第三章 红细胞检验

第三章红细胞检验
第一节红细胞生理
第二节红细胞计数
第三节血红蛋白测定
第四节红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义
第五节网织红细胞概述
第三章红细胞检验
第六节红细胞比容测定
第七节红细胞直径测定
第八节计算红细胞平均数
第九节红细胞形态检验
第十节点彩红细胞检验
学习目标
1.概述红细胞的生成、形态与功能以及血红蛋白的结构和吸收光谱。

2.叙述红细胞显微镜计数原理、试剂、操作、计算、注意事项。

3.比较红细胞计数和白细胞计数的异同。

4.概述红细胞计数的计数误差及质量控制。

第一节红细胞生理
一、红细胞的发育过程
二、红细胞形态与功能
三、血红蛋白结构与吸收光谱
一、红细胞的发育过程
造血干细胞
→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞
→网织红细胞→成熟红细胞
一、红细胞的发育过程
成熟红细胞
120天
二、红细胞的形态与功能
形态：双凹圆盘状；
直径：6～９μm，平均7.2μｍ；
厚度：边缘部分约2μｍ，中央约１μｍ
侧面观呈哑铃形。

在高渗溶液中：
红细胞皱缩，边缘呈锯齿状；
在低渗溶液中：
红细胞肿涨甚至破裂，血红蛋白逸出后形成影细胞。

血涂片经瑞特染色后，细胞呈粉红色，中央着色较淡，有明显的中央淡染区，淡染区的直径约占红细胞直径的1/3～2/5。

红细胞主要成分
血红蛋白和水（64％～70％），其余成分为蛋白质、磷脂、无机盐和酶。

功能：
1.运输O2和CO2
2.调节酸碱平衡
3.免疫粘附
三、血红蛋白结构与吸收光谱
Hb的结构：
Hb的分子量：64458。

1分子Hb：4个亚铁血红素，4个Fe，
可结合4个O2。

1molHb：4mol Fe，可结合4mol O2。

1克Hb：含3.47mg Fe , 结合1.39ml O2。

在正常情况下，外周血中的血红蛋白主要有：
氧合血红蛋白（HbO2）
还原血红蛋白（Hbred）
碳氧血红蛋白（HbCO）
高铁血红蛋白（Hi或MHb）。

吸收光谱特征：
氧合血红蛋白(HbO2）：呈鲜红色，在578nm（黄色光）和540nm（绿色光）处有两条吸收光带。

还原血红蛋白（Hbred）：呈暗红色，在556nm（黄、绿色光之间）处有一条吸收光带。

碳氧血红蛋白（HbCO）：呈樱红色，在572nm（黄色光）和535nm（绿色光）处有两条吸收光带。

高铁血红蛋白（Hi）：呈红褐色，在634nm、578nm、540nm和500nm处有４条吸收光带。

第二节红细胞计数
原理
第二节红细胞计数
器材
稀释液
甲醛枸橼酸盐稀释液
Hayem稀释液
稀释液
1.甲醛枸橼酸盐稀释液
成分功能
枸橼酸钠抗凝、维持渗透压
36%甲醛液防腐并固定红细胞
氯化钠维持渗透压
蒸馏水
稀释液
2.Hayem稀释液
成分功能
氯化钠调节渗透压
硫酸钠提高相对密度，防止细胞粘连
氯化高汞防腐剂
蒸馏水
操作
加稀释液：2.0ml
↓
采血：10μl
↓
混匀
↓
充液
↓
静置：2～3min
操作
↓
计数：高倍镜下中央大方格
五个中方格的RBC
↓
计算：
RBC/L =五个中方格的RBC
×5×10×200×106
↓
报告：RBC：△. △△×1012/L
请您练习
取稀释液1.99ml,加血10µl，计数中央大格内五个中方格红细胞为500个，请报告结果?
答案：
RBC=500×5×10×200×106
=5.00×1012/L
请您练习
取稀释液2.0ml,加血20µl，计数中央大格内10个中方格红细胞为800个，请报告结果?
答案：
RBC=800/10×25×10×(2000+20)/20×106
=2.02×1012/L
压线红细胞的计数方法：
注意事项
1. 血量要准确。

