛋白等70多个项目，种类齐全，且每年有新项目上市。
★甲状腺、激素、肿瘤标志物、肝炎、心肌标志物、贫血、骨标志、糖尿病、和免疫球蛋白等70多个项目，种类齐全，且每年有新项目上市。
★甲状腺、激素、肿瘤标志物、肝炎、心肌标志物、贫血、骨标志、糖尿病、和免疫球蛋白等70多个项目，种类齐全，且每年有新项目上市。
30项左右，项目数太少，不利于以后的项目开展。
★TORCH、肝炎、肿瘤、性激素、甲状腺、代谢类、EB病毒、贫血、自身免疫疾病、心肌标记物、脓毒血症、骨与矿物质、等80余项。
项目有限，乙肝两对半定量等常用项目不全。
可扩展性可以与c501组成cobas 6000血清工作站，并可有多种组合方式。
可以与c301组成cobas 4000血清工作站，并可有多种组合方式。
可以与c8000全自动生化仪组成ARCHITECTci8200。
单机系统单机系统，与DxC800连接需要额外的硬件支持整体评价：一、从技术的先进性二、罗氏E601能满足三、罗氏E411除了速四、雅培i2000主要缺五、贝克曼DxI800，六、索灵LIAISON速度七、进口全自动化学*雅培是传染病（肝炎ACS系列第三代产品56天。
一文解读罗氏、雅培、贝克曼、西门子、梅里埃等8大国际巨头化学发光篇！
⼀⽂解读罗⽒、雅培、贝克曼、西门⼦、梅⾥埃等8⼤国际巨头化学发光篇！4. 化学发光跨国巨头的沧海桑⽥跨国巨头的发光产品从21世纪初进⼊中国，四⼤家（RABS）以不同的节奏进⼊中国，2003年西门⼦最早进⼊中国市场，随后贝克曼，雅培等企业纷⾄沓来，2006年罗⽒的电化学发光进⼊中国，进⼝品牌迅速扩张领⼟。
注：以上数据以拿到CFDA注册证为依据2003-2013，短短的10年时间，化学发光的市场容量到达百亿，随着可检测项⽬的逐步丰富和开发，发光市场仍然以2年翻⼀倍的速度在不断扩张。
化学发光在全球体外诊断细分中增速保持前三，⽽从地理区域的维度来看，中国是发展最为迅速的市场，2011-2016年复合增速为30%，RABS的年度报告中都可以看到，中国区域成为了增长区域最快的市场，未来3年仍将处于⾼速发展中。
由于化学发光的多品牌并⾏现象，各⼤品牌都能保持很⾼的增速。
2011-2016年期间，进⼝品牌都保持25%以上的复合增速，未来3年也将保持20-15%的平均增速。
4.1. 罗⽒（Roche）综合实⼒强劲，稳居IVD头把交椅罗⽒1896 年于瑞⼠成⽴，2015年罗⽒全球475亿美⾦，药品占78%，诊断占22%。
罗⽒优秀的产品和积极的销售策略，使得他各条产品线表现都⾮常优秀，综合实⼒在体外诊断领域排全球第⼀。
免疫领域，罗⽒以电化学发光为其核⼼产品，该产品是由宝灵曼1996年研发⽽成，具有核⼼专利保护，被称为第四代化学发光。
罗⽒公司1997年收购宝灵曼公司后，产品不断升级换代，⽬前以170 T/H的E170和86T/H的E411为主要产品。
2016年罗⽒电化学发光专利正式过期。
⽬前罗⽒化学发光项⽬共有105个，项⽬范围涵盖齐全，包括甲状腺功能、激素、过敏、唐⽒综合征、糖尿病、贫⾎、先兆⼦痫、肿瘤标志物、⼼肌标志物、浓毒⾎症、移植药物、传染性疾病、传染性疾病、⾻标志物和⾃⾝免疫等15⼤类菜单。
罗⽒拳头套餐为肿瘤标志物，其菜单也在不断的完善中，市场推⼴以学术推⼴为主要风格、样本量达到⼀定数量的医院⼚家派⼈驻点直销，由于罗⽒除了诊断产品，还有药品和病理产品，所以在临床的推⼴可以⼀体化推⼴。
罗氏电化学发光原理培训课件
三联吡啶钌和三丙胺在电极表面发生的电化学发光反应
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电化学发光原理
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底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS)
三丙胺(TPA)
