第八章分光光度法

1.电磁波谱
紫光
波长：400~450nm
红光
650~750nm
一、光的基本性质
吸光光度法（分光光度法）：根据物质对光的选择性吸收来进行测定的一种方法
可见光
教材：199页，表8-1
光学光谱区
（真空紫外）
远红外
中红外近红外可见近紫外远紫外
10nm~200nm
200nm ~380nm 380nm ~780nm 780 nm ~2.5 µm 2.5 µm ~50 µm 50 µm ~300 µm
2. 光的波粒二象性
波动性：
λ=
νC 粒子性：E
波粒二象性：λ
C E=h ν=h
结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越
长(频率越低)，光量子的能量越低。

单色光：具有相同能量(相同波长)的光。

混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在
一起，例如白光。

h 为普朗克常数：6.63×10-34J.s
二、物质对光的选择性吸收1.物质对光的选择性吸收
青（蓝绿）
红
橙
黄绿绿蓝
蓝
紫
物质的分子具有一系列不连续的特征能级，通常分子处于能量最低的基态，吸收了一定入射光的能量后产生能级跃迁，进入能量较高的激发态，当入射光的能量与物质分子的某一
能级差恰好相等时，才有可能发生能级跃迁
（1）
（2）
基态
第一激发态
第一激发态
λ
C E=h ν=h
λ/nm:650~700
λ/nm:400~450
λmax 440nm
540nm
A
λnm
K 2Cr 2O 7
KMnO 4
K 2Cr 2O 7和KMnO 4的吸收曲线
定量分析基础
定性分析基础
c
增大
2．吸收曲线
三、吸光光度法的特点
1.灵敏度高（0.01克黄金/吨矿石）
2.操作简便，测定速度快
3.应用广泛，几乎可测所有无机离子，广泛应用于冶金，环境，生物，医学等领域
吸收光谱峰的位置（λmax ）
定性
峰的高矮（吸收程度的大小）定量
I a =I 0 -I
一、朗伯-比尔定律
I o
I
b
S
dx I a
当一束平行单色光垂直照到某均匀溶液时，假设：
液层厚度b ，截面积为s ，溶液浓度为c ，入射光强度为I 0，该溶液吸收光的强度为I a ，透过光的强度为I
将b 切割为dx ，薄层中所含吸光质点数为dN ，入射光强度为I b ，穿过薄层后光的强度减弱了dI b
-dI b = K 1I b dN dN = 6.02×1023cSdx -dI b = K 16.02×1023S cI b dx 令:K 2= 6.02×1023K 1S ∴-dI b = K 2I b cdx ，cdx K I dI 2b b =−
∫∫=−b
I I b b cdx K I dI
20
cb K I I
20
ln
=−Kcb I I
=−∴0
lg
303
.22K K =
令：液层厚度b ，截面积S ，吸光物质浓度c ，薄层中所含吸光质点数为dN
I 0
dx b
I
I b
I t
根据光的量子理论：透光率或透射比T (0~1, 0~100%)定义透光率：
I I T =
定义吸光度：
有意义的取值范围为∞-0
Kbc
I I T A =−=−=0
lg
lg 透过光强度入射光的强度
朗伯-比尔定律
的数学表达式
Kcb I I
=−0
lg
I I
I I A 0
0lg lg =−=朗伯-比尔定律朗伯-比耳定律是吸光光度法的理论基础，是用光度法进行定量测定的依据