2. 稀释液要过滤。

3. 红细胞计数池内要分布均匀。

注意事项
4. 实验器材应清洁干燥。

5. 自身凝集素增高者，宜用不含甲醛的枸橼酸盐稀释液。

6.同时做白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白测定，应先取红细胞计数用血。

7. 如实记录实验结果，每次签发报告前应仔细核对。

计数误差
1.技术误差
同白细胞计数
白细胞数过高时应进行校正。

2.固有误差
严重贫血的标本，应缩小稀释倍数或扩大计数
范围。

质量控制
1.两差比值评价法
D R= —————
质量控制
2.变异系数评价法
|Xm-X |
V = —————×100
Xm
质量得分=100-（2 ×V）
目标形成性检测与校正
请您思考
红细胞计数与白细胞计数方法上有哪些不同？
答案
（1）红细胞稀释液是等渗溶液而白细胞稀释液是低渗溶液。

pH也不相同。

（2）红细胞稀释液不破坏细胞。

（3）稀释倍数不同。

（4）选用计数池区域不同。

（5）计数域误差大小不同。

思考题：
1.试着比较显微镜红细胞计数、白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数的异同。

2.常用红细胞稀释液由哪些成分配成，各有何作用？为什么有的患者可致浑浊？该怎样处理？
作业
1.测知一Hb含铁量是416mg/L，氧结合量是16.68%，问含血红蛋白多少？
2.取红细胞稀释液1.98ml，加外周血20μl，混匀后充入计数池，计数中央大方格中5个中方格，平均每个中方格的红细胞为80个，试报告该标本的RBC计数结果。

第三节血红蛋白测定
一、氰化高铁血红蛋白测定
二、其他测定方法
学习目标
叙述血红蛋白HiCN法的原理、操作、注意事项。

说出HiCN转化液的成分及作用。

概述十二烷基硫酸钠.碱羟高铁血红素血红蛋白测定方法。

复习旧课
HiCN的吸收光谱与Hi、HbO2、HbCO、Hbred等的吸收光谱有何不同？第三节血红蛋白测定
【定义】
Hb测定包括浓度测定和质量测定。

本单元是指测定血液中各种血红蛋白的总浓度，用ｇ／Ｌ表示。

第三节血红蛋白测定
【方法】
比密法
氰化高铁血红蛋白测定法
比色法十二烷基硫酸钠法
碱羟高铁血红素法
血氧结合力法
全血铁法
一、氰化高铁血红蛋白测定法
HiCN法：ICSH推荐
WHO确认的参考方法
我国推荐为首选方法
一、氰化高铁血红蛋白测定法
原理
表面活性剂溶解红细胞膜，释放血红蛋白。

血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白（Ｈｉ），在一定的ＰＨ值下，Ｈｉ与氰离子（ＣＮ－）结合生成稳定棕红色氰化高铁血红蛋白（ＨiCＮ）。

ＨiＣＮ在540ｎｍ处有一吸收峰，测定其吸光度，可求得血红蛋白浓度（ｇ／Ｌ）。

一、氰化高铁血红蛋白测定法
一、氰化高铁血红蛋白测定法
试剂
文齐血红蛋白转化液
氰化钾提供CN离子
高铁氰化钾氧化剂
无水磷酸二氢钾调节pH
Triton X-100
（非离子表面活性剂）加速溶血、防止浑浊
蒸馏水
一、氰化高铁血红蛋白测定法
配成后用滤纸过滤，置棕色玻瓶中（不能用塑料瓶！），塞紧后保存于冷暗处，勿使结冰，可保存数月。

此液应呈透明、淡黄色，ｐＨ在７.0～７.4之间，以蒸馏水作空白，用540nm 比色，吸光度应＜0.001。

若变浑、变绿或发生混浊则应废弃。

一、氰化高铁血红蛋白测定法
操作
１．取指血20μl，加入5ml转化液中，充分混匀，静置5min。

２．用分光光度计（带宽应小于8 μm）比色。

波长540nm，光径（比色杯内径）1.000cm，以转化液或蒸馏水为空白，测定其吸光度“Ａ”。

一、氰化高铁血红蛋白测定法
操作
加转化液: 5ml
↓
采血: 20μl
↓
静置：混匀后放置5min
↓
比色：λ=540 nm，比色杯1.000cm,转化液
（蒸馏水）为空白，测A值
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【操作】
计算：分光光度计符合国际标准
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【操作】
分光光度计不符合国际标准时，结果不能直接计算得出，可采用的方法为：
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【操作】
⑴ＨiＣＮ标准曲线制备
用HICN标准液在所用的分光光度计或光电比色计上，分别测定其吸光度（A），以Ａ为纵坐标，血红蛋白标准溶液的参考值为横坐标，绘制标准曲线，或求出K值，以后根据测定管吸光度即可在标准曲线上查出Hb浓度值。