在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧 化反应，2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标 记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* ， TPA+* 很不稳定，自发地失 去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的 [Ru(bpy)3+3] ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧 化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子，重新 形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行，产生许 多光子。使得光信号增强。
检测时需对结合相与游离相进行分离，操作步骤多。
反应原理相对落后。
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电化学发光免疫技术
电化学发光免疫测定法（ECLIA）发展于 1996年，它在 发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是 电化学和免疫测定相结合的产物。
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电化学发光
放免
酶免 荧光免疫 化学发光
1960‘S 1970~80‘S
罗氏电化学发光原理PPT
电极
在电化学反应中用于导通 电流并发生电化学反应的 界面。
电极反应与电子转移
电极反应
在电极上发生的化学反应， 通常伴随着电子的得失。
电子转移
在电化学反应中，电子从 一个原子或分子转移到另 一个原子或分子的过程。
氧化还原反应
涉及电子得失的反应，其 中某些物质被氧化（失去 电子），而另一些物质被 还原（获得电子）。
食品工业
用于检测食品中的有害物质和营养成分，保证食 品安全和营养价值。
农业领域
可用于检测农产品中的农药残留和营养成分，提 高农产品的质量和安全性。
05
结论
罗氏电化学发光原理的意义与价值
罗氏电化学发光原理在电化学和发光领域具有重要地位，为相关领域的研究和应用提供了重要的理论 支撑和实践指导。
该原理的应用范围广泛，包括生物传感器、环境监测、医学诊断等领域，对推动相关领域的技术进步和 产业发展具有重要意义。
罗氏电化学发光原理
• 引言 • 电化学基础知识 • 罗氏电化学发光原理详解 • 罗氏电化学发光的应用 • 结论
01
引言
目的和背景
01
探索罗氏电化学发光原理的基本 概念和应用领域。
02
分析该原理在医学、生物技术和 环境监测等领域的重要性和潜力 。
罗氏电化学发光原理概述
罗氏电化学发光是一种基于电化 学反应和发光现象的检测技术。
04
罗氏电化学发光的应用
在生物检测领域的应用
生物分子检测
罗氏电化学发光技术可用于检测 生物分子，如DNA、RNA、蛋白 质等，具有高灵敏度和特异性。
免疫分析
通过与抗体或抗原结合，用于检测 各种生物标志物，如肿瘤标志物、 激素、药物等。
贝克曼发光原理
贝克曼发光原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊贝克曼发光原理。
这玩意儿啊，就像是一个神奇的魔法盒子，一旦打开，就能带来意想不到的光芒。
你想想看，那夜晚的萤火虫，一闪一闪的，多有意思啊！贝克曼发光原理就有点像萤火虫发光，只不过更加复杂和奇妙。
它就像是一个隐藏在科学世界里的小秘密，等待着我们去发现和探索。
说起来，贝克曼发光原理可不简单呢！它涉及到各种化学反应和能量转换。
这就好比一场精彩的魔术表演，看似普通的东西，在魔术师的手中就能变得神奇无比。
那一道道光芒的出现，不就是魔术师的精彩杰作嘛！我们的生活中其实有很多和贝克曼发光原理相关的东西哦。
比如那些漂亮的霓虹灯，它们能发出五彩斑斓的光，给城市的夜晚增添了许多魅力。
这难道不是贝克曼发光原理在大显身手吗？还有那些发光的玩具，小朋友们可喜欢啦！每次看到它们亮起来，孩子们的眼睛里都闪烁着兴奋的光芒，就好像看到了最心爱的宝贝一样。
那贝克曼发光原理到底是怎么回事呢？其实啊，就是一些物质在特定的条件下，能够吸收能量，然后再以光的形式释放出来。
这就好像我们人吃饭，把食物的能量吸收了，然后再转化为我们活动的动力。
是不是很有意思呢？再想想看，如果没有贝克曼发光原理，我们的世界会变成什么样呢？夜晚可能会变得漆黑一片，没有了那些美丽的灯光，城市也会失去很多活力。