朗伯-比耳定律的物理意义：当一束平行单色光垂直通过某均匀溶液时，溶液的吸光度A 与液层厚度b 及吸光物质的浓度c 成正比：A= Kbc
单色平行光均匀溶液
注意：
A=-lg
= Kcb
I I 0
吸光度与光程的关系A = K b c
0.10
b
0.20
2b
0.00
光源
检测器显示器
参比
吸光度与浓度的关系A = Kb c
0.10
c
0.20
2c
0.00
光源
检测器显示器
参比
二、光度法的灵敏度
1．吸光系数a （吸收系数）
当液层厚度b 以cm ，吸光物质的浓度c 以g/L 为单位时，朗伯-比尔定律表示为
A = abc
a 称为吸光系数，单位为L/(g ⋅cm)
在朗伯-比尔定律A = Kbc 中，系数K 在一定条件下是常数，表明用光度法进行测定的灵敏度
K
λT
吸光物质性质
K=
cb
A 2.摩尔吸光系数ε
c mol/L b cm ε
L/(mol.cm)
A= bc
εε
吸光物质的灵敏度
吸光物质对光的吸收能力ε=
cb
A 当液层厚度b 以cm ，吸光物质浓度c 以mol/L 为单位时，朗伯-比尔定律表示为二乙基胺二硫代甲酸钠（铜试剂，DDTC ）双硫腙
ε436=12800 L/(mol.cm)Cu
Cu
ε495=158000 L/(mol.cm)
<
ε
λ
T
吸光物质性质
λmax
εmax
A= -lgT = -lg0.603 = 0.220
c=140×10-6112.4=1.25 ×10-6mol/L
ε=
bc
A =
2 ×1.25 ×10-6
0.220= 8.8×104 L/(mol.cm)
例1 （203页，8-1），利用双硫腙光度法测Cd 2+,已
知Cd 2+的质量浓度为140µg/L,比色皿厚度为2cm,在520nm 处测得透光率为0.603，求吸光度A 及摩尔吸光系数ε（M cd =112.4g/mol)解：A= εbc
ε=
bc A A= εbc c mol/L
b
cm
mol/1000cm 3
bc/1000
mol/cm 2bcM ×1061000
S(µg/cm 2)
∴S=bcM ×103
将代入得bc=
ε
A
S=
ε
A
M ×103µg/cm 2
3.桑德尔灵敏度S
A=0.001时(检测极限)，单位截面积光程内所能检出吸光物质的最低含量µg/cm 2bc →单位截面积光程所能检出吸光物质的最低含量
因为：A=0.001，代入上式：
S 灵敏度
ε
灵敏度S=
ε
M ∴
例2（205页，8-2）、已知双硫腙光度法测定Cd 2+时ε
520nm =8.8×104
L/(mol ·cm)，求桑德尔灵敏度S.A=0.001时，单位截面积光程内所能检出吸光物质的最低含量µg/cm 2
解，S=
ε
M cd =
8.8×104
112.4=1.3 ×10-3µg/cm 2
A= εbc
S=
εA
M ×103例3，Fe 2+用邻二氮菲显色，当c=0.76 µg/ml,于波长λ510nm,吸收池厚度b=2.0cm 时,测得T%=50.2,求摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度各为多少？(M Fe =55.85 g/mol)
c= 0.76 µg/ml=7.6 ×10-4g/L=1.36 ×10-5mol/L
由A=εbc 得:
解：A=-lgT=-lg0.502=0.299
ε=
A bc =0.2992.0×1.36 ×10-5
=1.1 ×104L/(cm.mol)
S=
ε
M Fe =
1.1×104
