对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mGM

对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mGM 作者：田蓉，程绍辉，于继云，李巍，刘玉峰

【关键词】黑色素瘤

Inhibition of lung metastasis of B16 melanoma cells transfected with murine granulocytemacrophage colonystimulating factor in mice

【Abstract】AIM: To investigate the inhibition of lung metastasis of melanoma by a tumor vaccine of B16 melanoma cells transfected with murine granulocytemacrophage colonystimulating factor (mGMCSF). METHODS: The murine melanoma cell line B16 was transfected with the recombinant plasmid containing mGMCSF. A cell line stably expressing mGMCSF was obtained by G418 selection. The Balb/c mice were administered i.v. with B16 cells transfected with or without mGMCSF respectively and the lung metastasis was examined 2 weeks later. RESULTS: The recombinant cell line B16TR was established after mGMCSF tranfection and the expression of mGMCSF was confirmed by RTPCR. The number of lung metastatic lesions of mice treated

with B16TR was significantly fewer than that of mice treated with B16 (n=5, 125.8

±34.3 vs 27.8±24.0, P<0.01). CONCLUSION: The mGMCSF transfection can significantly suppress the lung metastasis of melanoma in mice. The GMCSF can be a promising adjuvant in the immunotherapy of melanoma.

【Keywords】melanoma; mice; granulocytemacrophage colonystimulating factor; lung neoplasms/secondary; cancer vaccines

【摘要】目的：探讨小鼠粒细胞巨噬细胞－集落刺激因子（mGMCSF）基因转导对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制效果. 方法：应用脂质体将含有mGMCSF基因的真核表达载体转染B16小鼠黑色素瘤细胞，经G418加压筛选后，挑选表达mGMCSF基因的B16黑色素瘤细胞. 观察转导或未转导mGMCSF基因的B16黑色素瘤细胞在Balb/c小鼠体内的肺转移. 结果：转导mGMCSF 基因的B16黑色素瘤细胞可以稳定表达mGMCSF，在小鼠模型上其肺转移灶数目显著少于未转染基因的黑色素瘤细胞对照组，二者差异显著（n=5, 125.8±34.3 vs 27.8±24.0, P<0.01）. 结论： mGMCSF转导可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的肺转移，提示GMCSF具有治疗黑色素瘤的临床应用前景.

【关键词】黑色素瘤；小鼠；粒细胞巨噬细胞－集落刺激因子；肺肿瘤/继发性；癌症疫苗

0引言

黑色素瘤是一种恶性程度很高的恶性肿瘤，早期即可发生肺、脑转移. 其发病率有逐渐增高的趋势，然而目前尚无有效的治疗方法［1-3］. 近年来，免疫治疗已经成为黑色素瘤治疗研究的一个热点［2,4-5］，其中，联合细胞因子的肿瘤细胞免疫是一个重要的方向，可以涉及几乎全部与免疫系统相关的细胞因子. GMCSF具有可增强粒细胞、巨噬细胞活性，增强MHCⅠ, MHCⅡ, B7分子的表达，增强抗原提呈功能等广泛的生物学活性，因而可能在肿瘤的免疫治疗中具有着重要作用. 我们拟将GMCSF基因转染黑色素瘤细胞系B16，观察其对黑色素瘤细胞生长及转移的影响，为抗黑素瘤免疫治疗进行有益的尝试.

1材料和方法

1.1材料B16小鼠恶性黑色素瘤细胞系、含有鼠GMCSF基因的真核表达质粒pGEMTeasymGMCSF和E.coli JM109为本室保存. 质粒提取试剂盒购自博大泰克生物技术有限公司；RNA提取试剂盒、RNA

逆转录试剂盒均为美国Promega公司产品；限制性内切酶、AMV逆转录酶、随机引物均为宝生物公司产品；透析胎牛血清、DMEM培养基、G418,脂质体转染试剂盒均为Gibco公司产品；6～8周龄雄性Balb/c 小鼠购自军事医学科学院实验动物中心.

1.2方法根据mGMCSF序列及pcDNA3.1多克隆酶切位点设计引物，上游: 5′GCTAGCACCATGTAACTGCAGAATTTAC3′,下游5′CTCGAGCTCATT

TTTGGACTGGTTTTT3′. 引物由上海博亚生物工程有限公司合成. 以pGEMTeasymGMCSF质粒为模板,上述mGMCSF基因特异引物按常规方法进行PCR扩增. 将PCR反应产物进行10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析. 通过Nucleotrap kit (Clontech)回收阳性PCR产物. 将回收的mGMCSF 基因及pcDNA3.1分别用以NheI和EcoRI双酶切,并用T4 DNA连接酶连接后，转化E.coli JM109, 获得重组质粒pcDNA3.1/mGMCSF. 将限制内切酶进行酶切鉴定正确的菌种送上海生工生物技术公司测定DNA 序列进行确证.

采用Lipofectin 试剂转染，按其说明书进行转染，同时转染pcDNA3.1空载体作为对照. 挑选阳性克隆进行扩大培养，加压筛选2 mo后进行RTPCR鉴定细胞转染结果. 用Promega 公司RNA提取试剂盒提取、纯化细胞总RNA，进行总RNA纯度分析后，按试剂盒说明进行反转录反应，取反转录的cDNA链为模板进行PCR反应. PCR扩增条件为： 95

℃，预变性2 min，继之以32个循环，包括94℃ 1 min, 52℃ 1 min, 72℃ 1 min，最后72℃延伸10 min. 分别取PCR产物进行10 g/L 琼脂糖电泳，紫外线投射仪观察结果并照相.

胰酶消化体外培养的B16细胞，PBS洗3遍，过200目筛网得到单细胞悬液，调整细胞浓度为5×109/L，每只小鼠尾静脉注射0.2 mL， 2 wk后处死小鼠记数肺转移灶个数，设立肿瘤对照组和mGMCSF 治疗组.

统计学处理：结果以x±s表示，各组结果数据应用SPSS11.0统计软件进行t检验.

