间接抗人球蛋白试验(IAT)操作规程
手工抗人球蛋白试验试管法标准操作规程
手工抗人球蛋白试验试管法标准操作规程(一)检验目的建立手工抗人球蛋白试验的标准操作规程，确保手工抗人球蛋白试验的规范性和准确性。
(二)检验原理血液中一些IgG类抗体或补体C。
(主要是免疫性抗体)与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗IgG或抗C，抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该试验称之为抗人球蛋白试验，也称Coombs Test。
包括直接抗人球蛋白试验(DAT)和间接抗人球蛋白试验(1AT)。
(三)适用范围1.DAT用于检测红细胞体内致敏情况(1)新生儿溶血病的诊断。
(2)免疫性溶血性贫血的诊断。
(3)研究药物致敏的红细胞。
(4)溶血性输血反应的研究。
2.IAT用于检测体外致敏红细胞的抗体(1)IgG类不规则抗体筛查与鉴定。
(2)交叉配血试验。
(3)检查用其他方法不能查明的红细胞抗原。
(4)用于一些特殊研究，如混合凝集反应、白细胞抗体及血小板抗体检测试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×12mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆抗IgG、单克隆抗C3d、抗IgG+C3d)、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)样本要求1.患者标本EDTA-K3或EDTA-K2抗凝全血≥3m1，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
2.供者标本枸橼酸盐抗凝，全血量3-5ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
(七)校准步骤参照血清学专用离心机使用说明书中的校准要求执行。
(八)操作程序1.直接抗人球蛋白试验(1)取2支洁净试管分别加入抗IgG+C3d(可根据需要使用多特异性抗球蛋白)1滴，其中1支试管加1滴受检者3次洗涤后的3％～5％红细胞盐水悬液，另1支试管加2滴正常人AB型血清和1滴3％～5％正常人O型红细胞悬液作为阴性对照，分别混匀。
最新间接抗人球蛋白试验标准操作规程名师精编资料汇编
间接抗人球蛋白试验标准操作规程(微柱卡式法)一、目的为规范抗人球蛋白（Coombs 试验）的技术操作，保证试验的结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。
二、使用范围适用于输血科进行抗人球蛋白试验的操作。
三、职责输血科技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。
四、原理利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。
五、试剂及材料(一)试剂：抗人球蛋白检测卡（西班牙 Diagnostic Grifols,S.A公司生产）、IgG 抗D、正常人AB血清(二)设备：戴安娜专用离心机（型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器、离心机、试管等六、标本要求：(一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml,在3000r/min条件下离心5分钟备用。
(二)标本保存：血液样本必须密封，2-8℃保存7天。
七、操作步骤(一)标本及其他试剂处理：1、实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于戴安娜专用离心机离心9分钟左右，取出待用2、离心标本取血清备用（或准备已知抗体的血清）3、配制1%已知抗原红细胞悬液（或1%受检红细胞悬液）4、1%D阳性红细胞：任选3个O型D阳性红细胞混合，配成1%红细胞悬液(二) 在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名、病房床号、阴性和阳性对照，撕掉卡上的封条(三)按下表将各种反应物加入相应反应孔中。
间接抗人球蛋白试验操作步骤反应物待测孔阳性对照孔阴性对照孔血清（已知或受检）25ul －－1%红细胞悬液（受检或已知）50ul －－IgG抗D血清－25ul －1%D阳性O型红细胞悬液－50ul 50ulAB型血清－－25ul(四) 将卡放入37℃孵育箱15分钟，移出放入离心机9分钟，取出观察结果。
抗人球蛋白试验标准操作规程
