化学抑杀菌剂的效果评价

化学抑杀菌剂的效果评价
摘要：目的本实验拟选取三种抗生素和两种中药复方抗菌药物进行实验，测定所设计的不同药剂的不同浓度对不同菌种的抑杀效果，进行抑杀菌效果评价。

方法滤纸片法：根据抑菌圈直径的大小分析各药剂的抑杀菌效果；选取碘酒、龙胆紫、氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液等八中药剂利用大肠杆菌和白色葡萄球菌进行实验。

结果不同药剂不同浓度对不同病原菌效果不同。

选取的八种药品中，氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌都有明显的抑菌效果，四环素和龙胆紫对白色葡萄球菌有较明显的抑杀作用，两种中药的抑菌效果均不明显。

单从抑杀菌效果来看，西药比中药效果要好一些。

关键词：滤纸片法抑杀菌效果评价有效浓度
一、前言
（一）研究背景
日常生活中人们常用到各种抗病原体药物，包括各种抗生素和中药类复方抗菌药物等。

利用消毒剂、防腐剂进行消毒和防腐。

但不同药剂抑菌效果不同，有效抑菌浓度也不同。

为此，本实验小组进行了本次实验，拟对消毒剂、防腐剂、抗生素、中药等药剂的抑菌效果进行研究探索，进行抑杀菌的效果评价。

（二）研究目的
本实验拟选取碘酒、龙胆紫、氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液等八中药剂进行实验，测定所用药剂不同浓度对不同菌种的抑杀效果。

进行常用药抑杀菌的效果评价。

（三）解决方法
抗生素效价的测定是生产和药检部门都必须做的，测定方法都是严格按照国家药典规定的方法进行。

本实验使用的滤纸片法，通过测量抑菌圈直径大小来确定抑菌效果。

二、材料和方法
（一）实验材料
1.实验仪器
高压蒸汽灭菌锅，微波炉，恒温培养箱,打孔器等。

2. 实验材料
牛肉膏蛋白胨培养基:
牛肉膏2.5g、蛋白胨5g、NaCl2.5g、琼脂9g、水500ml（pH7.0-7.2）
药剂
消毒剂：龙胆紫（0.1%、0.05%）、碘酒（0.5%、0.25%）
抗生素：
氨苄青霉素(10、50、100μg/ml)；
链霉素(10、25、50μg/ml)；
卡那霉素(10、25、50μg/ml)；
四环素(10、25、50μg/ml)
中药：双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液
实验菌种：大肠杆菌，白色葡萄球菌（由中央民族大学生命与环境科学学院微生物实验室提供）
其它：滤纸片130个(直径6mm) ,移液枪和移液管，涂布棒，接种环，培养皿（20个），试管及试管塞。

（二）实验方法
1．菌悬液的制备
将灭装有培养基的试管制成斜面并进行灭，斜面划线接种实验室提供的菌种，然后恒温37℃培养24h（本实验菌种直接由实验室提供）。

刮下剩余菌种，尽可能的刮下斜面上的菌种，放入灭菌后的装有10ml生理盐水（已灭菌）中稀释，摇匀，以保持平板接种过程中，菌种浓度的一致。

2．不同浓度药液的配制
实验室提供龙胆紫（0.1%、0.05%）、碘酒（0.5%、0.25%）、
双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液、（均可直接使用，无需稀释）
氨苄青霉素(100μg/ml)、链霉素(100μg/ml)、卡那霉素(100μg/ml)、四环素(100μg/ml)
这四种药品分别按所设计浓度用移液枪准确移取并稀释，配成设计浓度的药液。

3．涂布法接种
涂布法接种是一种常用的接种方法，每个培养基上接种定量的菌悬液，可以使培养基表面形成菌苔，用于检测化学因素对于微生物生长的抑杀作用。

4．滤纸片法
利用滤纸对于不易挥发的化学药剂的吸附效用，通过浸泡法使每个滤纸片上携带定量的药物溶液，贴负在培养基上，滤纸所携带的药剂就会渗透入培养基，对培养基上菌种有抑杀作用的药剂就会抑制菌的繁殖，从而形成菌的“真空带”，即抑菌圈。

统计计算抑菌圈的直径，抑菌圈直径大越大，该消毒剂的杀菌能力越强，进行各药剂抑杀菌效果的分析。

要注意保持滤纸片大小一致（6mm）、滤纸片吸附量一致、菌量控制合适能够形成均匀的菌苔。

5.空白对照
本实验将无菌灭菌税浸泡的滤纸片置于培养基正中间作为空白对照组作为对照。

三、实验结果
下表是本实验不同浓度的不同药剂抑杀菌效果
四、分析与讨论
（一）实验分析
1．评价标准
用直尺测量抑菌圈的直径，并按以下标准进行抑菌效果的评定。

抑菌圈直径7-10mm为细菌低度敏感的药剂
抑菌圈直径10-15mm中度敏感的药剂
抑菌圈直径大于15mm高度敏感的药剂
2．同一药剂不同浓度对细菌的抑杀作用
从实验结果可以看出，低浓度的药剂对细菌抑杀效果不明显而随着浓度的增大其抑杀效果越来越明显。