2结果

2.1pcDNA

3.1/mGMCSF表达载体的构建将mGMCSF的PCR扩增产物，插入pcDNA3.1载体，得到重组质粒pcDNA3.1/mGMCSF，用NheI 和XhoI双酶切该质粒，可得到430 bp的mGMCSF片段，与预期大小相符（图1）. DNA序列分析结果表明，所插入序列完全正确，表明重组质粒构建成功. 2.2mGMCSF在B16小鼠黑色素瘤细胞中的表达将重组质粒pcDNA3.1/mGMCSF转染小鼠黑色素瘤细胞系B16, 经过G418加压筛选，得到能稳定传代的G418抗性细胞系B16TR. 为了证实该细胞系可表达mGMCSF，我们以转染细胞总RNA为模板，行RTPCR检测，结

果显示在该细胞系中可检测到450 bp左右的条带，与mGMCSF的大小相符，提示B16TR中含有并可表达mGMCSF基因(图2).

黑色素瘤多发转移不可怕合适的方案可延长生命

黑色素瘤是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。在我国发病率比较低，但是黑色素瘤恶性程度比较高，容易出现远处转移和扩散，不仅给患者带来痛苦，还会增加治疗的难度，此时选择一个合适的治疗方案是比较重要的。黑色素瘤这种疾病早期只有卫星灶、溃疡、反复不愈、区域淋巴结转移和移行转移。晚期黑色素瘤根据不同的转移部位症状不一，容易转移的部位为肺、肝、骨、脑。眼和直肠来源的黑色素瘤容易发生肝转移。转移性黑色素瘤患者可能出现一系列非特异性症状，包括食欲减退、恶心、呕吐及乏力等。此外，黑色素瘤转移至机体各个不同部位可出现相应不同症状，例如骨转移可能出现骨痛、肺转移可能出现咳嗽、咯血等。黑色素瘤出现多发转移病情多已经发展到了晚期，此时很多患者和家属都比较害怕，认为出现了转移，治疗也没有什么意义，从而放弃治疗，其实专家介绍，黑色素瘤多发转移虽然比较难治，但是并不是被判了死刑，选择合适的治疗方案是可以减少痛苦，延长生命的，建议患者不要丧失治疗的信心。黑色素瘤多发转移一般手术治疗不适合，而放疗属于局部治疗，无法杀伤游离在外的癌细胞，临床上多采用全身性的化疗和中医药进行治疗，化疗是利用不同的化疗药物对全身的癌细胞进行杀伤，可起到杀灭癌细胞，缩小肿瘤，控制病情的目的，但是化疗本身是一种以毒攻毒的治疗方法，患者会出现恶心、呕吐、腹泻、乏力、食欲不振、白细胞减少和血小板下降等症状，长期效果较差，易复发，对于年龄偏大，体质较差，有恶病质的患者应该慎用。黑色素瘤多发转移也可单独采用中医药治疗，中医治疗黑色素瘤多发转移，具有很强的整体观念，多种方法联合作战，内服与外敷相结合，病变部位与经络穴位用药相结合，治疗与康复同时进行，攻毒与扶正并重，全方位、多通道，立体作战的策略，可全面控制病情，改善症状，延长病人的生命。临床上，在众多的中医疗法中，汲取中医药精髓的“三联平衡疗法”获得了较好的口碑，应用广泛。注重从患者整体入手，采用天然中草药，通过对不同病人，病因病机的辩证治疗，起到“培元固本”“化痰散结”“排毒减毒”的功效，从而减轻病人痛苦，延长病人生命的效果。可见黑色素瘤多发转移并不是无法治疗，建议患者根据情况选择合适的治疗方案，此外也要保持良好的心态，做好饮食方面的调理工作，给予合理的饮食搭配，提高病人的免疫力，让病人更好的接受治疗。