55.85
= 5.1 ×10-3µg/cm 2
三、利用朗伯-比尔定律进行定量分析A= εbc b 一定, λmax 一定，同一种物质，ε一定配制一系列标准溶液，由标准溶液：c 1, c 2, c 3……测得吸光度：A 1, A 2, A 3…...
A 对c 作图
工作曲线
1.工作曲线法（标准曲线法）
c (mg/ml)
c 1
c 2c 3
c 4
c 5A
.
.
.
.
.
A x
c x 工作曲线（标准曲线）
A 1
A 2A 3
A 4A 5A 标A x
=ε标b c 标εx b c x
2.比较法：
四、对朗伯-比尔定律偏离
.工作曲线（标准曲线）
A= εbc
c
c 1
c 2c 3c 4c 5
A
.
.
原因：仪器或溶液的实际条件与朗伯-比尔定律所要求的前提条件不一致
..
A 总=-lg I t1+I t2
I o1+I o2=-lg
I o110-ε1bc +I o210-ε2bc I o1+I o2
（一）、由于非单色光引起的偏移
∴
I t =I o 10-εbc
A= εbc =-lg
I
I o
假设：
入射光I o
λ2
I o2
I t2
A 2
λ1I o1
I t1
A 1
A 总=-lg
10-εbc （I o1+I o2）I o1+I o2
= εbc 造成偏离
A 总= εbc
若λ1与λ2相差很大，ε1= ε2=ε
如果λ1和λ2相差不大，即∆λ= |λ1-λ2|很小，可以
近似认为
ε1= ε2= ε
A 总=-lg I t1+I t2I o1+I o2=-lg
I o110-ε1bc +I o210-ε2bc
I o1+I o2
克服由非单色光所造成的偏离
¾选择单色器（单色性能较好）¾选择入射光波长（λmax )
¾选择适当的浓度范围（不应过高）
浓度及非单色光的影响
λ1λ2a
b
A 5A 1
A 4
A 2
λ3
λ/nm
A
浓度: b>a
波长: λ3>λ2>λ1
A 3A 6（二）、由于溶液本身的化学和物理性质所引起的
偏离
1.由于介质不均匀所引起的偏离
b
I o
I I a 发生散射：
T 实I o -I a -I r
=I o
=
I
I o
2.由于溶液的化学反应所引起的偏离
分析浓度或总浓度C 总
吸光质点浓度C 质
C
工作曲线
A=Kcb I r
因为：T 实<T 理
∴A 实>A 理
T 理I o -I a =
I o =
I I o 吸光物质因解离、络合、缔合等化学变化而改变浓度如：Cr 2
O 7
2-+H 2
O 2CrO 4
2-+2H +
λ=375nm
λ=350nm
单体：
S
N
H +
(CH 3)2N
N(CH 3)2
2S
N
H +
(CH 3)2N
N(CH 3)2
2
λmax = 660 nm 二聚体：λmax = 610 nm
A
c
λmax = 660 nm
A
λ
660 nm 610 nm
亚甲基蓝阳离子（MB ）
方便、较灵敏，准确度差（半定量）
一、光度分析的几种方法
1.目视比色法
观察方向
空白
c 1c 2c 3c 4c x
1).可以任意选择某种波长的单色光2).扩大入射光波长的范围3）灵敏度、准确度高
2.光电比色法和吸光光度法：
共同点：以朗伯-比尔定律为基础的仪器分析方法
主要区别：获得单色光的手段不同
光电比色法以滤光片为单色器，谱带宽度约有几十纳米
吸光光度法以棱镜或光栅为单色器，谱带宽度约有几纳米
光源
单色器
狭缝
样品室
检测器
二、紫外-可见分光光度计
氙灯
氢灯
钨灯
1．光源卤钨灯。