一、氰化高铁血红蛋白测定法
【操作】⑴标准曲线法
一、氰化高铁血红蛋白测定法
【操作】⑵K值法
一、氰化高铁血红蛋白测定法
专用血红蛋白仪测定法
依据氰化高铁血红蛋白比色法的专用血红蛋白仪，采用交流蠕动泵自动进液排液，流动比色池微量比色，半导体冷光源及光电转换器件，电子线路采用模拟桥式光电转换。

信号经处理放大，送至模/数转换液晶显示器，直接显示出所测血红蛋白浓度值（ｇ/Ｌ）。

测试速度快，操作简便，更适合于临床。

专用血红蛋白仪测定法
操作
按说明调试好仪器。

取全血20uｌ，加入5ml HICN转换液中，混匀，静置5min，吸入仪器测定，待显示屏上的数字稳定不跳动时，此读数即为该血样的Ｈｂ值。

方法学评价
主要优点：
1．操作简便。

2．试剂较稳定，易保存，测定结果稳定。

3．血标本中的血红蛋白（除SHb外）在转化液的作用下能迅速被转化为HiCN，且HiCN稳定便于测定。

4．HiCN参考品可长期保存，便于质控。

方法学评价
缺点与不足：
1．试剂含剧毒品氰化钾，使用、处理不当可能污染环境，引起公害。

2．对碳氧血红蛋白（HbCO）转化太慢。

3．不能转化硫化血红蛋白（SHb）。

4．遇高白细胞和高球蛋白血症的血标本会出现浑浊，标本或试剂应经处理后才能比色。

注意事项
1．可由指血直接测定，耳血结果偏高。

静脉血可按每毫升血1.5mgEDTA二钠的比例抗凝，不可用肝素抗凝（可致混浊）。

注意事项
２．有条件的单位应校正分光光度计的波长准确性、波长重复性、谱带半宽度（狭缝）。

杂散光、光度线性和比色杯光径。

注意事项
３．专用血红蛋白仪、标准曲线或Ｋ值应定期检查、校正。

专用血红蛋白仪零点漂移绝对值超过2ｇ/Ｌ，需重新调零。

分光光度计必须有良好的线性才可用Ｋ值法。

注意事项
４．转化液（文齐氏液）pＨ应稳定7.2±0.2，放置在棕色硼硅有塞玻璃瓶中，20℃室温保存，冰箱保存稳定时间更长，但勿使结冰，不然会使Ｋ３Fe（CN）6失效。

放白色瓶、塑料瓶和强光照射会使CN-下降，结果偏低。

注意事项
５．转化液中KCN是剧毒药品，极不安全，也污染环境。

这是ＨiCＮ法的缺点。

KCN必须按剧毒药品管理规定保存，在配制和保存过程中应提高警惕，防止污染。

用后废液应分散稀释处理，或按每升加次氯酸钠液35ｍｌ混匀后敞开过夜，使CN一氧化成CO2和Ｎ2。

挥发后，再排入下水道。

注意事项
６．高丙种球蛋白血症、变性血红蛋白血症和白细胞特高的病例都可出现混浊，可于每升试剂中加氯化钠15g甚至50g防止混浊。

但高浓度有核红细胞所致混浊尚不能防止。

质量控制
1.氰化高铁血红蛋白参考液的纯度检查：
1）波峰540 nm,
波谷504nm；
2) A540/A504：1.59～1.63；
3）A710～800 <0.002；
质量控制
2、室内质量控制
将三种已知不同浓度的血红蛋白参考液每日用HiCN法测定一次，连续20天；将结果经统计学处理后，作质控图。