抗人球蛋白试验标准操作规程1.目的为规范抗人球蛋白试验（Cooms试验）的技术操作，保证试验结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。
2.适用范围适用于输血科（血库）进行抗人球蛋白试验。
3.职责输血科（血库）技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。
4.原理利用抗人球蛋白试剂可与致敏在红细胞上的抗体和（或）补体结合，使红细胞出血肉眼可见的凝集的原理，检测红细胞是否被抗体和（或）补体致敏。
5.所需设备和试剂设备普通离心机，血型血清学专用离心机，电热恒温水浴箱，普通显微镜。
试剂抗人球蛋白试剂（多特异性或单特异性），IgG抗-D试剂，AB型血清（红细胞不规则抗体筛选阴性），10%O型、RhD阳性红细胞悬液。
6.检测环境条件室温应保持在18-27℃，湿度应保持30%-70%。
7.步骤与方法7.1抗人球蛋白试验阴、阳性对照及DAT阳性红细胞的制备7.1.1抗人球蛋白试验阴性对照：取3%O型、RhD阳性红细胞悬液50ｕl,加入AB型血清（红细胞不规则抗体筛选阴性）100ｕl，37℃孵育30min，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min后镜检应无凝集。
7.1.2 抗人球蛋白试验阳性对照及DAT阳性红细胞的制备：取10%O型、RhD阳性红细胞悬液100ｕl，加入IgG抗-D试剂600ｕl，37℃孵育30min，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入生理盐水500ｕl，配成浓度约为2%的红细胞悬浮液备用，取该红细胞悬液50ｕl加抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min后肉眼观察红细胞应显凝集（阳性对照）。
配制的2%红细胞悬液即为DAT阳性红细胞悬液。
7.2 DAT步骤试验管取受检者3%红细胞悬液50ｕl，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min，肉眼观察有无凝集，若不见凝集，以显微镜观察，并记录结果。
抗人球蛋白实验步骤
抗人球蛋白实验步骤
抗人球蛋白实验是一种常用的免疫学实验方法，以下是一种常见的实验步骤：
1. 准备实验材料：包括待检样本、抗人球蛋白抗体、标记有荧光物质的二抗、缓冲液和试管等。
2. 样本处理：待检样本（如血清、尿液等）需要进行预处理，例如离心等操作，以提取样本中的球蛋白。
3. 制备工作液：根据实验要求和所使用的抗体种类，配制合适的缓冲液。
4. 样本和标准品的加样：将待检样本和不同浓度的标准品加入试管中。
5. 加入抗体：向每个试管中加入特异性的抗人球蛋白抗体，与样本中的球蛋白结合形成免疫复合物。
6. 反应：将试管放置在适当的温度和时间下，使抗体与球蛋白反应。
7. 洗涤：用适当的缓冲液洗涤掉未结合的抗体和其他杂质。
8. 加入二抗：加入标记有荧光物质的二抗，与抗人球蛋白抗体结合。
9. 再次洗涤：用缓冲液洗涤去除未结合的二抗。
10. 测定：使用荧光分析仪等设备进行测定，检测样本中荧光强度的变化。
11. 数据分析：根据测定结果，计算出样品中球蛋白的浓度。
以上是抗人球蛋白实验的一般步骤，不同实验目的和实验方法可能会有所不同，具体操作的详细步骤应根据具体实验方案进行。
间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序
间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序1. 试验原理和目的将抗球蛋白血清加入巳经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝集。
指导间接抗人球蛋白试验（IAT）。
2. 样本收集和贮存2.1 标本采集：采集静脉血（患者与AB型血各3～5ml，O型血2ml）。
2.2 标本的抗凝与存放时间：O型血EDTA.K2抗凝，余不抗凝，立即进行实验。
2.3 拒收标本规定：拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。
2.4储存条件及时间：采完标本立即送检，标本禁忌放入4℃～8℃冰箱中，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。
血清标本不能含有纤维蛋白，否则出现假阳性反应。
已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。