恶性黑色素瘤手术的护理实践

恶性黑色素瘤手术的护理实践发表时间：2019-11-12T14:23:30.587Z 来源：《医药前沿》2019年28期作者：林静 [导读] 我科在2018年1月－2018年12月期间，接收并治愈恶性黑色素瘤的患者16例。（江苏省人民医院整形烧伤科江苏南京 210029）【摘要】原发性恶性黑色素瘤发病占到恶性肿瘤的百分之一到百分之二，皮肤多发，然后是眼部，第三位是肛门和直肠部位。近些年，恶性黑色素瘤病发率明显增加,这是由于患者对其不够重视，对恶性黑色素瘤的危害性认识不足造成的，导致患者只是因为一颗“小黑痣”而失去性命。所以在发现“小黑痣”时重视他，并做到立刻就医且采用合适的治疗方法是十分重要的。我科2018年1－12月，收治恶性黑色素瘤患者16例，经过治疗与护理，达到预期的效果，现将护理经验报告如下。【关键词】恶性黑色素瘤；治疗；护理【中图分类号】R730.56 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）28-0169-02 1.资料与方法 1.1 一般资料我科在2018年1月－2018年12月期间，接收并治愈恶性黑色素瘤的患者16例，其中男8例，女8例，年龄46～92岁，平均年龄(47.3土5.4)岁，病程在1个月～2年，病变范围0.8 cm×0.6cm-5.2cm×3.8cm；所有患者均符合皮肤恶性黑色素瘤诊断标准，经过病理检查证实，临床表现为瘙痒、破溃，并伴有接触性疼痛或接触性出血；按病变部位分类：头面部5例、四肢3例、脚部5例、阴道1例、躯干2例，排除恶性黑色素瘤的复发和切除病例。 1.2 治疗方法所有患者都进行黑色素瘤扩大切除手术治疗，切除范围通常是在病变处扩大2cm左右，实际切除范围需要依据肿瘤占据的面积以及肿瘤占据的深度、还要看是否侵犯黏膜、骨、软骨等来确定，以确保切缘阴性；手术中需要谨遵无癌操作原则，以防癌细胞入侵。手术完成后，应即刻将切下的病理组织送检，确定肿瘤的类型及分化程度，并确保肿瘤已完整切除。 2.护理 2.1 手术前的护理 2.1.1知识宣教不少人对恶性黑色素瘤是什么都不够了解，所以从恶性黑色素瘤发病的主要原因入手，对患者进行疾病相关知识的科普。包括先天的遗传、自身免疫的缺陷或者是免疫功能的减退、受自身内分泌的因素、长时间的曝晒、以及心理方面的影响均有一定的几率对恶性黑色素瘤的病发和病变会产生影响。因此对患者进行相关疾病知识科普，有利于患者积极配合治疗。同时需要针对那些患有恶性黑色素瘤患者家属的进行相关疾病知识宣教，告知病患家属关于恶性黑色素瘤的知识、如何做好手术后的护理、简单有效的自我检查方法以及定期体检等。 2.1.2生活护理导致恶性黑色素瘤的主要环境因素是长时间接触或者接触过多太阳的紫外线辐射。因此，要保持合适的温湿度,也要提醒患者尽量避开，以免受到强烈紫外线刺激，告知患者在进行户外活动时要做好防晒保护。此外，观察患者术后康复中的皮肤,避免引发感染。 2.1.3 心理护理恶性黑色素瘤患者在发病早期，患者和家属可能因为不了解而不够重视,但得知这种疾病的危害性，则会因为害怕儿出现情绪低落、紧张焦虑等心理特征，有较重的心理负担。因此做好心理护理，树立战胜疾病的信心，让患者积极配合治疗。2.1.4术前准备术前指导是十分重要的，提醒患者避免辛辣刺激饮食，按医嘱常规检查。备皮备血，手术前一天洗澡，注意保暖，术前12小时要禁食,术前4h～6h禁水。 2.2 手术后的护理 2.2.1病情观察与护理监测并记录下患者的生命体征变化，观测患者手术后创面的愈合情况；谨遵无菌操作的原则，注意防止创面的感染，做到及时换药；做好疼痛护理，由于麻醉药物的影响，当药效消失后，患者会感到不同程度的疼痛感，这时医护人员可以用疼痛数字评分法,为患者进行疼痛评估，为其进行心理疏导或行为训练，以转移其注意力，达到缓解疼痛的目的，必要时可以遵照医嘱，使用一些镇痛类的药物。 2.2.2生活护理病房要有合适的温度和湿度；根据不同的手术部位、以及不同症状的严重情况制定对应的饮食方案，确保患者手术后的饮食能够清淡却不失营养；保护好手术后的伤口，确保创面敷料无菌、干燥；也要注意保暖，防止受凉感冒等。对于进行皮瓣修复的患者，需要确定正确的术后体位，避免按压到植皮的区域、避免受到冷的刺激，以促进移植皮瓣血液循环；经过临床研究，手术后的三天内是恶性黑色素瘤出现皮瓣危象多发时段，手术后一天内是最常见的，所以在术后的三天内需要进行严密的皮瓣血液运行情况监测，关注移植皮瓣的颜色、温度以及胀程度等。 3.小结恶性黑色素瘤可以算是最为严重的肿瘤之一，是发于表皮基底层黑色素细胞的恶性肿瘤。尽管恶性黑色素瘤发病率较低，但是其恶性程度，即使在早期也容易发生转移，所以有着较高的病死率，且其手术方式复杂。所以医护工作者应做好恶性黑色素瘤手术患者的常规护理和特殊护理，从而使得患者的治愈率得到提高，帮助患者更好的生活。因此，探索并总结有关恶性黑色素瘤手术患者的护理方法及护理经验，并形成一套合理且科学有效的护理流程，可以为患者提供更好的治疗与服务，促进患者身心健康的恢复，也可以体现临床护理价值所在。【参考文献】 [1]张鲜英，刘毅，徐承新.面部皮肤恶性黑色素瘤整复治疗的临床观察[J].临床肿瘤学杂志,2015,20(1):75-78. [2]童璐,刘悦,王珺,等.局部皮瓣修复面部皮肤恶性肿瘤软组织缺损效果观察[J].中华实用诊断与治疗杂志2014,28(1):61-62. [3]李琳，林瑞英，韦淑怡，等.头面部皮肤恶性肿瘤手术切除及创面修复与重建的方法探讨[J]中国医疗美容,2016,(4):20-22. [4]苏新，王立夫,陈默轩.面部皮肤恶性肿瘤扩大切除术后局部皮瓣的修复[D].江苏医药2011,37(19):2337-2338.

