免疫组织化学技术

第十三章免疫组织化学技术

第一部分目的要求和教学内容

目的要求：掌握金免疫测定的方法，免疫金银染色的原理、方法，熟悉胶体金和免疫金的特性和制备。

一、免疫胶体金标记原理。

二、免疫胶体金的制备原则：标记要点和影响因素，胶体金标记蛋白的纯化和鉴

定。

三、免疫金（银）染色法：滤纸模型的免疫金（银）染色应用，免疫金（银）

染色技术类型，组织切片的免疫金（银）染色法。

第二部分测试题

一、选择题

（一）A1 型题(标准型)

1 .PAP复合物中的酶是

A.碱性磷酸酶

B.葡萄糖氧化酶

C.辣根过氧化物酶

D.胃蛋白酶

E.胶原酶

2.PAP的特点是几个抗酶抗体和3 个过氧化物酶分子组成复合物，结构非常稳定

A.1

B.2

C.3

D.4

E.6

3.ABC法中的“桥”是指

A.第一抗体

B. 第二抗体

C. 第三抗体

D.亲和素

E.链霉素亲和素

4.双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记A 抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记B 抗体，呈什么颜色

A.黄绿色，橘红色

B.橘红色，黄绿色

C.红色，淡黄色

D.淡黄色，红色

E.橙黄色，浅绿色

5. 荧光免疫间接法比直接法荧光增强多少倍，敏感性提高多少倍

A.1—2

B.2—4

C.3—6

D.4—8

E.5—10

6. 胶体金标记蛋白时，待标记蛋白的实际用量是在稳定1ml 胶体金所需蛋白基础上再增加多少

A. 5—10%

B. 10—20%

C. 20—30%

D. 30—40%

E. 40—50%

7.铁蛋白是一种含铁多少，相对分子量为650～900KD 的球形蛋白

A.15%

B.20%

C.25%

D.30%

E.35%

8.下列哪种方法制备的胶体金是红色

A.枸橼酸三钠

B.白磷

C.维生素C

D.乙醇-超声波

E.硼酸钠

9.免疫组化技术的关键步骤是

A.标本处理

B.抗体的处理与保存

C.设立对照试验

D.结果判断

E.免疫染色

10.免疫组化技术的首要试剂是

A.抗原

B.标记物

C.固定剂

D.抗体

E.洗涤液

二、填空题

1.用丙酮做固定剂的抗原是（）；用1%聚甲醛做固定剂的抗原是（）；用10%甲

醛做固定剂的抗原是（）；用95%乙醇做固定剂的抗原是（）；用四氯化磺做固

定剂的抗原是（）。

2.免疫染色对特殊标本的进一步处理常用（）和（）法。

3.免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是（）、（）和

（）。

4.酶免疫组化技术中最常用的酶有（）、（）及（）。

5.免疫电镜标本的制备主要有（）、（）和（）三种。

6.免疫组化中最常用的制片方法是（）和（）。

三、名词解释题

1.胶体金

2.免疫组化技术

四、简答题

1.何谓免疫电镜技术？

2.免疫组化标本固定时，好的固定剂应满足哪些要求？

3.简述荧光免疫组化技术直接法的原理。

4.简述免疫胶体金标记的原理。

五、论述题

试述酶免疫组化技术的原理及其应用。

标准答案

一、选择题（标准型）

1. C 2 B 3 D 4 B 5 B 6 B 7 C 8 A 9 E 10 D

二、填空题

1 免疫球蛋白、激素、类脂质、蛋白质、酶。

2.冰冻切片，石蜡切片

3.胞质型细胞核型，细胞膜表面型

4.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶葡萄糖氧化酶

5.非包埋法免疫染色，包埋前免疫染色，包埋后免疫染色

6.蛋白酶消化法，非特异吸附法

三、名词解释题

1.免疫组化技术是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，借助可见的标记物，对相应抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检验方法。

2.胶体金是氯金酸在还原剂如白磷、维生素C枸橼酸纳和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。

四、简答题

1.免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高度精确、灵敏的技术。

2.答：1）能快速固定抗原

2）防止抗原物质扩散

3）固定后的抗原能被抗体识别，不影响抗原抗体反应。

3.答：将荧光素标记的已知抗体（或抗原）与切片（印片）中相应抗原（或抗体）直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原（或抗体）。

4.答：胶体金颗粒标记蛋白质的原理是金颗粒表面负电荷与蛋白质正电荷之间非共价键的静电引力互相吸引，当达到范登华引力半径范围之内时，蛋白质与金颗粒表面形成牢固结合。

五、论述题

酶免疫组化技术的原理：

酶免疫组化技术是利用酶标记已知抗体（或抗原），然后与组织标本中相应抗原（或抗体）在一定条件下相互结合形成带酶分子的复合物，酶遇到底物时，能催化底物水解，或氧化或还原，产生有色的不溶性产物，出现显色反应，在显微镜下进行细胞与组织表面或内部某种