3. 试剂3.1抗球蛋白血清（广谱及单价）本科使用上海血液生物医药有限责任公司的抗IgG、C3d（多特异性），抗IgG，抗C3d。
3.2 受检血清。
3.3 5% O型红细胞悬液。
3.4 不完全抗D血清。
3.5 AB型血清。
3.6 5% D阳性红细胞悬液。
3.7生理盐水。
4. 仪器4.1 日本OLYMPUS CX31普通光学显微镜。
4.2 SSW型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5. 操作步骤5.1 取试管3支，标明受检管、阳性对照管及阴性对照管。
5.2 按下表将各反应物加入相应试管内。
反应物受检者阳性对照阴性对照受检血清 2滴 - -5% O型红细胞悬液 1滴 - -不完全抗D血清 - 2滴 -AB型血清 - - 2滴5%D阳性红细胞悬液- 1滴1滴5.3 混匀，离心，检查溶血或凝集。
置37℃水浴1h，离心，检查溶血或凝集。
用生理盐水洗涤3次（3000rpm，1分钟）。
末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。
每管各留红细胞悬液1滴。
5.4 每管各加抗球蛋白血清2滴，混匀，3000r/min离心15秒，观察结果。
16 间接抗人球蛋白微柱凝胶法操作规程---作业指导书
1.1 微柱凝胶试剂卡的准备观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，将卡放置平衡至室温，使用前置离心机3000r/min 1 min离心。
1.2 检测标本的准备
1.2.1 待检标本的准备：将待检全血标本，离心分离红细胞与血浆（血清），取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
1.2.2 红细胞悬液的制备：将待检制备1%红细胞低离子介质或生理盐水悬液。
操作步骤
2.1 将准备好的抗人球蛋白检测卡做好标记。
2.2 撕开卡封膜,于反应腔中侧待检1% 红细胞、悬液50μl，加待检血浆（血清）50
2.3 将加样后的检测卡，置37℃中孵育15分钟。
2.4 将检测卡取出，置离心机1000r/min 2min， 1800r/min 3 min离心
2.5 取出，按下表判断：
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
抗人球蛋白试验Coomb
抗人球蛋白试验Coomb`s1.原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，则与红细胞上粘附的IgG相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋白试验（ＤＡＴ）。
患者血清中存在游离的自身抗体，则可用Rno(D)阳性的Ｏ型红细胞加以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS 作用而发生凝集反应，此即为间接抗人球蛋白试验（ＩＡＴ）。
2.试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产）。
3.操作：3.1在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12个小格。
3.2将各种抗人球和C3分别作倍比稀释（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格内，做好标记。
3.3每孔加入洗涤后5％被检RBC悬液10ul。
3.4混匀放密闭保湿盒内，37度保温30分钟；（每隔10秒混匀一次）于镜下作效价和分值测定。
4.结果：（＋－）：2分反应液中有3－5个小凝块（4个RBC以上紧密聚集）。
（＋）：4分反应液中有6－10个小凝块游离RBC约3／4。
（＋＋）：6分反应液中有11－30个中等大小凝块游离RBC约1／2。
（＋＋＋）：8分反应液中有充满凝块游离RBC约1／4。
（＋＋＋＋）：10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。
5.正常参考值：阴性。
6.注意事项：6.1患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血清量的４０００倍以上。
6.2每次试验应作阴阳对照。
6.3对研究温抗体型AIHA而言，应选择单抗特异类（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不仅诊断所需，且可将温型抗体ＡＩＨＡ进一步分型。
6.4血液用ＥＤＴＡ抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补体结合，致出现假阳性。