黑色素瘤会转移到哪里,如何治疗

黑色素瘤是皮肤癌的一种，其恶性程度高、预后很差，因而其发病率虽然仅占皮肤癌的10%，但死亡率却占皮肤癌的80%，日常生活中一定要引起警惕。转移是黑色素瘤比较常见的，对患者的生命健康造成重大威胁，那么黑色素瘤会转移到哪里呢？下面一起来看一下。黑色素瘤常见的转移方式： 1)皮肤粘膜上直接出现黑色素瘤卫星结节。 2)肿瘤细胞的淋巴系统转移，支气管旁，肺门、纵膈淋巴结;胸外是锁骨上、腋下和上腹部淋巴结为转移常见方向。 3)肿瘤细胞随着淋巴转移出现在患者身体局部，局部的肿瘤细胞进一步扩散会伴随血液出现转移，血液转移是最严重的远处转移现象，黑色素瘤患者临床死亡率绝大部分是因为患者出现了血液转移。 4)医源性转移，手术过程中微小肿瘤细胞局部扩散，继而生长。黑色素瘤出现了转移往往治疗难度增加，此时选择合适的治疗方案是延长患者生存期的重要保障，选择合适的治疗方案，积极的治疗，依然可以减少患者的痛苦，延长患者的生命，甚至有些患者实现长期带瘤生存，因此患者和家属一定要积极治疗疾病。黑色素瘤出现转移手术切除的远期疗效尚不令人满意，其主要原因之一是术后复发和转移。因此黑色素瘤出现转移一般是不建议手术治疗，放化疗虽然能杀灭癌细胞，控制病情的发展，短期内效果显著，但是由于具有很大的副作用，导致治疗不能顺利进行，因此在放化疗的时候常会配合中医药进行治疗能起到增效减毒的作用。黑色素瘤出现转移中医治疗也是不可少的，特别是对于年龄偏大，体质较差、病情严重的患者，更适合采用温和的中医治疗。中医治疗根据每个患者体质有别，年龄不同，并发症不同，表现并不完全一样，在治疗时，对症下药，既有固定不变的主方，又有灵活加减不断变化的药物，不仅能改善患者的并发症，提高患者的生活水平，还能有效延长患者的生存时间，甚至实现长期的带瘤生存。临床上，在诸多的中医药疗法中，汲取中医药精髓的“三联平衡疗法”受到很多患者和家属的好评。该疗法既攻邪不伤正、扶正不恋邪，又能辩证施治，还具有不手术、不放化疗、不住院、无痛苦、无风险、无毒副反应，花费少等特点。通过天然中草药，对病人机体内环境的调节，可以有效实现减轻病人痛苦，提高生活质量，延长病人生命的效果。黑色素瘤会转移到哪里？只要不放弃治疗，即使是转移了还可以治疗，而中药调理很适合于晚期包括转移的患者，因为这是一种保守治疗的方法，很大程度上减轻了患者的痛苦，中医是标本兼治的，治疗的效果也是比较稳定的，因此选择正确的治疗方法，为治疗争取时间，才能早日康复。

两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较_李佳悦

?基础论著? 两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较李佳悦朱欣凯王萍钮利喜【摘要】目的采用尾静脉接种法建立C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移动物模型，观察小鼠肺部成瘤过程，并对两种模型进行比较。制作肿瘤切片，通过HE染色分析两种肿瘤模型的组织病理学特征。方法培养B16黑色素瘤细胞至对数生长期时收集细胞，用生理盐水调整浓度为5×106/ml备用。将备好的B16细胞通过尾静脉接种小鼠，每只注射0.2 ml。接种后，两种小鼠每隔一定时间随机各取一只小鼠处死，解剖取肺，观察成瘤情况，计数肺表面的瘤结节数，测量瘤结节大小。以出现瘤结节开始计时，记录小鼠荷瘤时间。形成稳定的肿瘤模型后，制作肿瘤组织切片，HE染色进行病理学观察分析。结果B16细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠和KM小鼠，均能形成肺转移模型，但两种小鼠成瘤情况差异较大。KM小鼠的荷瘤时间比C57BL/6小鼠荷瘤时间长。HE 染色结果显示黑色素瘤B16细胞在两种小鼠的肺组织中均形成巢团状的转移瘤，且两种模型肺转移瘤均多分布在支气管周围。结论通过对C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的成瘤特点的分析比较，可以看出KM小鼠更适合用于研究新的肺肿瘤治疗药物，为研究黑色素瘤的发生发展提供依据。【关键词】 B16细胞；肺转移小鼠模型；尾静脉 Establishment and comparison of two kinds of lung metastasis mouse models Li Jiayue, Zhu Xinkai, Wang Ping, Niu Lixi. Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China Corresponding author: Niu Lixi, Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/bb889827.html, 【Abstract】 Objective To observe the tumorigenic process, two pulmonary metastatic models of melanoma B16 cells were established and compared using C57BL/6 and KM mice, respectively. Methods Tail intravenous injection of 1×106 melanoma B16 cells/mouse resulted in macroscopic disease by 4-9 days and a randomly selected mouse was sacrificed in a certain interval to survey the morphologic characteristics of melanoma. The number of tumor nodules in the lung surface was counted and the size of tumor nodules was measured. The tumor-burdened time of mice was recorded and the tumor sections were made for pathological observation and analysis. Results HE staining showed that each mouse in the B16 cell injection groups had nest-shape metastatic foci distributed around the bronchi in the lung, but the tumor-burdened time was significantly different which was longer in KM mice than in C57BL/6 mice. Conclusion By comparing the characteristics of two pulmonary metastatic models of C57BL/6 mice and KM mice, we can concluded that the B16 melanoma models in KM mice were ideal tumor models which were suitable for researching the new drugs in lung cancer treatment. Our research would provide evidence for the occurrence and development of melanoma. 【Key words】 B16 cells; Pulmonary metastatic mouse model; Tail vein 肺肿瘤又叫支气管肺癌（lung carcinoma）是常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌的发病率和死亡 DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2015.19.022 基金项目：山西省青年基金资助项目（2011021035-5）作者单位：030006 太原，山西大学生物技术研究所通讯作者：钮利喜，Email: nlx@https://www.360docs.net/doc/bb889827.html, 率都有明显增高的趋势，已成为人类因癌症死亡的主要原因[1-2]。但其发病机制目前尚未完全阐明，目前治疗方法以化疗和放疗为主，治疗带来的不良反应给患者造成极大的痛苦，治疗效果亦不尽人意。新的有效的肺肿瘤治疗的方法一直在探索中。肿瘤模型是研究恶性肿瘤病因、发展过程和探索肿瘤治

大腿软组织恶性肿瘤20例的综合治疗

大腿软组织恶性肿瘤20例的综合治疗作者：李文波，林建华，许卫红【摘要】目的探讨大腿软组织恶性肿瘤的疗效与手术方法的关系。方法20例软组织恶性肿瘤行广泛和间室内切除，9例术后行放射治疗。结果20例中，17例获得随访，随访时间6个月～5年；13例术后无复发，4例复发。结论大腿恶性软组织肿瘤采用广泛及根治切除取得较满意疗效。【关键词】软组织肿瘤；综合疗法软组织肉瘤是起源于间叶组织的恶性肿瘤，比较少见[1]。由于大腿软组织丰厚，普通X线不能显影，且恶性肿瘤生长迅速，就诊时肿物较大。20012005年，笔者治疗大腿巨大软组织肿瘤20例，报告如下。 1临床资料 1.1一般资料20例中，男性11例，女性9例，年龄（49.2±5.8）岁（23～79岁）。软组织和骨肉瘤分期[2]：ⅠA期10例，ⅠB期1例，ⅡA期有8例，ⅡB期1例。20例中，累及单间室18例，双间室2例；侵犯股骨1例，伴有神经血管受累1例。肿瘤长度（20.3±7.5）cm （11～36 cm）。 1.2治疗方法术前常规检查，并行普通X线、CT及MRI检查；10例在内侧间室病变行血管造影术以了解瘤体与血管关系，并行术前栓塞。20例均行术前穿刺活检，结合术中快速冰冻病理，制订术中手术方案。手术切口依据肿瘤性状而定；恶性肿瘤采用间室根治切除或安