哎呀，那可真是不敢想象啊！所以说啊，贝克曼发光原理可真是个了不起的东西！它就像一个默默奉献的英雄，虽然我们可能平时不太注意它，但它却一直在为我们的生活增添光彩。
我们应该好好感谢它，不是吗？总之，贝克曼发光原理是一个充满魅力和神奇的领域。
它让我们看到了科学的力量和美妙，也让我们对这个世界有了更多的好奇和探索欲望。
让我们一起继续深入了解它，说不定还能发现更多有趣的东西呢！这就是我对贝克曼发光原理的理解啦，你们觉得呢？。
罗氏电化学发光原理
罗氏电化学发光原理罗氏电化学发光原理是指在电化学发光（Electrochemiluminescence，ECL）过程中，通过电化学手段激发物质发光的原理。
这一原理在生物医学领域中有着广泛的应用，特别是在免疫分析和生物传感器领域。
本文将对罗氏电化学发光原理进行详细介绍，以便更好地理解其在实际应用中的作用。
首先，罗氏电化学发光原理的基本过程是通过电化学反应来产生激发态物质，从而激发发光。
这一过程通常涉及到两种基本的反应，氧化还原反应和化学发光反应。
在氧化还原反应中，通过施加电压或电流，使得电极上的物质发生氧化还原反应，产生激发态物质。
而在化学发光反应中，激发态物质通过与另一种物质发生化学反应，释放出光子，产生发光现象。
这两种反应的结合，构成了罗氏电化学发光的基本原理。
其次，罗氏电化学发光原理的应用主要集中在生物医学领域。
在免疫分析中，罗氏电化学发光被广泛应用于检测生物分子，如蛋白质、核酸和细胞等。
通过将待测物与特定的标记物结合，利用罗氏电化学发光技术来检测标记物的信号强度，从而实现对待测物的定量分析。
在生物传感器领域，罗氏电化学发光也被用于构建高灵敏度、高选择性的生物传感器，用于检测生物分子的存在和浓度。
此外，罗氏电化学发光原理还具有许多优势。
首先，它具有高灵敏度和高选择性，能够在复杂的生物样品中进行精准的分析。
其次，罗氏电化学发光技术还具有快速、简便的特点，适用于高通量的实验操作。
此外，由于其不需要外部光源的激发，可以减少背景信号的干扰，提高检测的准确性。
总的来说，罗氏电化学发光原理是一种重要的生物分析技术，具有广泛的应用前景。
通过对其原理和应用的深入理解，可以更好地推动生物医学领域的研究和应用，为人类健康事业做出更大的贡献。
在实际应用中，我们需要不断改进和优化罗氏电化学发光技术，提高其灵敏度、稳定性和成本效益，以满足不断增长的生物医学研究和临床检测需求。
相信随着技术的不断进步和创新，罗氏电化学发光原理将会发挥更加重要的作用，为人类健康事业带来更多的突破和进步。
化学发光原理
1
化学发光原理
A+B→[I]→产物+光
反应试剂A和B反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳 定，很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通 常为可见光）的形式发射出来。
根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类：一种 是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则 是由体系内存在的易于接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能 量后转变成激发态。
5
化学发光—间接法
Y 待测抗体
YY Y
Y 抗FITC抗体
P FITC标记抗原
Y 酶标抗体
磁珠
待测血清
6
化学发光—竞争法
待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。用已知量 的标记抗原，对比竞争酶标抗体。 若待测物浓度高,与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待 测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低， 与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少， 反应发光信号值高。
7
化学发光—竞争法
酶标抗体
待测抗原
FITC标记 的抗原衍 生物
待样品
待测样品和衍生物跟抗 体的竞争结合
用磁珠筛选和抗原衍8生 物，通过发光计算浓度
Thanks!
