化学抑杀菌剂的效果评价

化学抑杀菌剂的效果评价

摘要：目的本实验拟选取三种抗生素和两种中药复方抗菌药物进行实验，测定所设计的不同药剂的不同浓度对不同菌种的抑杀效果，进行抑杀菌效果评价。方法滤纸片法：根据抑菌圈直径的大小分析各药剂的抑杀菌效果；选取碘酒、龙胆紫、氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液等八中药剂利用大肠杆菌和白色葡萄球菌进行实验。结果不同药剂不同浓度对不同病原菌效果不同。选取的八种药品中，氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌都有明显的抑菌效果，四环素和龙胆紫对白色葡萄球菌有较明显的抑杀作用，两种中药的抑菌效果均不明显。单从抑杀菌效果来看，西药比中药效果要好一些。

关键词：滤纸片法抑杀菌效果评价有效浓度

一、前言

（一）研究背景

日常生活中人们常用到各种抗病原体药物，包括各种抗生素和中药类复方抗菌药物等。利用消毒剂、防腐剂进行消毒和防腐。但不同药剂抑菌效果不同，有效抑菌浓度也不同。为此，本实验小组进行了本次实验，拟对消毒剂、防腐剂、抗生素、中药等药剂的抑菌效果进行研究探索，进行抑杀菌的效果评价。

（二）研究目的

本实验拟选取碘酒、龙胆紫、氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液等八中药剂进行实验，测定所用药剂不同浓度对不同菌种的抑杀效果。进行常用药抑杀菌的效果评价。

（三）解决方法

抗生素效价的测定是生产和药检部门都必须做的，测定方法都是严格按照国家药典规定的方法进行。本实验使用的滤纸片法，通过测量抑菌圈直径大小来确定抑菌效果。

二、材料和方法

（一）实验材料

1.实验仪器

高压蒸汽灭菌锅，微波炉，恒温培养箱,打孔器等。

2. 实验材料

牛肉膏蛋白胨培养基:

牛肉膏2.5g、蛋白胨5g、NaCl2.5g、琼脂9g、水500ml（pH7.0-7.2）

药剂

消毒剂：龙胆紫（0.1%、0.05%）、碘酒（0.5%、0.25%）

抗生素：

氨苄青霉素(10、50、100μg/ml)；

链霉素(10、25、50μg/ml)；

卡那霉素(10、25、50μg/ml)；

四环素(10、25、50μg/ml)

中药：双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液

实验菌种：大肠杆菌，白色葡萄球菌（由中央民族大学生命与环境科学学院微生物实验室提供）

其它：滤纸片130个(直径6mm) ,移液枪和移液管，涂布棒，接种环，培养皿（20个），试管及试管塞。

（二）实验方法

1．菌悬液的制备

将灭装有培养基的试管制成斜面并进行灭，斜面划线接种实验室提供的菌种，然后恒温37℃培养24h（本实验菌种直接由实验室提供）。刮下剩余菌种，尽可能的刮下斜面上的菌种，放入灭菌后的装有10ml生理盐水（已灭菌）中稀释，摇匀，以保持平板接种过程中，菌种浓度的一致。

2．不同浓度药液的配制

实验室提供龙胆紫（0.1%、0.05%）、碘酒（0.5%、0.25%）、

双黄连口服液原液、清热解毒口服液原液、（均可直接使用，无需稀释）

氨苄青霉素(100μg/ml)、链霉素(100μg/ml)、卡那霉素(100μg/ml)、四环素(100μg/ml)

这四种药品分别按所设计浓度用移液枪准确移取并稀释，配成设计浓度的药液。

3．涂布法接种

涂布法接种是一种常用的接种方法，每个培养基上接种定量的菌悬液，可以使培养基表面形成菌苔，用于检测化学因素对于微生物生长的抑杀作用。

4．滤纸片法

利用滤纸对于不易挥发的化学药剂的吸附效用，通过浸泡法使每个滤纸片上携带定量的药物溶液，贴负在培养基上，滤纸所携带的药剂就会渗透入培养基，对培养基上菌种有抑杀作用的药剂就会抑制菌的繁殖，从而形成菌的“真空带”，即抑菌圈。统计计算抑菌圈的直径，抑菌圈直径大越大，该消毒剂的杀菌能力越强，进行各药剂抑杀菌效果的分析。

要注意保持滤纸片大小一致（6mm）、滤纸片吸附量一致、菌量控制合适能够形成均匀的菌苔。

5.空白对照

本实验将无菌灭菌税浸泡的滤纸片置于培养基正中间作为空白对照组作为对照。

三、实验结果

下表是本实验不同浓度的不同药剂抑杀菌效果

四、分析与讨论

（一）实验分析

1．评价标准

用直尺测量抑菌圈的直径，并按以下标准进行抑菌效果的评定。

抑菌圈直径7-10mm为细菌低度敏感的药剂

抑菌圈直径10-15mm中度敏感的药剂

抑菌圈直径大于15mm高度敏感的药剂

2．同一药剂不同浓度对细菌的抑杀作用

从实验结果可以看出，低浓度的药剂对细菌抑杀效果不明显而随着浓度的增大其抑杀效果越来越明显。如，浓度分别为10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的氨苄青霉素对白色葡萄球菌抑杀作用的实验中三者抑菌圈直径分别为9mm、18mm、27mm。

3．同一药剂对不同细菌的抑杀效果

观察同一浓度的同一药剂对不同细菌的抑杀实验结果可以看出，同一浓度的同一药剂对不同细菌有不同的抑杀效果。如，0.10%的龙胆紫对大肠杆菌的抑菌圈平均直径为10mm，而对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为15mm；0.05%的龙胆紫对大肠杆菌的抑菌圈平均直径为7mm，表现为低敏感的效果，而对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13mm，表现为中度敏感的效果。

4．不同药剂对同一细菌的抑杀效果

通过观察不同细菌对同一细菌抑杀作用的结果可以看出，不同细菌对同一细菌的抑杀效果是不同的。如，同样是50μg/ml的浓度，氨苄青霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为18mm表现为高度敏感的抑杀作用，而链霉素对白色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13mm表现为中度敏感的抑杀作用。

（二）讨论