7.临床意义：7.1温抗体型导致的AIHA,DAT,强阳性，IAT多为阴性，但亦可阳性。
抗人球蛋白试验操作规程
抗人球蛋白试验操作规程临床输血质量管理体系文件名称：抗人球蛋白试验标准操作规程持有部门：输血科医务科制订者：××××××制订日期：××年××月××日执行日期：××年××月××日审核者：×××审核日期：××年××月××日版本/修改状态：A/0技术性规程文件编号：HZYY-CBT/SOP 003核准者：×××核准日期：××年××月××日文件页数:共3页文件性质：□普通□限制（仅限本院范围，未经授权）抗人球蛋白试验操作规程抗人球蛋白试验（又称Coombs试验）分为直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验，直接抗球蛋白试验是直接把抗球蛋白加入患者的红细胞悬液中，若红细胞已被抗体致敏便出现凝集，用以检测红细胞表面结合的抗体，如新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血的检查。
间接抗球蛋白试验是将已知（未知）抗原的红细胞和未知（已知）抗体的血清混合，然后加入抗球蛋白血清，若抗原抗体相对应，即出现可见的红细胞凝集。
用以检测游离于血清中的抗体，亦可用已知抗原的红细胞检测血清中的相应抗体效价，输血前的交叉配血或不相容输血后的抗体测定。
抗球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测定补体组分（C3C49.1目的标准抗球蛋白实验的技术操作，包管实验成效的准确性，为临床举行诊断及治疗供给依据。
9.29.39.49.5职责输血科(血库)技术人员负责抗球蛋白试验。
合用范围合用于临床须举行抗球蛋白实验的各种血标本。
原理所需材料和设备9.5.1材料抗球蛋白试剂、IgG抗-D抗体、AB型血清、3%Rh（D）阳性红细胞悬液、患者血标本。
医院间接抗人球蛋白试验(IAT)标准操作规程
间接抗人球蛋白试验（IAT）标准操作规程
1.目的用于检测红细胞在体外是否被致敏
2.适用范围常用于交叉配血、血型鉴定、抗体筛选和鉴定。
3.所需仪器和材料离心机、水浴箱、抗球蛋白试剂等。
4.执行标准《临床检验操作规程》。
5.原理红细胞在体外与相应的抗体和(或)补体致敏后，将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面被结合的抗体球蛋白与抗球蛋白试剂发生特异性反应，使红细胞发生凝集而判断出红细胞表面是否含有被致敏的抗体或补体。
6.操作程序
⑴取小试管2支，分别标明主侧和次侧，主侧管加受血者血清0.1ml 和供血者5%红细胞悬液0.1ml，次侧管加供血者血清0.1ml和受血者5%红细胞悬液0.1ml.
⑵混匀后，置37℃孵育45-60分钟（致敏），取出后，两管用生理盐水洗涤红细胞3-4次，每次离心后倾干上清液。
⑶加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀，1000r/min,离心1分钟，观察结果。
⑷阳性对照:2%抗-D抗体致敏的Rh阳性红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,阴性对照：5% O型红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,盐水对照（2管）:供血者5%红细胞盐水悬液0.05ml 加等渗0.05ml；受血者5%红细胞盐水悬液0.05ml加等渗盐水
0.05ml.
⑸结果判断：阳性对照管凝集，阴性、盐水对照管不凝集，主侧、次侧配血管都不凝集也无溶血，表示无输血禁忌，可以输血。
主、次测有一测有凝集或溶血，表示有输血禁忌，不能输血。
7.注意事项配血标本必须用EDTA抗凝，避免血液离体后被补体致敏导致假阳性；孵育后受血者和献血者的红细胞应用足量生理盐水洗
涤3-4次，每次倾倒盐水应沥干。
15-间接抗人球蛋白试管法操作规程---作业指导书
操作人员
3.1.1负责对检测标本进行Rh(D)血型鉴定的具体操作和编写实验报告单
仪器管理人员
3.2.1负责相关仪器的日常保养
3.2.2负责相关仪器的维护
质量监督员
负责操作过程监督，仪器室内质量控制
科室主任或授权者负责检测报告审核
实验原理
间接抗人球蛋白实验是检测红细胞在体外致敏的方法。
可用已知抗原红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体，或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应抗原，红细胞与血清在体外孵育后成为致敏红细胞，与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。