全套化学发光原理、分类及临床意义汇总！（重点推荐）
全套化学发光原理、分类及临床意义汇总！（重点推荐）“”免疫检测发展历程60年代，使⽤的是放射免疫检测，优点：成本低、灵敏度⾼，但缺点很明显，存在放射性污染、有效期短、操作复杂。
70年代，出现胶体⾦技术，虽然操作简单快速，然⽽，灵敏度低这⼀问题，始终⽆法解决，这也是技术本⾝决定的80年代，出现了酶联免疫法和时间分辨法，⽐如以上海科华为代表的。
国产企业研发的，酶联免疫技术检测产品，成本低且性质稳定，这也是为什么到⽬前为⽌，该⽅法学⼀直沿⽤⾄今，⽽其灵敏度和精确度问题，也决定了他从此不能担当⼤任。
⽽时间分辨法虽然⼀定程度上解决了灵敏度问题，⽽更多的缺点也暴露出来了，操作复杂，成本⾼，反应时间长，然⽽在化学发光还没有问世之前，⽐如以上海新波为代表的，时间分辨⽅法学为主的国产企业慢慢发展了起来。
如今上海新波也早就被PE完成了战略收购。
90年代，化学发光开始问世，虽然在国内的推⼴经历了很长的过程，随着21世纪的到来，在国外技术的影响下，化学发光开始不断发展，尤其是2010年以后，化学发光逐步开始了⼤⾯积的，时间分辨⽅法学替换进程，如今在免疫检测市场，⽆疑化学发光是独树⼀帜，引领免疫检测市场，成为免疫诊断主流技术。
化学发光检测原理关于化学发光检测原理，化学发光标记免疫分析⼜称化学发光免疫分析,是⽤化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析仪器。
化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。
化学发光分析系统是利⽤化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成⼀个激发态的中间体，当这种激发态中间体，回到稳定的基态时，同时发射出光⼦,我们可以联想以下萤⽕⾍，⼀闪⼀闪的，就是⽣物化学反应后发出的的光信号，⽽化学发光的原理也是类似的，⽆⾮是原理不同，但道理是⼀样的当光⼦发出后，化学发光免疫分析仪器中核⼼探测器件也就是光电倍增管，由单光⼦检测并传输⾄放⼤器，并加⾼压电流放⼤，放⼤器将模拟电流转化为数字电流，数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算，得出临床结果。
罗氏电化学发光法
罗氏电化学发光法罗氏电化学发光法是一种基于电化学原理的分析方法，通过测量电化学发光信号来分析样品中的分析物含量。
它结合了电化学和发光技术的优势，能够实现对微量分析物的高灵敏度检测。
在罗氏电化学发光法中，通常采用电化学发光细胞作为检测器。
该细胞由一个阳极和一个阴极组成，它们之间通过一个电解质溶液相连。
当外加电压施加在阳极和阴极之间时，电解质溶液中的分析物会被氧化或还原，产生电化学反应。
这些反应会产生电流，并激发发光物质发出光信号。
罗氏电化学发光法的原理是基于电化学发光物质的特性。
这些发光物质通常是有机化合物，具有发光的性质。
当发光物质被激发时，它们会从一个激发态返回到基态，释放出能量并发出光信号。
这个过程是可逆的，可以重复使用。
在进行罗氏电化学发光分析时，首先需要选择合适的电化学发光物质。
这个物质应该具有良好的发光性质，能够在特定条件下发出稳定的光信号。
然后，需要确定适当的电化学条件，包括电压、电流和电解质浓度等。
这些条件应该能够使发光物质发出最大的光信号，并且与样品中的分析物发生特异性反应。
在实际应用中，罗氏电化学发光法被广泛用于药物分析、环境监测和生物分析等领域。
它具有高灵敏度、高选择性和高稳定性的优点。
相比于传统的光谱分析方法，罗氏电化学发光法能够实现对微量分析物的快速和准确检测。
然而，罗氏电化学发光法也存在一些限制。
首先，需要选择合适的发光物质和电化学条件，这对于初学者来说可能具有一定的挑战性。
其次，该方法对样品的前处理要求较高，需要去除干扰物质并提高分析物的浓度。
最后，罗氏电化学发光法在样品矩阵复杂或含有多种分析物的情况下可能会受到干扰。
总的来说，罗氏电化学发光法是一种有效的分析方法，能够实现对微量分析物的高灵敏度检测。
它的发展为化学分析提供了新的思路和方法，为科学研究和实际应用带来了许多便利。
随着技术的进一步发展，相信罗氏电化学发光法将在更多领域得到应用和推广。
罗氏电化学发光原理PPT
操作不规范
实验操作过程中需遵循标准操作规范，避免 操作失误导致误差。
试剂质量问题
使用过期或质量不佳的试剂会影响实验结果， 需确保试剂质量。
仪器校准不准确
定期对仪器进行校准，确保仪器准确性。
安全防护措施建议
实验室安全制度
建立完善的实验室安全制度，确保实 验人员遵守安全规定。
化学发光反应
光信号检测
通过光电倍增管等光检测器件将光信 号转换为电信号，并进行放大和处理， 最终得到待测物质的浓度信息。