全距离广泛切除（瘤缘≥5 cm）,并结合术中切缘快速冰冻病理，直至阴性；如阳性则补切5 cm。本组股四头肌受累13例行膝关节动力重建，主要有：肿瘤侵犯股内侧肌，切除后用半腱肌、半膜肌重建；侵犯股外侧肌，则切除后行股二头肌重建，而股中间肌受累切除后不予重建。其他浅层的股薄肌、缝匠肌如未累及,尽量保留或行软组织移位，用以覆盖假体或外露的股骨；2例骨质受累行人工假体置换；3例皮肤缺损行薄层皮移植。术后创面常规加压包扎,植皮区行局部加压包扎。常规放置引流管4～6 d，引流量<50 mL可考虑拔管。术中肿瘤所在的间室有重要神经、血管者术后追加放射治疗。本组有9例术后行放射治疗，常规分割照射剂量1.8～2.0 Gy，每周5次，照射总剂量 40～72 Gy（中位剂量60 Gy），放射治疗后进入随访。 1.3结果20例均得到完整切除。术后病理检查：恶性神经鞘瘤7例，恶性血管内皮瘤3例，脂肪肉瘤3例，恶性黑色素瘤3例，恶性组织细胞瘤2例，不明组织来源2例。本组中，2例出现伤口感染，其中植皮愈合欠佳1例，均换药后愈合。伤口淋巴漏3例，2例行伤口局部加压后愈合，1例放射治疗后愈合。本组无神经血管损伤并发症。术后17例获得随访, 3例失访,随访时间6个月～5年。复发4例（3例为行放射治疗病例），1例为坐骨神经恶性血管内皮瘤,患者及家属术中拒绝切除坐骨神经,术后拒绝放射治疗，5个月后复发,9个月后死于肺转移；另3例再次切除，未见复发。

人类小鼠原代肺成纤维细胞分离方法

Primary human/mouse lung fibroblast isolation 人类/小鼠原代肺成纤维细胞分离方法参考文献(H: 1.Katharina Heinzelmann et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2018; 2. Claudia A Staab-Weijnitz et al. Am J Respir Crit Care Med. 2015. FK506-Binding Protein 10, a Potential Novel Drug Target for Idiopathic Pulmonary Fibrosis; M: Isolation and characterization of mouse fibroblasts, Benjamin L. Edelman and Elizabeth F. Redente) Materials: 材料： 1. Digestion solution: a).Liberase TM (5401119001, Merck) solution, 2.5mg/ml (HBSS); b).DNAse (D4263-5VL, Sigma), 2000U/ml(PBS) 消化液：a) Liberase TM 溶液（5401119001, Merck）：溶于HBSS（终浓度2.5mg/ml） b) DNAse溶液（D4263-5VL, Sigma）：溶于PBS（终浓度2000U/ml） 2. Nylon filters 40/70 μm 3. Complete medium (Mouse: DMEM/F12 + 20% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin + 0.1% Amphotericin B + 1% Glu; Human: DMEM/F12 + 20% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin + 0.1% Amphotericin B) 4. Knife (disposable) 5. Syringe 6. PBS Digestion solution: Steps: (Mouse from 1-13, Human from 7-13) 步骤： 1. Weight the mouse, calculate the amount of anesthesia, Xylazin : Kelamin : NaCl = 1:4:5, 100ul/10g weight; 称重小鼠后麻醉 2. Inject and wait 10min till the mouse sleep 腹腔注射后等待10分钟

软组织肉瘤术后化疗临床路径

软组织肉瘤术后化疗临床路径 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

软组织肉瘤化疗临床路径（一）适用对象。第一诊断为软组织肉瘤，符合以下情形：需行术后辅助化疗患者。（二）诊断依据。根据软组织肉瘤诊治中国专家共识（2015年版）、《NCCN软组织肉瘤临床实践指南》（美国国家癌症协作网，2015年第2版）。 1、查体：一般根据肿物的部位、大小、边界、活动度、有无压痛、皮温和伴随症状等七个方面对肿物进行初步定性。 2、影像学：B-us、CT、MRI、PET-CT、血管造影等。四肢软组织肉瘤首选MRI 检查而非CT。高危患者（>5cm，位置深在，高度恶性）应行胸部CT而非CR检查以除外肺转移。 3、活检：软组织肉瘤活检，包括针吸活检和切开活检。针吸活检准确率约85%，肿瘤位置较浅的时候，一般由临床医师实施，位置深的可实施CT或B超引导下针吸。针吸困难或针吸失败，则需要实施手术切开活检。滑膜肉瘤，上皮样肉瘤及透明细胞肉瘤等应检查区域淋巴结情况。 4、分子遗传学：如滑膜肉瘤的SSX-SYT融合基因，透明细胞肉瘤及原始神经外胚瘤等均存在特异性基因变异。2.软组织肉瘤的确诊需要多学科方法的综合应用，目前主要依靠病理组织学、免疫组织化学等手段。（三）选择化疗方案。根据《NCCN软组织肉瘤临床实践指南》（美国国家癌症协作网，2015年第2版）、根据软组织肉瘤诊治中国专家共识（2015年版）等。（四）临床路径标准住院日为5-8天。（五）进入路径标准。