常用于血型鉴定，抗体的检出和鉴定，输血前交叉配血实验以及其他的特殊研
不符合要求，外包装明显污染；标本有发生污染、溶血、脂血等情况。
试管法
6.2.1取小试管3支，分别标记被检者、阳性对照、阴性对照，按下表将各反应物加入相应试管中。
间接抗人球蛋白实验
反应物被检管阳性对照管阴性对照管
被检者血清1 2滴——
5%已知抗原的红细胞悬液2 1滴——
不完全抗D血清— 2滴—
5% Rh(D)阳性红细胞悬液— 1滴 1滴
AB型血清—— 2滴
注：如检查特殊红细胞抗原，则将1改为已知抗体的血清，将2改为5%被检者红细胞悬液。
6.2.2混匀，置37℃水浴30min
6.2.3取出试管，以1000g离心1min，弃去上清液，将管底红细胞摇匀，用生理盐水洗涤。
抗球蛋白试验标准操作规程
抗球蛋白试验标准操作规程1.检验目的保证抗球蛋白试验符合要求。
2.检验方法本试验包括“直接抗球蛋白”和“间接抗球蛋白”试验。
2.1直接抗球蛋白试验2.1.1 原理患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。
但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接红细胞，仅使红细胞处于致敏状态。
加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸附的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见的凝集。
这种直接检测体内被抗体或(和)补体致敏红细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
直接抗球蛋白试验主要用于检查受检红细胞是否在体内已被抗体或者补体致敏，用于新生儿溶血病，溶血性输血反应，自身免疫溶血性贫血，药物诱导溶血性贫血等检查。
2.1.2.标本EDTA抗凝的静脉血2.0ml。
2.1.3.试剂多特异性抗球蛋白试剂、抗IgG、抗C3d；2.1.4.器材离心机、小试管、刻度吸管或加样器（50～200µl）、37℃水浴箱等。
2.1.5.操作步骤2.1.5.1.取3支试管分别加入多特异性抗球蛋白试剂、抗IgG、抗C3d试剂各1滴，然后再加1滴受检者三洗后的2-3%红细胞悬液，混匀。
2.1.5.2. 各反应管以3000r/min离心10秒，持一定的角度轻轻地摇动试管直到松动所有细胞。
先用肉眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察。
2.1.5.3.对照：用IgG致敏细胞（抗D血清加Rh阳性细胞，37℃水浴30分钟，洗3次配成3%红细胞盐水悬液）作为多抗及单抗IgG的阳性对照，阴性对照用正常人AB型血清与正常人“O”型红细胞反应。
2.1.6.结果判断先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无凝集，阳性对照管出现＋＋＋～＋＋＋＋凝集，说明检测管结果可信。
如被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。
如实验结果阴性要加试剂对照细胞检查，对照阴性实验结果可靠。
2.1.7．注意事项2.1.7.1.标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞中丢失。
间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序
间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序1. 试验原理和目的将抗球蛋白血清加入巳经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝集。
指导间接抗人球蛋白试验（IAT）。
2. 样本收集和贮存2.1 标本采集：采集静脉血（患者与AB型血各3～5ml，O型血2ml）。
2.2 标本的抗凝与存放时间：O型血EDTA.K2抗凝，余不抗凝，立即进行实验。
2.3 拒收标本规定：拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。
2.4储存条件及时间：采完标本立即送检，标本禁忌放入4℃～8℃冰箱中，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。
血清标本不能含有纤维蛋白，否则出现假阳性反应。