质量控制
3.室间质量控制
由临检中心发放质控血红蛋白液，各实验室分别测定其结果，经统计计算偏离指数、变异值后进行评价。

二、其他测定方法
（一）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）测定法
原理
除SHb外，血液中各种血红蛋白均可与十二烷基硫酸钠作用，生成SLS-Hb棕红色化合物，SLS-Hb最大吸收峰538nm，波谷在500nm。

由于其摩尔吸光系数尚未确定，不能直接用吸光度换算Hb浓度。

一般先用HiCN法标定新鲜血标本，再用来制备本法的标准曲线。

二、其他测定方法
（二）碱羟高铁血红素（AHD-575）法
原理
AHD试剂为非离子化去垢剂碱性溶液，能使血红素、血红蛋白及其衍生物
全部转化为一种稳定的碱性高铁血红素，在575nm处有一特征性的吸收峰。

（三）方法学评价
SLS-Hb法操作简便，呈色稳定，试剂中不含KCN，无公害，准确性和精确性好，但SLS质量差异较大，且试剂成分破坏白细胞，不能同时测定白细胞数。

AHD 试剂简单，不含有毒剂，呈色稳定，对光不敏感，室温中能长期保存。

可用氯化血红素作标准品，准确度、精密度较高。

但该法的反应产物的吸收峰位于575nm波长，自动分析仪的选定波长多为540nm，限制了此法在自动分析仪上的应用。

总结
比色分析的依据是郎伯—比尔定律
A1／A2＝C1／C2
NiCN法具有主要优点是：操作简便、结果稳定、试剂易保存、能测定除硫化血红蛋白（ＳＨｂ）以外的所有血红蛋白。

因而是Hb测定的参考方法。

总结
AHD-575法优点是ＡＨＤ试剂对光不敏感，放室温中能长期保存，基本无毒性。

血液与ＡＨＤ试剂混合后立即发生溶血，生成橄榄绿溶液色泽稳定。

作业
1.概括HiCN测定的注意事项
2.为何HiCN与AHD-575测定计算公式不同？
第四节红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义
一、参考区间
二、生理性变化
三、病理性变化
学习目标
1.说出红细胞计数和血红蛋白测定的参考值
2.简述红细胞计数和血红蛋白测定的生理变化
3.简述红细胞计数和血红蛋白测定的病理变化
复习旧课
红细胞的主要功能有哪些？
答案：
1.运输气体（O2、CO2）；
2.维持酸碱平衡；
3.运输类脂、蛋白、激素、维生素、碳水化合物；
4.免疫粘附。

新课学习
红细胞的主要成分是血红蛋白，在正常增况下，每个红细胞含有一定量的血红蛋白。

随着红细胞的增多或减少，血红蛋白含量也发生相应的变化，它们的临床意义基本相同。

在贫血时，由于病因不同，红细胞和血红蛋白降低的程度并非完全平行。

一、参考区间
血红蛋白（g/L）红细胞数（×1012/L）
成年男性131～172 4.09～5.74
成年女性113～151 3.68～5.13
新生儿180～190 5.2～6.4
婴儿110～120 4.0～4.3
儿童120～140 4.0～4.5
二、生理变化
1.年龄与性别的变化
二、生理变化
2.精神因素：红细胞及血红蛋白
3.剧烈的体育运动和劳动：红细胞及血红蛋白
4.气压因素：气压低则红细胞及血红蛋白
5.妊娠因素：红细胞及血红蛋白
三、病理变化
（一）红细胞和血红蛋白病理性减少
1.造血原料不足或利用障碍：见于缺铁性贫血；铁粒幼细胞性贫血；巨幼细胞性贫血等。

2.红细胞丢失过多：各种原因导致的急、慢性失血。

三、病理变化
3.红细胞寿命缩短：见于溶血性贫血。

4.促红细胞生成素（EPO）分泌减少：慢性肾疾病所致的贫血。

5. 造血功能障碍：见于再生障碍性贫血、白血病
三、病理变化
（二）红细胞和血红蛋白病理性增多
1．相对性增多血液浓缩，造成红细胞和血红蛋白浓度相对增高。

三、病理变化
2．绝对性增多指血浆容量不变，红细胞和血红蛋白的绝对值增加。

三、病理变化
（1）继发性红细胞生成增多：机体因长期缺氧，刺激促红细胞生成素分泌增多，使红细胞、血红蛋白代偿性增加，
（2）原发性红细胞生成增多：机体并不缺氧，无促红细胞生成素分泌增加而红细胞数量持续增多，见于真性红细胞增多症。