稳压器
光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够
的光强度,稳定。

可见光区：钨灯，碘钨灯(320～780nm)紫外区：氢灯，氘灯(200～380nm)
氙灯：紫外、可见光区均可用作光源
2、单色器：作用：从复合光中分出所需要的单色光
要求：光损失小，单色性能好滤光片光栅棱镜
种类
棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同.玻璃350～3200nm, 石英185～4000 nm
光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。

利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。

3、样品室（比色皿）1 cm
5 cm
石英——玻璃
4、检测器：作用：将光信号转变为电信号，把放大的电信号用适当的方式记录下来
种类
光电池
光电管光电倍增管
直流悬镜式检测器电位计，数字电压表
光电二极管(Phototube )
h ν
光电倍增管二）、光学系统
H
W
S 1
S 2光源
单色器
样品室检测器
三、吸光度的测量原理
1．调检测器零点
将入射光路完全挡住，调节检测器的调零旋钮，使指针指在检测器零点I t = 0，T = 0，A = ∞2．调吸光度零点
将参比溶液推到光路，调节光量调节旋钮，使此时指针指在吸光度零点——T=100%
参比溶液：除了没有吸光物质以外，其余成分都与待测溶液完全相同的溶液（空白溶液）。

通常可用蒸馏水作参比溶液
由于参比溶液不含吸光物质
I 0= I t
T 参= 1 =100%或A 参= -lgT 参= 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
∝1.51.0 0.8 0.70.6 0. 5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 A
T%
3．待测溶液吸光度的测定将待测溶液推到光路中读数
0 < I t < I 0 0 < T < 100%
四、光度测量误差和测量条件的选择1.光度测量误差
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
∝1.51.0 0.8 0.70.6 0. 5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 A
T%
检流计标尺上吸光度与透光率的关系
吸光度读数在什么范围内误差最小？
E r =dA A A=εbc
因为：A=-lgT=-0.434lnT （1）
dT T
dA=-0.434
（2）
（2）除以（1）：dA A
=
d εbc
εbc =dc c
E r =
dA A
=
=
dc c
dT TlnT
E r =
0.368
T 的测量误差是固定的
dT=∆T=±0.01
dc
c E r =
dT TlnT =
= ±
0.01
TlnT
以E r 对T 作图T →0, T →1 误差很大
10
86420
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
相对标准偏差与透光率的关系
相对标准偏差%
T
dA A =
0)
ln (==
dT T T d E r 01T ln dT
)
T ln T (d =+=求|E r |的最小值
lnT = −1
使|%E r |为最小的透光率
T min = e -1= 0.368相应的吸光度
A min = −lgT min = 0.434
T=0.368A=-lgT=0.434
实际测定中，控制读数范围：T 为0.15~0.65；A 为0.2~0.8以保证测量的相对误差较小（在4%以下）2. 测量条件的选择
1）入射光波长的选择——吸收最大，干扰最小2）控制适当的吸光度读数范围
控制溶液的浓度； 选择不同厚度的比色皿
3）选择合适的参比液
参比液——消除有色干扰物质对光的吸收带来的误差
试液显色剂参比无色无色蒸馏水有色无色试液无色
有色显色剂有色
有色
试液（掩蔽剂
掩蔽被测组分）+显色剂
一、显色反应
氧化还原反应
络合反应
M+R——MR
显色剂
Fe 2++3Phen →Fe(Phen)32+
Mn 2++S 2O 82-→2MnO 4-+SO 42-二、影响显色反应的因素
（一）显色剂浓度
实验测定：固定[M], 改变[R]，测定[MR]的A
M+R MR
A C R
C R
(1)
A
C R C R
(2)
A
C R
(3)
(二）溶液的酸度
1. 影响被测金属离子的存在状态M n++nOH -M(OH)n
2. 影响显色剂的平衡浓度和颜色a. [R]M+HR MR+H +
b. R 的颜色
[H +]显色反应不完全
使用二甲酚橙作显色剂：pH<6,R 黄色，pH>6, R 红色,MR 紫红色, 合适的酸度为：pH<6
3. 影响络合物的组成和稳定性M+HR MR+H +[H +]
络合物不稳定
平衡
（三)、温度一般显色反应在室温下进行
有些反应需加热：
硅
硅钼蓝法硅钼黄
室温
10min
100o C 30s
A
pH
pH
（四）、共存离子干扰的消除
干扰
共存干扰离子本身有色
干扰离子与显色剂形成有色络合物
1. 控制溶液的酸度
双硫腙Hg 2+Pb 2+, Bi 3+, Cu 2+, Co 2+, Ni 2+
稀
H 2SO 4
Co 2+, Ni 2+,Fe 3+, Cr 3+等
消除干扰离子：MR
M+R
不稳定
例如，在硫酸存在下双硫腙法测定Hg 2. 掩蔽
络合掩蔽氧化还原掩蔽
Ag +
大量Bi 3+
KSCN EDTA 铬天青S Al 3+Fe 3+
Fe 2+
抗坏血酸 3. 选择合适的参比液铬天青S
Al 3+
Co 2+ Ni 2+
如上例：
铬天青S Al 3+Co 2+ Ni 2+参比：待测液：铬天青S Al 3+Co 2+ Ni 2+
A=0
T=100%NH 4F
4. 选择适当的波长原则：吸收最大干扰最小
440nm
525nm A
λnm
Cr 2O 72-MnO 4-测Mn
545nm 钢中的Mn 测定
三、显色剂
一）无机显色剂:硫氰酸盐，过氧化氢等
二）有机显色剂
1.生色团：含有共轭双键的基团
C
O
N
N
N
O
O
C
S
π电子被激发所需能量小，可吸收λ>200nm 的光，在紫外，可见光区有吸收。

RHN
..
2. 助色团：含有孤对电子的基团
NH 2
..OH ....
Cl
..
孤对电子与生色团上的不饱和键相互发生共轭作用，可以影响有色化合物对光的吸收，使颜色加深。