化学发光活性物质在特定条件下与发 光试剂发生化学反应，产生光信号。
02 电化学发光反应机制
反应物与条件选择
发光物质选择
罗氏电化学发光技术通常使用三联吡 啶钌作为发光物质，其具有良好的电 化学性能和发光效率。
02
检测器
将发光信号转换为电信号，并进行放大和处理，以便进行后续的数据分
析和处理。检测器的性能直接影响到仪器的灵敏度和准确性。
03
控制系统
通过精确控制仪器的各个部件，确保整个电化学发光过程的自动化和智
能化。同时，控制系统还可以对采集到的数据进行处理和分析，提供准
确的检测结果。
操作流程演示
开机自检
试剂准备
个人防护装备
实验人员需佩戴合适的个人防护装备， 如实验服、手套、眼镜等。
化学品管理
严格管理化学品，确保化学品存放和 使用安全。
废弃物处理
实验废弃物需分类处理，避免对环境 和人员造成危害。
06 未来发展趋势与挑战
技术创新方向预测
1 2 3
提高发光效率和稳定性
通过改进发光材料和电极材料，提高电化学发光 反应的效率和稳定性，实现更高灵敏度和更长使 用寿命。
化学发光检测原理介绍
图1 电化学发光原理
代表企业：罗氏、普门
图2 电化学发光反应
光激化学发光免疫分析
光激化学发光技术均就是相化学发光，以纳米级高分子微粒为基础，该系统有两个微球(（供体微球和受 体微球）组成,供体微球含有光敏物质表面覆盖有水凝胶可与链霉亲和素类活性物质结合；受体微球含有 发光物质且表面的水合凝胶可以与活性分子（抗体、生物素）结合。利用作为供体和受体的微珠来检测生 物分子的相互作用，当生物分子存在相互作用时，这种相互作用会将供体和受体微球拉近，从而激发级联 放大的化学反应，产生极大增强了信号。光激化学发光借助“双球”和“双标”的技术可做到无需分离未 参加免疫反应的标记微球，实现均相免疫分析。
体外诊断主要技术手段生命周期
高速发 展期
衰退阶段
体外诊断上下游
免疫检测技术介绍
定义与分类
免疫检测技术的定义
免疫检测：利用抗原和抗体的特异性反应进行检测，利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示， 常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，常见的免疫技术有放射性免 疫、酶联免疫、化学发光、电化学发光、纳米磁微粒化学发光。
举例：人绒毛膜促性腺激素化学发光测定原理 待测物HCG首先与酶标记的抗体以及发光标记物标记的抗体反应， 形成双抗体夹心复合物，随后再加入与含有与发光标记物结合的磁 珠，通过磁铁将复合物聚集，最后加入发光底物产生光信号进行定 量。
化学发光免疫分析法分类
按免疫标记物分类
酶促化学发光
辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶 （ALP）
免疫诊断从结果判断的方法学上可分：
化学发光免疫 分析法
放射免疫法
免疫胶体金法
时间分辨荧光 免疫分析法
罗氏电化学发光化学发光检测结果
罗氏电化学发光化学发光检测结果罗氏电化学发光化学发光检测（Roche electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）是一种基于化学发光原理的生化检测技术，广泛应用于临床诊断、药物筛选、环境监测等领域。
该技术具有灵敏度高、特异性好、操作简便、结果稳定等优点，因此受到了广泛关注和应用。
本文将从技术原理、应用范围和发展趋势等方面对罗氏电化学发光化学发光检测进行详细介绍。
一、技术原理罗氏电化学发光化学发光检测技术是基于电化学发光和化学发光原理的一种生化检测技术。
其基本原理是通过特定的抗体-抗原反应，将感兴趣的生物分子标记上特定的发光分子，当这些标记分子与特定底物反应时，产生化学反应产生发光。
通过检测产生的化学发光信号大小来定量分析待测物质的浓度。
罗氏电化学发光化学发光检测技术主要包括三个关键步骤：标记、洗脱和检测。
首先，将待检测物质与特定的抗体结合，并标记上发光物质。
然后，利用特定的洗脱方法将未反应的物质除去，最后通过检测设备对发光的强度进行测定。
二、应用范围罗氏电化学发光化学发光检测技术在临床诊断、药物筛选、环境监测等领域有着广泛的应用。
在临床诊断领域，该技术被应用于各种疾病的早期筛查、疾病的诊断与分型、治疗效果的监测等方面。
例如，在肿瘤标志物、感染性疾病、免疫相关疾病等方面都有广泛的应用。
在药物筛选方面，罗氏电化学发光化学发光检测技术可以用于快速检测潜在药物的毒性、药效、药代动力学等参数，帮助研究人员更快速地筛选出有效的药物。
在环境监测方面，该技术可以用于水质、空气、土壤等环境样品中有毒有害物质的检测，为环境保护提供有力的技术支持。
三、发展趋势随着生物技术的不断发展和进步，罗氏电化学发光化学发光检测技术也在不断创新和发展。