小鼠肺间质树突状细胞的分离_纯化与鉴定_王宏伟

1本文为国家自然科学基金资助项目(81000848)o军事医学科学院微生物流行病研究所,北京100071 作者简介:王宏伟(1976年-),男,博士,副主任医师,主要从事血液病理学及免疫病理学研究,E -mail:whw6626@s https://www.360docs.net/doc/bb889827.html,; 通讯作者及指导教师:陆江阳(1957年-),男,硕士,主任医师,博士生导师,主要从事创伤与危重病免疫病理学研究,E -mail:luj y@https://www.360docs.net/doc/bb889827.html, 。 doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2011.09.012 #免疫学技术与方法# 小鼠肺间质树突状细胞的分离、纯化与鉴定1 王宏伟陆江阳田光o 刘茜赵敏杨毅康佳蕊(解放军总医院第一附属(304)医院病理科,北京100048) 中国图书分类号 R36417 文献标识码 A 文章编号 1000-484X (2011)09-0814-05 [摘要] 目的:建立肺间质树突状细胞(DCs)的分离与纯化方法,为肺间质DCs 的相关研究提供实验基础。方法:雄性BALB/c 小鼠肺组织经?型胶原酶消化、密度梯度离心、CD11c +免疫磁珠分选纯化DCs,流式细胞术鉴定分选DCs 纯度,倒置相差显微镜观察孵育细胞生长状态,扫描电镜和透射电镜观察DCs 超微形态,流式细胞术检测肺间质DCs 的CD11c 、CD11b 、CD86和I -A b 表型。结果:分选获得的肺间质DCs 经鉴定,纯度为92.59%?5.62%,在RPMI1640培养基中生长状态良好,少数细胞形成小细胞集落。DCs 超微形态观察显示细胞表面多见长1~2L m 密集的树枝状突起,细胞器不发达,细胞核形不规则。90%以上肺间质DCs 为未成熟状态或前体DCs,低表达成熟标志物I -A b 和CD86,并具有异质性,近40%起源于髓系细胞分化。结论:密度梯度离心和免疫磁珠分选是分离、纯化肺间质DCs 的理想方法,获得的DCs 纯度高、活性好、免疫表型稳定,但操作步骤比较复杂,技术要求高。 [关键词] 肺;树突状细胞;免疫磁珠;CD11c The separation,purification and identification of mouse interstitial dendritic cells in lung WANG Hong -Wei,LU Jiang -Yang,TIAN Guang ,LIU Qian,Z HAO Min,YANG Yi,KANG Jia -Rui.Department o f Pathology ,the First Affiliated Hos pital o f General Hospital o f P LA ,Beijing 100048,China [Abstract] Objective:To establish the methods to separate and purify pulmonary i nterstitial dendri tic cells(DCs)of mice in order to provide experimental base for the related study on them.Methods:Pul monary in terstitial DCs of male B ALB/c mice were separated by lung tis -sue diges ting and density gradient centrifugation,and were puri fied by CD11c +microbeads.Growth state of DCs was observed by phase contrast microscope.Ultrastructure of DCs was observed by scanning and transmission electron microscope.Immunological phenotype of DCs was ana -lyzed wi th CD11c,CD11b,CD86and I -A b by flow cytometry.Results:The purity of pul monary DCs acquired by separation wi th im munomagnet -ic beads was 92.59%?5.62%,and they grew in good state in cul ture media.DCs had coarctate dendritc process of 1-2L m in length in the surface,incomplete organelle in cytoplasm and irregular nuclei.Over 90%of pulmonary DCs were immature or pre -DCs expressing low level of molecular markers I -A b and CD86,and they were heterogeneous about 40%of them originating from myeloid cells.Conclusion:Pulmonary DCs acquired by densi ty gradient centrifugation and immunomagnetic beads had high purity and stable immunolog ical phenotype.They were relatively practical methods to separate and purify pul monary DCs in spite of complex procedure and techniq ue. [Key w ords] Lung;Dendritic cells;Immunomagnetic beads;CD11c 树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是一类功能强大的专职抗原提呈细胞,在机体免疫应答和免疫调控中起关键作用。DCs 主要分布在免疫器官中,而分布于肺、肝、肾等非淋巴器官中的DC s 被称作间质DCs [1] 。近年来的研究表明,肺间质DCs 与肺感染、哮喘、移植及创伤性免疫紊乱性疾病的发病机制密切相关,探讨DCs 的免疫功能对阐明上述疾病的机制和防治具有重要意义。由于肺间质DCs 数量稀少,分离、纯化难度大,限制了对其的深入研究。本文探讨小鼠肺间质DCs 的分离、纯化和鉴定方法,为相关研究提供实验基础。 #814#中国免疫学杂志2011年第27卷

Ezrin与Ki-67在软组织肉瘤中的表达与术后复发的关系

Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2020, 10(9), 1906-1910 Published Online September 2020 in Hans. https://www.360docs.net/doc/bb889827.html,/journal/acm https://https://www.360docs.net/doc/bb889827.html,/10.12677/acm.2020.109286 Ezrin与Ki-67在软组织肉瘤中的表达与术后复发的关系杨斌，宋克亮青岛大学附属医院骨肿瘤科，山东青岛收稿日期：2020年8月19日；录用日期：2020年9月3日；发布日期：2020年9月10日摘要目的：探讨Ezrin与Ki-67在软组织肉瘤中的表达与术后复发的关系。方法：收集2016年7月至2019年4月在青岛大学附属医院接受手术治疗的116例软组织肉瘤患者的临床资料，随访时间至少2年，术后分为复发组(n = 35)和未复发组(n = 81)，分别检测Ezrin及Ki-67蛋白的表达，分析Ezrin阳性与Ki-67阳性与软组织肉瘤术后复发的关系。结果：其中复发组中Ezrin、Ki-67蛋白的阳性表达率分别(85.71%, 74.29%)高于未复发组中Ezrin、Ki-67蛋白的阳性表达率(45.68%, 35.80%)，差异有统计学意义(P < 0.05)。结论：复发组中Ezrin、Ki-67蛋白的阳性表达率分别高于未复发组中Ezrin、Ki-67蛋白的阳性表达率，说明软组织肉瘤术后复发与Ezrin及Ki-67的阳性表达有着密切联系。关键词软组织肉瘤，复发，Ezrin蛋白，Ki-67 Relationship between Ezrin and Ki-67 Expression in Soft Tissue Sarcoma and Postoperative Recurrence Bin Yang, Keliang Song Department of Osteooncology, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao Shandong Received: Aug. 19th, 2020; accepted: Sep. 3rd, 2020; published: Sep. 10th, 2020 Abstract Objective: To investigate the relationship between Ezrin and KI-67 expression in soft tissue sar-