已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。
3. 试剂3.1抗球蛋白血清（广谱及单价）本科使用上海血液生物医药有限责任公司的抗IgG、C3d（多特异性），抗IgG，抗C3d。
3.2 受检血清。
3.3 5% O型红细胞悬液。
3.4 不完全抗D血清。
3.5 AB型血清。
3.6 5% D阳性红细胞悬液。
3.7生理盐水。
4. 仪器4.1 日本OLYMPUS CX31普通光学显微镜。
4.2 SSW型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5. 操作步骤5.1 取试管3支，标明受检管、阳性对照管及阴性对照管。
5.2 按下表将各反应物加入相应试管内。
反应物受检者阳性对照阴性对照受检血清 2滴 - -5% O型红细胞悬液 1滴 - -不完全抗D血清 - 2滴 -AB型血清 - - 2滴5%D阳性红细胞悬液- 1滴1滴5.3 混匀，离心，检查溶血或凝集。
置37℃水浴1h，离心，检查溶血或凝集。
用生理盐水洗涤3次（3000rpm，1分钟）。
末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。
每管各留红细胞悬液1滴。
5.4 每管各加抗球蛋白血清2滴，混匀，3000r/min离心15秒，观察结果。
间接抗人球蛋白试验操作步骤
间接抗人球蛋白试验操作步骤嘿，朋友们！今天咱来聊聊间接抗人球蛋白试验的那些事儿，这可真是个有趣又重要的操作呢！先说说准备工作吧，就好比你要去打仗，不得先把武器弹药准备好呀！咱得准备好各种试剂，像抗人球蛋白试剂，这可是关键的“武器”呢。
还有各种实验器具，一个都不能少。
然后呢，就开始采集样本啦！这就像是去果园摘果子，得挑好的摘呀！把血液样本小心翼翼地采集好，可别弄洒了哟。
接下来，把样本处理一下，离心啦什么的，让血清和细胞分离开来。
这就好像把混合物分分类，把有用的部分挑出来。
再之后，就到了关键步骤啦！把处理好的血清和红细胞啥的混合在一起，让它们亲密接触一下。
这就跟两个人见面握手一样，看看会不会有啥反应。
等它们“交流”一会儿后，再加入那神奇的抗人球蛋白试剂。
这试剂就像是个裁判，来评判它们之间的“关系”呢。
然后再观察呀，看看有没有凝集反应。
这就像在找宝藏一样，瞪大眼睛仔细瞧。
要是有凝集，那可就有情况啦！要是没有，也别着急，再仔细瞅瞅。
哎呀，你说这间接抗人球蛋白试验是不是很像一场奇妙的冒险呀！每一步都得小心翼翼，又充满了期待。
就像你走在一条小路上，不知道前面会有什么惊喜或者小麻烦等着你。
咱做这个试验可不能马虎，就跟你做饭不能乱放调料一样，一步错可能就全错啦！所以得认真对待，每一个细节都要注意到。
你想想，要是因为咱的不小心，得出了错误的结果，那不是耽误事儿嘛！这可关系到病人的诊断和治疗呢，责任重大呀！所以呀，朋友们，做间接抗人球蛋白试验的时候，一定要打起十二分的精神，把每一步都做好，让结果准确可靠。
这样咱才能给医生提供有力的帮助，让病人能得到及时准确的治疗。
反正我觉得吧，这间接抗人球蛋白试验虽然有点复杂，但只要咱认真学，认真做，就一定能做好！大家加油吧！。
不规则抗体筛检操作作业指导书
不规则抗体筛查实际操作作业指导1.目的用于检测血浆中是否存在抗体（IAT）2.原理血液中一些IgG类抗体或补体C3（主要是免疫性抗体）与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见凝集反应，但在加入抗IgG或抗C3抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该实验称为抗人球蛋白试验（Coomb’s Test）。
包括直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。
直接抗人球蛋白试验用于检测红细胞是否被抗体致敏，间接抗人球蛋白试验用于检测血浆中是否存在抗体。
3.样品3.1样品类型：血浆或血清3.2患者准备：应避免高脂食物或未知药物影响，可能的情况下，在大量用药前采集标本3.3容器和添加剂类型：EDTA-K2抗凝血3ml～5ml，在低速离心机1000g条件下离心5min，离心后应无溶血、无凝块、无明显乳糜。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血，5ml～10ml全血分离得到的血清也可以4.环境和安全控制4.1实验环境（1）环境温度：18℃～30℃（2）环境相对湿度：15%～80%RH（无冷凝）（3）实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀、防磁与屏蔽等方面的环境条件应符合检验项目和检测仪器设备对环境条件的要求，室内采光良好。