目标形成性检测与校正
1.细胞计数池结构下列哪项不对:
A.池内分九大格加盖片后深度为0.1毫米
B.每个大方格长宽为1毫米
C.每个白细胞计数大格分为16个中方格
D.中央大格分25个中方格盖片后每格体积0.04
E.中央大格分为400个小格
目标形成性检测与校正
2.缩小血细胞计数固有误差唯一的方法是:
A.充液前充分混匀
B.提高操作熟练程度
C.提高镜下识别能力
D.多进行此项练习
E.扩大计数范围
目标形成性检测与校正
3.HiCN转化液中KCN的作用:
A.溶血
B.氧化Hb为Hi
C.防腐
D.与Hi结合成HiCN
E.以上都不对
目标形成性检测与校正
4.指出与红细胞不符合的:
A.平均直径7.2 um
B.主要成分磷脂,水
C.成熟后无细胞核
D.寿命3--4月
E.具有免疫粘附性
目标形成性检测与校正
5.除哪项外,均可引起RBC,Hb相对增高:
A.反复腹泻
B.排汗过多
C.连续呕吐
D.骨髓功能亢进
E.大面积烧伤
目标形成性检测与校正
6.一种Hb衍生物是棕红色,在540nm波长处有较宽的吸光带,它是:
A.Hi
B.Hbred
C.HbCO
D.HbO2
E.HiCN
目标形成性检测与校正
7.引起R B C和H b代偿性增高的疾病:
A.肺气肿
B.反复腹泻
C.大面积烧伤
D.真红
E.妊娠期
目标形成性检测与校正
8.某人细胞内铁含量为48.58m g/d L,其H b含量应为:
A.140g/L
B.130g/L
C.120g/L
D.110g/L
E.100g/L
目标形成性检测与校正
9.Hb属于:
A.白蛋白
B.球蛋白
C.结合蛋白
D.纤维蛋白
E.酸性蛋白
目标形成性检测与校正
10.不符合正常成熟红细胞形态特征是:
A.瑞特染色后呈粉红色
B.两面微凹的圆盘形
C.平均直径7.2µ
D.平均厚度2µ
E.以上都不是
目标形成性检测与校正
11.不能转化为HiCN的Hb的衍生物是:
A.HbO2
B.硫化血红蛋白
C.Hbred
D.Hi
E.HbCO
目标形成性检测与校正
12.HICN测定,下述哪项有错:
A.波长为540±1nm
B.转化液透明淡黄色
C.将外血稀释251倍
D.氰化钾将Fe++-->Fe+++
E.HbO2可转化为HiCN
目标形成性检测与校正
13.对于HiCN的描述,有错的是:
A.为Hb衍生物
B.呈棕红色
C.吸收峰在540nm
D.稳定性较差
E.只有一较宽的吸收光带
目标形成性检测与校正
14.下列哪种试剂可用于红细胞稀释液:
A.碳酸铵
B.碳酸氢钠
C.氯化汞
D.铁氰化钾
E.以上都不行
目标形成性检测与校正
15.采用HiCN参考标准液是因为:
A.仪器的差异
B.技术误差
C.操作方便
D.快速
E.以上均不对
目标形成性检测与校正
16.对Hb的描述,除哪一条件,均正确:
A.由4条多肽链组成
B.为结合蛋白质
C.含有4个Fe+++原子
D.每克含铁3.47mg
E.每克结合氧1.39ml
目标形成性检测与校正
17.对于转化液的要求,有错的是:
A.淡黄透明
B.贮存于棕色瓶
C.不能偏碱
D.不宜用塑料瓶装
E.变深后不宜再用
目标形成性检测与校正
18.下述哪种试剂不能用于HiCN转化液:
A.亚铁氰化钾
B.氰化钾
C.磷酸二氢钾
D.Triton X-100
E.O-P乳化剂
目标形成性检测与校正
19.关于RBC正确的是:
A.只需将血液稀释
B.通常稀释20倍
C.在镜下计数四角大格
D.报告: △.△△×1012/L
E.计数域误差较WBC大
目标形成性检测与校正
20.血细胞计数池充液后,数RBC用的中方格体积是:
A. 0.4μl
B. 0.1μl
C. 0.04μl
D. 0.01μl
E. 0.004μl
目标形成性检测与校正
21.RBC液(显微镜计数法)中最主要成分:
A.氯化钠
B.硫酸钠
D.氯化低汞
E.碳酸钠
目标形成性检测与校正
22.除哪一条件,均可使RBC的结果偏高:
A.混入酵母菌
B.白细胞过高
C.管尖外血液未擦净
D.稀释液蒸发
E.血液凝固
目标形成性检测与校正
23.HiCN正确的是:
A. 高浓度有核红细胞混浊可加NaCl防止
B. OP乳化剂可代替TritonX-100
C. 转化液不能偏硷
D. 转化液用棕色瓶保存
再见！
第五节网织红细胞计数
一、网织红细胞概述
二、网织红细胞显微镜计数
学习目标
1.描述网织红细胞的形态结构
2.叙述网织红细胞的计数方法和注意事项
3.阐述网织红细胞计数的临床意义
一、网织红细胞概述
（一）概念
网织红细胞：是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后呈现蓝色点状或网状结构。