未来，该技术将有以下几个发展趋势：1.高通量化：随着自动化技术的发展，罗氏电化学发光化学发光检测技术将更加高效、快速，实现高通量的检测。
2.多参数检测：未来的罗氏电化学发光化学发光检测技术将可以同时检测多种生物标志物，实现多参数的综合分析。
贝克曼(比较详细)
[化学发光]美国Beckman公司UniCel DxI800免疫分析仪迎接PG级超微量检测时代的来临免疫定量分析的发展历程1960年代以前人工免疫检测阶段1960-70年代非标记免疫发展阶段放射标记免疫发展阶段1970-80年代免疫分析新项目不断产生临床应用领域迅速拓展荧光免疫发展阶段1980-90年代免疫检测逐渐常规化检测原理发展阶段化学发光，电化学发光1990-2000年标记免疫检测原理日臻成熟优化系统均衡，清洗分离手技术的发展2000-2003年免疫自动化发展阶段；进一步吸收大生化检测的自动化技术成就，采用系统叠加的方式以寻求更快的检测速度免疫分析技术的自动化智能化发展，是临检领域继生化全自动分析时期的又一个标志性的重要阶段。
其推动力源自一些大型实验室在免疫检测应用方面的进一步拓展和规模化，对免疫分析系统的检测速度、自动化和智能化性能提出了更高的要求。
智能化方面提高了系统流程管理的智能化程度，将系统的自动化性能推进到了一个新的智能化阶段，并进一步强化了全方位的系统监控功能，保证了自动化的可控性。
自动化方面进一步完善系统的自动化性能，加强系统的简便性、灵活性和前赡性，例如多种的进样方式、尽可能简洁的日常保养程序等，并提高了与轨道自动化的顺应性。
系统化方面改变了原有检测仪器将系统进行简单并连组合以提高检测速度的做法，在继承原有分系统的独立性优点的基础上，采用同一套分析和探测系统，保证系统的整体性和结果的统一性。
UniCel TM DxI 800 展现自动化非凡成就引领智能免疫时代DxI 800智能化整系统运行，突破分系统简单组合的传统方式，采用分立一体化整系统的专利设计分立的4个进样通道1.加快进样速度，减少样品的机上滞留时间；2.任何一个进样通道出现故障，不影响其他通道的进样操作，提供了整系统操作的灵活性；3.根据需要可以任意指定某个通道用于特定检测的进样，以保证整系统的流程优化；4.可以独立的对任何一个进样通道进行配件更换或维修。
化学发光法产品基本原理及其它公司情况
直接化学发光
发光剂不需要酶的催化作用，在发光条件下直 接参与发光反应。一般在化学结构上有产生发 光的特有基团，且可直接标记抗原或抗体，如 吖啶酯 等
第一部分
化学发光简介
化学发光效率
一个化学发光分子的发光效率可以表示为化学发光的量子产率（ ΦCL ），用以描述每摩尔反应物 辐射出的光子量，量子产率为1（100 %）意味着每一个反应物分子将产生1个光子， ΦCL 是一个有 三个基本参数的函数，表示为 ΦCL =ΦCE ∙ ΦEM (1)
直接化学发光
A + B C*, C* C + h
间接化学发光
A + B C* + D, C* C + h C* + D C + D*, D* D* + h
第一部分
化学发光简介
化学发光分类
（蛋白质）
（EDC）
‐
O 蛋白质‐C‐OH + R‐N=C=N‐R’ =
H R‐N‐C=N‐R’
L-NH2 (发光剂)
O O 蛋白质‐C‐NH‐L + R‐NH‐C‐NH‐R’ = =
‐
C‐O‐蛋白质 O
（蛋白质发光标记物）
=
第三部分
化学发光剂标记技术
重氮盐偶联法(又称重氮化法)-直接偶联
第二部分
化学发光免疫分析类型
直接化学发光免疫分析
通常由吖啶酯直接标记抗体 ( 抗原 ) ，与待测标 本中相应的抗原 ( 抗体 ) 发生免疫反应后，形成 固相包被抗体 ‐ 待测抗原 ‐ 吖啶酯标记抗体复合 物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成 碱性环境，吖啶酯便可分解、发光 。 由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内 所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原 的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原 的含量。 发光
贝克曼分析原理
+
Sample containing hTSH
+
Goat anti-hTSH alk phos conjugate
37 C
ACCESS用户手册
一步夹心法 (2)
Wash steps
AMPPD
AMPD
37 C
37 C
ACCESS用户手册
二步抗体检测法(1)
ParaRubella magnetic virus particles
ACCESS发光底物AMPPD结构