4.2人员安全（1）操作人员二级防护（2）所有血液样本及与血液接触的材料均视为传染性物质（3）对设备进行清洁或清除污染、处理样本、处置废弃试剂卡、处理稀释样本管等遵照实验室生物危害注意事项。
5.方法学微柱凝胶法6.程序性步骤试剂卡做好标记（病人姓名、日期）→分离被检者血清（或血浆）→用低离子强度溶液将筛检红细胞或谱红细胞配成1%浓度（I/II/III）→分别加入50ul在标记好的三个微管中（仅暴露所需反应孔）→立即加入被检者血清（或血浆）50ul在三个微管内→ 37℃孵育15min →专用离心机900r2min 转1500r3min →取出判读结果7.结果判读红细胞层下沉阴性，红细胞层未下沉为阳性8、措施计划1.鉴定卡和病人编号一致2.样本溶血、脂血慎用3.抗筛细胞浓度为4%，所需1%抗筛细胞仅需75ul抗筛细胞加入25ul生理盐水混匀后即可使用。
coombs试验流程
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间接抗人球蛋白试验（IAT）操作规程 SXYJ-GZ-0211
1目的检出和鉴定不完全抗体；红细胞血型抗原鉴定。
2适用范围血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。
3职责检测者负责按此程序进行间接抗人球蛋白试验操作。
4材料与设备抗人球蛋白试剂（-IgG/-C
3d、-IgG、-C
3
d）、 IgG抗D血清、AB型血清、3%D
阳性红细胞悬液、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机；CH20BIMF200型电子显微镜；S648型电热恒温水温箱（37℃）等。
5操作方法
5.1待检标本的准备及要求
5.1.1待检标本准备两管血，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝；
5.1.2血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清；
5.1.3细胞：从待检的抗凝标本中吸出部分红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤四遍，配制
成3%红细胞盐水悬液；
5.1.4根据试验目的准备相应的抗血清（待检血清或已知抗体的血清）、3%已知抗原的红细
胞或受检红细胞悬液。
5.2盐水悬浮法
5.2.1取试管3支，标明受检管、阳性对照及阴性对照/自身对照；
5.2.2按下表将各反应物加入相应试管内，混匀，37℃孵育45～60min；
5.2.3用生理盐水洗涤3次（KA-2200型离心机Ⅲ档）。
末次洗涤后，将上清液除尽，并用
滤纸将附着于管口的盐水吸去；
5.2.4每管加抗人球蛋白血清2滴混匀， 3400转离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），观
察反应结果。
5.3Liss悬浮法
5.3.1将被检者红细胞用生理盐水洗涤3次，用Liss配制3%红细胞悬液；
5.3.2按下表在试管中加入各反应物后，37℃孵育15min；
5.3.3以下同步骤5.2.3和5.2.4。
5.4PEG法
5.4.1按下表在试管中加入各反应物后，每管中加入PEG4滴，37℃孵育15min；
5.4.2以下同步骤5.2.3和5.2.4。
5.5Liss添加法
5.5.1按下表在试管中加入各反应物后，每管中加入Liss液2滴，37℃孵育15min；
5.5.2以下同步骤5.2.3和5.2.4。
表间接抗球蛋白试验操作步骤
反应物受检管阳性对照阴性对照/自身对照
血清（已知或受检）2滴－2滴（自身对照）
3％红细胞悬液（受检或已知）1滴－1滴（自身对照）
IgG抗D血清－2滴－
AB型血清－－2滴（阴性对照）
3％阳性红细胞悬液－1滴1滴（阴性对照）
6结果判定阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，受检管不出现凝集为阴性。
凝集强度可参见SXYJ-GZ-0202: 5.2.1.6对结果进行判读。
7注意事项
7.1红细胞洗涤应迅速，一开始洗涤就不应中途停止。
洗涤用盐水要足量并用力冲入管底，
使压积于管底的红细胞松离。
切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。
7.2离心速度和时间十分重要，应按规定进行，防止细胞丢失。
7.3如果检查的抗体为补体依赖抗体，则必需加入新鲜AB型血清，抗球蛋白血清中也应含
有抗C。
3d
8依据《全国临床检验操作规程》（第3版）中华人民共和国卫生部医政司。