活体染色：是指细胞未经固定，在保持细胞生物活性的情况下加染料进行染色
（二）分型及形态特征
Ⅰ型：丝球型，无核红细胞中央的嗜碱性物质交织成密集的丝团状。

（二）分型及形态特征
Ⅱ型：网型，无核红细胞中央的丝团状结构开始松散，呈疏松网眼状结构排列。

（二）分型及形态特征
Ⅲ型：破网型，网织状结构开始减少，形成残破不全的网状。

（二）分型及形态特征
Ⅳ型：点粒型，只有少数蓝色点状颗粒（两个以上），或极小的网状残余，散布于胞质一侧。

网织红细胞
❿I型丝球型
❿Ⅱ型网型
❿Ⅲ型破网型
❿IV型颗粒型
经瑞特染色复染的网织红细胞形态
二、网织红细胞显微镜计数
原理
煌焦油蓝、新亚甲蓝和天青等染料都是杂蒽的衍生物，虽然取代基不同，但都含有氨基，在水溶液中呈弱碱性，带阳电荷，可与酸性基团发生电偶合，特别是与核酸分子中的磷酸基结合，使ＲＮＡ胶体的电位发生变化，分子间排斥力下降，胶体分散力降低而凝集成蓝色颗粒。

二、网织红细胞显微镜计数
试剂
1.10g/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液
2.10g/L新亚甲蓝ACD溶液
3.新亚甲蓝染液
试剂
１．煌焦油蓝溶液
煌焦油蓝1.0g
枸椽酸钠0.4g
氯化钠0.85g
双蒸水加至100ｍｌ
充分振荡溶解，过滤后备用。

试剂
２．新亚甲蓝溶液
新亚甲蓝1ｇ
枸椽酸盐生理盐水（30g/Ｌ枸椽酸钠溶液１份，9ｇ/Ｌ氯化钠溶液４份，混合而成）100ｍｌ
待染料溶解后过滤备用。

试剂
３.天青Ｂ溶液
将新亚甲蓝1ｇ改为天青Ｂ1ｇ，
其余与新亚甲蓝溶液配制相同。

二、网织红细胞显微镜计数
操作
加试剂：2滴
↓
外周血：2滴
↓
染色：混匀，37℃15～20min
↓
制薄血片：取1滴制片，干燥后镜检
操作
１.试管法
（１）于小试管中加煌焦油蓝溶液2滴～3滴，加外周血2滴～3滴，混匀，塞紧管口，室温置15min。

（２）取上述混匀的细胞悬液1滴，推制薄血片。

操作
（３）低倍镜选择细胞分布均匀、着色清晰的部位，于目镜内加一圆形硬纸，中央开一约４ｍｍ×４ｍｍ方孔，油镜计数1000个红细胞（包括网织红细胞）中网织红细胞数，除以1000，即得网织红细胞分数数（×10－3）。