• 4-methoxy-4-(3-phosphatephenyl)-spiro-(1,2dioxetane)-3,2-adamantane • 4-甲氧基-4-（3-苯磷酸盐）螺-（1，2-二螺[4， 4]二氧己烷-3，2’-金刚烷 • AMPPD是一种金刚基二螺[4，4]二氧己烷的磷 酸酯。经ALP水解生成一种不稳定的阴离子， 该阴离子分解时持续发光。发光强度稳定，与 ALP量成比例。
ACCESS用户手册
ACCESS发光底物AMPPD反应原理
发光
OCH3
Alkaline Phosphatase
OCH3 OCH3
OPO3 Na2
ACCESS用户手册
一步竞争法 (1)
ParaGoat magnetic antiparticles mouse IgG
+
Mouse monoclonal anti-Thyroxine
37 C
37 C
ACCESS用户手册
+
Sample containing Thyroxine
+
Thyroxine alk phos conjugate
(with ANS)
罗氏电化学发光原理
罗氏电化学发光原理罗氏电化学发光原理是指在电化学反应中产生的发光现象。
电化学发光是一种特殊的化学发光现象，它是通过电化学方法来产生光的过程。
罗氏电化学发光原理的研究和应用，对于生物医学、环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
电化学发光的基本原理是利用电化学反应产生的激发态物质，通过放电的方式释放出光。
通常情况下，电化学发光是通过将电流通过电解质溶液或固体电解质来实现的。
当电流通过电解质时，会发生氧化还原反应，产生激发态的物质，这些激发态的物质会通过放电的方式释放出光。
罗氏电化学发光原理的研究和应用主要集中在两个方面，一是电化学发光的机理研究，二是电化学发光技术的应用。
在电化学发光的机理研究方面，科学家们通过研究电化学反应的动力学过程和反应中产生的中间产物，揭示了电化学发光的基本原理和发光机制。
在电化学发光技术的应用方面，电化学发光已经被广泛应用于生物医学领域，用于检测生物分子、细胞和组织的活性和浓度，还被应用于环境监测和食品安全领域，用于检测环境中的有害物质和食品中的添加剂和污染物。
电化学发光技术的应用还在不断拓展，例如在生物医学领域，电化学发光已经被应用于生物分析、临床诊断和药物筛选等方面；在环境监测领域，电化学发光已经被应用于水质监测、大气污染监测和土壤污染监测等方面；在食品安全领域，电化学发光已经被应用于食品添加剂检测、食品污染物检测和食品真伪鉴别等方面。
总的来说，罗氏电化学发光原理是一种重要的化学发光原理，它通过电化学方法产生光，具有灵敏度高、选择性好、检测速度快等优点，已经被广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
随着科学技术的不断发展，电化学发光技术的应用领域还将不断拓展，为人类的健康和环境保护做出更大的贡献。
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电化学发光免疫测定
（Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI）
是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。
它的标记物的发光原理与一般的化学发光（CL）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。
ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。
其检测原理（以TSH检测为例）：第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)
3
]2++ N 羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。
第二步：将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。
下一步，蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)
3
]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。
同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和
与[Ru(bpy)
3
]2+结合的抗体）也被吸出测量室。
紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。