肺原发性黑色素瘤

肺原发性恶性黑色素瘤一例病情简介：患者女，49岁，因胸壁疼痛不适3个月余，于2012年8月15日入院。临床表现：前上胸壁疼痛不适，呈持续性牵扯痛，伴气促，左上肺呼吸音稍减低；脊柱呈"S"形改变，全身浅表淋巴结未扪及，其他部位未见皮疹及结节。影像检查：胸部CT平扫示左肺上叶前段一大小约4．3 cm×2．8 cm × 3．5 cm团状软组织肿块，CT值48 HU，形态不规则，呈分叶状，边界清楚，部分与胸膜粘连，其内见斑片状稍低密度影，脊柱呈"s"形侧弯畸形。增强扫描示动脉期病灶呈中度强化，CT值66 HU，纵隔及肺门未见肿大淋巴结；延迟300 S后扫描病灶呈持续强化，CT值64 HU。CT诊断考虑为左肺上叶周围性肺癌。头颅CT平扫未见异常。全身PET骨显像：静脉注射锝一亚甲基二磷酸盐(99Tc m一MDP)74 MBq后全身骨骼未见明显对比剂异常浓聚和稀疏缺损。腹部彩色超声示：肝、胆、胰腺、脾脏、双侧肾上腺、肾脏、子宫、卵巢、膀胱未见异常。手术病理：肿块位于左肺上叶前段边缘，直径约3．0 cm，类圆形，质韧，边界清，剖面呈黑色均质结构，左肺门未见肿大淋巴结，行左肺上叶楔形切除送检。免疫组织化学：细胞角蛋白20(CK20)阴性，肿瘤增殖抗原(Ki-67)阳性(35％)，黑色素瘤单克隆抗体(HMB-45)、黑色素 A(Melan-A)、波形蛋白(Vimemtin)、S-100蛋白均阳性。病理诊断：左肺上叶原发性恶性黑色素瘤。诊断：肺原发性黑色素瘤

诊断依据： 1. 女性患者，49岁。 2. 主要表现为胸部疼痛不适，左上肺呼吸音稍减低，全身浅表淋巴结未扪及。 3. 辅助检查：胸部CT提示左肺上叶前段一大小约4．3 cm×2．8 cm × 3．5 cm团状软组织肿块，CT值48 HU，形态不规则，呈分叶状，边界清楚，部分与胸膜粘连，其内见斑片状稍低密度影，脊柱呈"s"形侧弯畸形。增强扫描示动脉期病灶呈中度强化，CT值 66 HU，纵隔及肺门未见肿大淋巴结；延迟300 S后扫描病灶呈持续强化，CT值64 HU。手术病理：肿块位于左肺上叶前段边缘，直径约3．0 cm，类圆形，质韧，边界清，剖面呈黑色均质结构，左肺门未见肿大淋巴结，行左肺上叶楔形切除送检。免疫组织化学：细胞角蛋白20(CK20)阴性，肿瘤增殖抗原(Ki-67)阳性(35％)，黑色素瘤单克隆抗体(HMB-45)、黑色素A(Melan-A)、波形蛋白(Vimemtin)、S-100蛋白均阳性。鉴别诊断：须首先除外转移性恶性黑色素瘤。肺转移性恶性黑色素瘤可表现为多结节、孤立肿块、支气管内肿块或弥散的黏膜黑变病，也可能出现原位的Paget样播散，这时应重视是否有准确的皮肤色素性损害病史，进行仔细全面体检以排除其他部位的转移。肺原发性恶性黑色素瘤外观上与其他肿瘤无明显区别，其切面常呈灰黄色与灰黑色相问，具有一定特征。光镜下细胞异型性明显，核分裂象易见，但