S C
NH
N
N
NH
例. 双硫腙
可测，Ag, Pb, Bi, Cu, Cd, Hg, Zn, Pd 等
生色团
助色团
变色酸双偶氮类螯和显色剂稀土元素的测定
N N
X
Y Z
N
N Z X Y ''
'
HO 3S
SO 3H
OH OH
X,Y,Z, X’,Y’,Z’
助色团
AsO 3H 2
PO 3H 2, Cl, Br
I
SO 3H
HO
HOOC
CH 3
C
Cl Cl
COOH
O CH 3
三苯甲烷类试剂：
铬天青S
二甲酚橙，溴甲基百里酚蓝等
可和许多金属离子如Be,Al,Y,Zr,Cr, Fe,Pt 等形成兰色至紫色络合物
1. 三元及多元络合物的研究
2.大环多元醚及卟啉络合物的研究Sb 5++Cl -SbCl 6-SbCl 6-+罗丹明B +
罗丹明B +.
SbCl 6-
提高灵敏度的途径A= εbc
3. 长光程毛细吸收管
b
ε
3、纳米材料标记Mirkin CA, Letsinger RL, Mucic RC, Storhoff JJ.NATURE ,1996, 382 (6592): 607-609
Elghanian R, Storhoff JJ, Mucic RC, Letsinger RL, Mirkin CA .SCIENCE ,1997, 277 (5329): 1078-1081
Mirkin 研究组利用纳米金在DNA 片段作为组装分子的引导下可以形成超分子结构的特点，建立了用巯基化寡聚核苷酸探针标记纳米金，并检测特定序列核苷酸序列的方法。

一、示差分光光度法A 0=εbc o (1)
A x =εbc x
(2)
c 0<c x
c 0 （标准溶液）c x
待测溶液(2) -(1)得：A 相对=A x -A 0= εb （c x -c 0）
即：∆A= εb ∆c A 相对= εb c 相对
（高含量组分的测定）∆A~∆c
示差法中，C 0(T=100%),测得的吸光度为∆A,∆A 与∆c 成正比
普通光度法：参比空白溶液c=0 示差法：
参比
♠普通分光光度法一般
只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时
，将产生较大的误差。