发光
剂 [Ru(bpy)
3
]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的
[Ru(bpy)
3
]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将
一个电子给三价的[Ru(bpy)
3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)
3
]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺
和丙醛。
激发态的[Ru(bpy)
3
]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成
基态的[Ru(bpy)
3
]2+。
该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光
强度，光强度与[Ru(bpy)
3
]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。
最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
IMMULITE Ⅰ
美国德普(DPC)公司开发成功的IMMULITE Ⅰ型酶放大化学发光自动化分析仪及其配套的各项检测试剂盒是在IMMULITE系统条件下发展完善的.它以聚苯乙烯塑料珠为固相载体, 碱性磷酸酶(APase)标记抗体(或抗原),并作用于发光底物AMPPD[3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基
-4-(3″磷酰氧基)苯基-1,2二氧乙烷].
专利清洗技术
IMMULITE技术的核心是测试杯。
它可以自动进行彻底的包被珠清洗。
测试杯是生化反应容器，其中有一个特异性抗体包被珠。
高速旋转测试杯可以将杯中的液体彻底甩入测试杯的外腔。
测试杯可以进行多次持续数秒钟的高速离心清洗，从而使游离标记物有效地分离出来。
DPC独特地离心清洗技术稳定地实现了极低的非特异性结合。
这是提高检测性能的关键。
图1 图2 图3 图4
样本和试剂自动加入测试杯，
在37度进行振荡温育
温育结束，测试杯垂直高速旋
转。
反应液被彻底甩入外腔。
几次清洗后，游离标记物彻底
地被分离出去
加入发光底物，高灵敏光电倍
增管读取发光计数
连续化学发光
IMMULITE的酶放大化学发光比“快闪”化学发光的检测下限要低。
“快闪”化学发光每个免疫结合只发出一两个光子，而IMMULITE的却是几千个光子。
自动衰减器可以有效地扩展发光技术达100倍。
酶放大的持续发光信号产生过程，允许多次计数以得到更加精巧的结果。
传统的化学发光
IMMULITE 酶放大化学发光
ACCESS2 化学发光检测原理（
Beckmancoulter ACCESS2全自动微粒子化学发光免疫分析系统
）
检测原理
1 大分子 Access 分析是一个双位点夹心法（Sandwich）的酶免疫分析，采用了两个针对CEA不同抗原位点的大鼠抗-CEA单抗。
样品被加入反应管，同时加入的还有用作酶结合物的标记了碱性磷酸酶的抗CEA第一位点的大鼠单抗和与磁性颗粒结合的抗-CEA第二位点的二抗，而后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。
最后，化学发光底物， Lumi-Phos* 530被加入反应管，与反应体系中存在的碱性磷酸酶进行反应，发出的光量子被光电比色计所检测。
产生的光子与样本中的CEA浓度成正比。
最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品CEA的对应关系而计算出样品中的CEA浓度。
2 小分子Access 总T4检测是一种竞争抑制的酶免疫方法，样品和抗甲状腺素抗体、标记了碱性磷酸酶的甲状腺素酶结合物和包被了羊抗大鼠捕获抗体的磁性颗粒及用以破坏T4与血清中蛋白结合的消化剂一起加入到反应管中，样品中的T4和酶结合物竞争结合有限的特异性抗甲状腺素抗体，形成的抗原抗体复合物通过捕获抗体与磁性颗粒相结合。
随后，在磁性分离系统去除未与磁性颗粒结合的其它复合物，最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530）, 已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。
最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品的对应关系而计算出样品中的总T4浓度，反应产生的光子与样品中总T4的含量成反比。