p53_k_ras基因型小鼠肺癌细胞株的建立与鉴定

《中国癌症杂志》2009年第19卷第5期 CHINA ONCOLOGY 2009 Vol.19 No.5 335p53-/- ,k-ras基因型小鼠肺癌细胞株的建立与鉴定［摘要］　背景与目的：在肺癌的基础研究中，有特定基因变化的肺癌细胞株非常重要。k-ras激活和p53突变在肺癌的发生发展中有重要作用。本研究通过诱导小鼠肺癌生成，对肿瘤进行培养，建立p53-/-,k-ras 基因型的小鼠肺癌细胞株。方法：用病毒吸入法，对p53loxp/loxp ，Loxp-Stop-Loxp k-ras G12D 转基因小鼠肺部细胞进行条件性基因敲除，诱导小鼠产生肺癌。通过HE染色和PCR法对小鼠肺癌组织进行组织病理学和基因型鉴定，对肿瘤细胞原代培养建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株，并通过软琼脂克隆形成实验、生长曲线分析和核型分析对细胞株进行验证。结果：成功建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺腺癌细胞株。p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株体外生长速度与人肺腺癌细胞A549生长速度接近，能够在软琼脂中形成肉眼可见的克隆。结论：成功建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株，为下一步的实验研究打下了基础。［关键词］　肺癌；　小鼠；　细胞株；　原代培养中图分类号：R73-35+4 文献标识码：A 文章编号：1007-3639(2009)05-0335-05 Establishment of a mouse lung cancer cell line with the genotype of p53-/-,k-ras SUN Yi-hua,LI Li,PAN-Jun,YE Xiao-lei,WANG Zuo-yun,FENG Yan,CHEN Hai-quan (Department of Cardiothoracic Surgery, The Affiliated Sixth People's Hospital,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200233,China) Correspondence to：CHEN Hai-quan E-mail：hqchen1@https://www.360docs.net/doc/bb889827.html, ［Abstract ］ Background and purpose ：The lung cancer cell line with speci ? c gene mutation is very important in research of lung cancer. k-ras an d p53 play important roles in tumorgenesis, but ther e was little research about mouse p53-/-,k-ras lung cancer cell line in China. We established mice lung cancer cell lines with the genotype o f p53-/-,k-ras. Methods ：We induced lun g cancer in p53loxp/loxp , Loxp-Stop-Loxp k-ras G12D transgenic mice by intranasal infection wit h recombinant Cre adenoviruses that conditionally knock out p53 and activate k-ras in lung epithelium cells. Pathological histology of the mice lung cancer was ident i ? ed by HE staining and con ? rmed the genotype of the mouse lung cancer by PCR. A mouse lung cancer cell line was established by tissue primary cell culture. The anchorage-independent growth ability and proliferation rate were indentified compared with A549 cell line. Results ：A mouse lung adenocarcinoma cell line with the genotype of p53-/-, k-ras was established. This cell line had a similar proliferation rate with A549, and showed anchorage-independent growth in soft agar. Conclusion ：We have successfully established a mouse lung cancer cell line with the genotype of p53-/-, k-ras, which provided us a platform for further studying. ［Key words ］　lung cancer; mouse; cell line; primary culture 通讯作者：陈海泉　E-mail:hqchen1@https://www.360docs.net/doc/bb889827.html, 据世界卫生组织统计，肺癌已成为癌症中的第一杀手，全球每年约新增1 200万的肺癌患者［1］，尽管有手术、放疗和化疗等综合治疗，但疗效仍然不佳，有报道显示1996年到2003年的肺癌5年生存率仅为16%［2］。进一步加强对肺癌发生发展的机制研究，提出合理有效的治疗方案显得尤为重要。近年来，随着对肺癌研究的深入，国际上越来越多的使用转基因小鼠肺癌模型和特定基因变化的小鼠肺癌细胞株进行研究。k-ras激活和p53突变在肺癌细胞中较为常见，且p53-/-,k-ras的转基因小鼠模型研究显示这2个基因在肺癌的发生发展中均起着重要作

黑色素瘤晚期多处转移了还能活多久

黑色素瘤是一种常见的皮肤肿瘤，也是癌变率极高的恶性疾病，如果治疗不及时，很容易发生扩散转移，威胁患者生命。病属晚期时，病情发展速度较快，很容易出现其他部位的扩散转移，有的患者甚至会出现多处转移，使治疗变得非常棘手，治疗不当还会威胁患者生命，此时患者的生存期问题备受关注，那黑色素瘤晚期多处转移了还能活多久? 关于“黑色素瘤晚期多处转移了还能活多久”这个问题很难给出明确的答案，与患者的病情、体质、治疗方案、治疗效果以及心态有关。晚期出现多处转移治疗会更加棘手，但并非不能治疗，如果轻易放弃，不仅要承受极大的痛苦，生存期也是非常短的，为了能更好的取得理想的治疗效果，尽可能的延长生存时间，还是应结合患者的病情和身体状况选择合适的方法，保持良好的心态积极配合治疗。黑色素瘤晚期多处转移，局部治疗效果不佳，患者可以采用化疗和中医治疗等。化疗治疗黑色素瘤可以在短期内抑杀癌细胞，抑制扩散转移，缩小肿块，但是化疗在抑杀癌细胞的同时，常常还会对正常的免疫细胞和组织造成伤害，产生一系列的副作用，影响患者的生存质量和生存期。有的患者会在化疗期间配合中医药的治疗，有助于改善化疗的副作用，增敏增效，进一步延长患者生命。中医虽然短期内缩小瘤体的效果没有化疗明显，但中医副作用小，基本上不会损伤机体，像年龄大、身体弱、广泛转移的患者也能耐受，而且中医治疗更注重患者整体的调整和治疗，从患者的整体出发，辨证施治，能在一定程度上抑杀癌细胞，控制扩散转移，稳定病灶，还能帮助患者调理机体，增强患者的体能，提高患者机体的免疫力和抵抗力，并调动患者的自主抗癌能力，以抵抗癌肿的发展，达到提高生存质量，延长生存时间的目的。郑州希福中医肿瘤医院院长袁希福从事中医治疗肿瘤近40年，在传统中医理论及袁氏"阴阳平衡疗法"的基础上，结合多年临床抗癌实践经验，把传统中医药理论与当代免疫理论、细胞分化增殖周期理论及基因理论等医学理论有机嫁接，融会贯通提出专业治疗各种恶性肿瘤的中医药新思路、新理论-三联平衡理论。该理论调理与治疗并行，在治疗时注重对患者全身的调节，可以通过扶正、通瘀、祛毒等措施，抓住患者病机要害，调节患者全身气血、阴阳、脏腑机能平衡，有助于提高机体内环境的调控能力，提高机体的免疫力和抗病能力，全面控制肿瘤的生长。黑色素瘤晚期多处转移是非常危险的，患者需要及时进行治疗，以免病情加重。提示：黑色素瘤如今仍属医学难题，目前中医治疗也主要以“减轻痛苦、延长生命”为主。由于患者病情、体质差异，疗效会因人而异，患者及家属需理性看待，切勿盲目选择就医。 Tag：黑色素瘤转移了还能活多久|黑色素瘤转移到淋巴还能活多久|黑色素瘤脑转移能活多久|黑色素瘤转移不治疗活多久|黑色素瘤晚期转移后的存活期|黑色素瘤扩散能活多久|黑色素瘤能活几年|黑色素瘤转移到肺还能活多久|黑色素瘤淋巴结转移能活多久