二、网织红细胞显微镜计数
1.直接计数法
油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞→计算:
2.米勒窥盘法
窥盘为一直径19mm，厚1mm的圆形玻片，玻片上用微细刻线划出大小两个正方形格子，图中大方格B的面积是小方格A的9倍。

将Ｍiller窥盘置于目镜内，油镜计数大方格内的网织红细胞数，同时计数小方格内的红细胞数。

然后移动视野进行同样的观察计数。

对压线的红细胞采取统一的计数原则：凡压小方格下线、右线及右下角的一律不计数；凡压上线、左线及左上角的一律计数。

凡压大方格下线、右线及右下角的网织红细胞一律不计数；凡压上线、左线及左上角的一律计数。

注意
由于本法是用1/9面积推断整个大方格内的红细胞数，所以细胞分布必须很均匀，否则会得出错误的结果。

判断方法及标准如下：
2.米勒窥盘法
当小方格内计数的红细胞达到≥111时，即相当于至少观察了1000个红细胞，计录在此过程中计数到的所有网织红细胞数。

请您练习
计数10个视野小方格中红细胞数是120个，同时计数大方格中网织红细胞总数为16个，如何报告结果？
解：
网织红细胞%＝16/（120×9）×100
＝1.5%
请您练习
计数10个视野小方格中红细胞数是102个，同时计数大方格中网织红细胞总数为15个，请报告网红结果？
答案：
网织红细胞%＝15/（102×9）×100
＝1.63%
1.网织红细胞相对值：百分率或分数数。

2.网织红细胞绝对值:
红细胞浓度数(1012/L)×网织红细胞百分数
3.网织红细胞生成指数（RPI）:
网织红细胞成熟时间与红细胞比积的关系
___________________________________红细胞比容（L/L）网红成熟时间（天）-------------------------------------------
0.45 1
0.35 1.5
0.25 2
0.15 2.5
-------------------------------------------
请您练习
己知一患者网红分数数为0.045，红细胞比积为0.35，求网红生成指数是多少？
解：查表得红细胞比积为0.35时，网红成熟时间为1.5天，代入公式
答案：
RPI=0.045/1.5×0.35/0.45
=0.023
注意事项
1.静脉血标本在4小时内完成计数。

2.需活体染色。

3.血液与染液的比1：1。

注意事项
4.染色时间要充足，温度应控制在37℃。

5.涂片应薄而均匀。

6.网织红细胞偏低时可增加计数至2000～3000个。

7.瑞特染液复染或二甲苯擦血膜可使结果偏低。

临床意义
１.正常参考值
网织红细胞百分数：
成人：0.005～0.015
新生儿：0.03～0.06
儿童：0.005～0.015
网织红细胞绝对值：
成人：（24～84）×109/L
临床意义
2. 临床应用
（1）判断骨髓红细胞系增生情况
网织红细胞计数增加：增生性贫血。

网织红细胞减少：再障、白血病等。

（2）观察贫血疗效的指标
（3）监测骨髓移植术后造血功能
（4）监测肿瘤放、化疗后骨髓抑制及其恢复情况
网织红细胞计数增加
表示骨髓红细胞系统增生旺盛，多见于各种增生性贫血。

急性溶血性贫血时，网织红细胞显著升高，其数值可达20％或更高。

急性失血性贫血也较明显增高，缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血常仅轻度增高。

骨髓受白血病、癌肿等浸润时也呈不规则轻度增加，此系病理刺激所致，并不反映骨髓造血机能。

网织红细胞减少
表示骨髓造血机能减退，常见于再生障碍性贫血，某些溶血性贫血发生再生障碍危象时可一过性明显减少。

观察贫血疗效
缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血用铁剂及维生素Ｂ12、叶酸治疗后，网红迅速增加，１周左右达到高峰。

由于网红增加先于红细胞和血红蛋白增加，可用于疗效评价。

作为骨髓造血功能恢复的敏感指标
骨髓移植和造血系统恶性肿瘤化疗后，血小板、中性粒细胞、白细胞和网红计数４项指标在移植后恢复的天数以网红计数出现的最早（13.7天），可作为造血。