如，浓度分别为10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的氨苄青霉素对白色葡萄球菌抑杀作用的实验中三者抑菌圈直径分别为9mm、18mm、27mm。

3．同一药剂对不同细菌的抑杀效果
观察同一浓度的同一药剂对不同细菌的抑杀实验结果可以看出，同一浓度的同一药剂对不同细菌有不同的抑杀效果。

如，0.10%的龙胆紫对大肠杆菌的抑菌圈平均直径为10mm，而对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为15mm；0.05%的龙胆紫对大肠杆菌的抑菌圈平均直径为7mm，表现为低敏感的效果，而对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13mm，表现为中度敏感的效果。

4．不同药剂对同一细菌的抑杀效果
通过观察不同细菌对同一细菌抑杀作用的结果可以看出，不同细菌对同一细菌的抑杀效果是不同的。

如，同样是50μg/ml的浓度，氨苄青霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为18mm表现为高度敏感的抑杀作用，而链霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13mm表现为中度敏感的抑杀作用。

（二）讨论
1．滤纸片法
经过24h的培养，通过对抑菌圈大小的测量和比较了解到，氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素对两种菌都有明显的抑制效果，抑菌圈直径分布在11~23mm之间，直径与药剂浓度呈正相关，其中卡那霉素效果最明显，而它们对大肠杆菌的抑制作用更好一些。

而中药的双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液几乎没有抑菌圈出现，说明西药能在短时间内发挥药效，比中药效果好，如果想在短时间内消灭致病菌，最好选择西药抗生素，在人体能接受的条件下，适当加大剂量可增加药效。

2．细菌菌台的厚薄对抑杀实验结果的影响
通过观察实验现象可以看出，细菌菌台较薄的培养基内抑菌圈的大小相比于菌台厚薄适宜的培养基内抑菌圈大小均明显较大，但抑菌圈比较模糊。

如链霉素对白色葡萄球菌抑杀实验中10μg/ml的药剂抑菌圈平均直径为12mm，而25μg/ml的药剂抑菌圈平均直径为10mm，同一药剂低浓度的抑杀实验结果反而比高浓度药剂的抑杀实验结果好，原因就是前者细菌菌台较薄。

3．空白对照的滤纸片表现出“假抑菌圈”
本实验中用灭菌水浸泡的滤纸片本不该出现抑菌圈，但有的培养基内的空白滤纸片仍出现“假抑菌圈”，原因是在贴滤纸片时滤纸片上有很多灭菌水，贴到菌台上后将周围菌台冲到外围，形成了“假抑菌圈”。

因此，实验过程中不论是贴空白滤纸片还是贴药剂浸泡的滤纸片都应先将滤纸片上多余的液体揩净后再贴滤纸片，并且菌台表面也应是干的。

4．接种细菌时涂布的注意事项
涂布棒一定要提前灭好菌，先将同一菌种涂布完了，再涂布另一菌种。

涂布另一菌种前先用酒精灯将涂布棒灭菌，待涂布棒冷却后再进行涂布，以免涂布棒温度较高将细菌烫死。

涂布一定要均匀，且每次取菌前应将菌液摇匀，取相同量的菌液进行涂布，以确保不同培养基表面菌台厚薄相同。

5．注意各个环节无菌操作的规范
如应在酒精灯附近10—15cm处进行操作；手拿培养皿的姿势；滤纸片、无菌水、生理盐水及液体培养基的灭菌条件等。

五、实验结论
1．不同药剂不同浓度对不同病原菌效果不同。

低浓度的药剂对细菌抑杀效果不明显而随着浓度的增大其抑杀效果越来越明显；同一浓度的同一药剂对不同细菌有不同的抑杀效果；不同细菌对同一细菌的抑杀效果是不同的。

2．链霉素、卡那霉素是一种很有效的抑杀菌剂，在很低浓度就对病原菌起到有效作用；
3．各药剂对大肠杆菌的最低有效浓度：碘酒0.25%、龙胆紫0.05%，氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素均为10μg/ml。

4．各药剂对白色葡萄球菌的最低有效浓度：碘酒0.25%、龙胆紫0.05%，氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素均为10μg/ml。

5．单从抑杀菌效果来看，西药比中药效果要好一些。

参考文献
[1]周德庆.微生物学教程，第3版，高等教育出版社，2011.4.
[2]沈萍、陈向东，微生物学实验，第4版，高等教育出版社，2007.11.。