需采用示差法。

即采用
浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液，而不是采用空白溶
液作参比溶液。

1. 可将吸光度控制在适宜的范围内（0.2 –0.8）
某溶液，待测组分含量较高,若采用常规分光光度法, 透光率小，T = 0.05, 吸光度大，A x = 1.30超出适宜的范围，测量相对误差较大
若以浓度稍低的，在常规分光光度法中
T = 0.10，A s = 1.00的溶液为参比在示差法中测得的吸光度
A 差= A x –A s =∆A = 0.30T 差= 10−A = 0.50落入适宜的范围内，测量相对误差较小
示差法能够提高准确度的原因：
∆c
∆A
.
...
∆A x
∆C x
工作曲线（标准曲线）
c x =c 0+∆c
c 0
A 0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
010
2030405060708090100
示差分光光度法标尺放大原理
c x1，c x2
T%
T%
T%
10%, 7%
c 参（c x1），c x2
100%, 70%
普通示差法
c x1
c x2普通
7示差法dc/ c s +∆c
普通：d c /c 标尺刻度扩大了
十倍
示差法需用特殊的示差分光光度计，配备发射强度较大的光源
x
r c c E ∆×=
%4由于∆c << c x ，从而大大降低了测c x 的相对误差2. 降低了测量的相对误差
∆A = εb ∆c
对示差分光光度法，朗伯-比耳定律表示为
但此处约4%的测量相对误差是相对于∆c 而言的而我们真正关心的是测量c x 的相对误差
例如：c x = 10∆c ，E r = 0.4%即使在适宜的范围内，测量相对误差仍有约4%(见268页,图9-7)
二、络合物组成的测定
摩尔比法(饱和法）等摩尔连续变化法
摩尔比法测定络合比：
M+nR
MR n
分别测吸光度：A 1, A 2 ,A 3……A n,以A 为纵坐标，以C R /C M 为横坐标，作A~ C R /C M 曲线
配制：不同C R /C M 的系列溶液
固定C M ，改变C R
A
C R /C M
D
络合比
M 未被完全络合
有过量的R
摩尔比法:固定c M ,改变c R
1:1
3:1
c (R)/c (M)
A
1.0
2.0 3,0
三、酸碱离解常数的测定
HA H ++A -Ka =
[H +][A -][HA]
pKa=pH+lg [HA][A -]设：b=1cm
λ
A A=A HA +A A -=εHA [HA]+ εA -
[A -]
测A HA ,A A -, 求K a ?−
−−⋅=⋅=A A A HA HA HA c A c A εε]
[][++++=
−H K K A H A A a a
A HA {}a
A HA a K A H A H K A +=+⋅++][][(
)()]
[+
−−−=
H A A A A K A HA a 因为：pKa=pH+lg
A HA -A
A –A A -][][−
−+=A HA A A HA εε]
[][]
[++++++=−−
H K K c H K H c a a A A a HA HA
εε所以：
整理得：
pH=pKa + 1pKa=pH+lg
[HA][A -]
pH<pKa
测：A HA
pH>pKa
测：A A -
测：A A
0.2
0.40.6HA
A -
pKa [HA]= [A -]
实验测定：5
6
8
7
pK a =pH+lg
A HA -A
A -A A -四、多组分的分析
A
λ
X
Y
λ1
λ2
吸光度的加和性：若溶液中各组分之间的相互作用可以忽略，则某波长下溶液的总吸光度是其各组分吸光度之和y y 1x x 11bc bc A λλλεε+=y
y 2x x 22bc bc A λλλεε+=解联立方程，求得c x 和c y
A 总= A 1+ A 2+ ……+ A n
A=lg
= Kbc
I o I
单色平行光
均匀有色溶液
K: ε
一、原理
A= -lgT=lg
T
1=I I o
-lg
二、仪器
单色器
光源
吸收池
检测器
•原理（郎伯-比尔定律）•误差（两个范围，两个数值）
•条件（波长，范围，参比）1）测量条件选择
三、条件
2）显色反应的条件
•显色剂的浓度
•酸度（待测离子、显色剂、络合物）•时间（反应速度、稳定性）•温度干扰消除酸度，掩蔽，波长
四、应用
•高含量组分的测定（示差法）•络合物组成的测定•酸碱离解常数的测定
作业：p278-279，1，2、3，4，5，8，10
上节复习
一、朗伯-比尔定律
Kcb I I lg
T lg A 0
t
=−=−=当一束平行单色光垂直通过某均匀溶液时,溶液的吸光度A 与吸光物质的浓度c 及液层厚度b 成正比
A 与T 的关系：
A=-lgT=lg
T
1
A (lg )
∝0
T=0
T=1 (100%)
I
0I t
二、摩尔吸收系数和桑德尔灵敏度
1. 摩尔吸光系数ε
c
mol/L b
cm
ε
L/mol.cm
A= bc εε吸光物质的灵敏度吸光物质对光的吸收能力ε=
cb
A A = Kb c
S =
ε
M
A=0.001时，单位截面积光程内所能检出吸光物质的最低含量µg/cm 2
2. 桑德尔灵敏度S
3．吸光系数a （吸收系数）
当液层厚度b 以cm ，吸光物质的浓度c 以g/L 为单位时，朗伯-比尔定律表示为
A = abc
a 称为吸光系数，单位为L/(g ⋅cm)
上节复习：紫外-可见分光光度计一）、基本结构
光源
单色器
狭缝
样品室
检测器
提供入射光有足够的波段范围
光度测量误差和测量条件的选择光度测量误差
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
∝1.51.0 0.8 0.70.6 0. 5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 A
T%
检流计标尺上吸光度与透光率的关系
吸光度读数在什么范围内误差最小？
T=0.368A=-lgT=0.434
实际测定中，控制读数范围：T 为0.15~0.65；A 为0.2~0.8以保证测量的相对误差较小（在4%以下）2. 测量条件的选择
1）入射光波长的选择——吸收最大，干扰最小2）控制适当的吸光度读数范围
控制溶液的浓度； 选择不同厚度的比色皿。