100例早孕胚胎停育绒毛染色体核型分析

100例早孕胚胎停育绒毛染色体核型分析①
马玲利
丛
林②
袁静安徽医科大学第一附属医院产前诊断中心（安徽
合肥）230022
中国图书分类号R714.21文献标识码
B
文章编号1001-
4411（2011）26-4104-02①中华医学会分子生物学临床应用研究专项基金〔CAMB012010〕安徽省科技攻关计划〔08010302181〕②通讯作者
【摘
要】
目的：分析早孕胚胎停育与绒毛染色体异常的关系。

方法：选择2010年 2011年3月安徽医科大学100例胚
胎停育患者，对其进行绒毛染色体核型分析。

结果：100例胚胎停育患者，孕周最长15周，最短6周。

绒毛培养失败5例，培养成功率95.0%；检出异常核型34例，检出率35.8%，其中单纯染色体数目异常占55.9%，异常类型有：染色体数目异常23例，三倍体4例，四倍体1例，结构异常2例，嵌合体4例。

95例早孕胚胎停育中，女性胚胎51例，占53.7%；男性胚胎44例，占46.3%。

结论：胚胎染色体异常是胚胎停育的重要原因。

【关键词】
早孕胚停
绒毛
染色体异常
Analysis on chorionic villus karyotype for 100cases of early embryo development arrest
MA Ling －Li ，CONG Lin ，YUAN Jing .The Center of Prenatal Diagnosis ，the First Hospital of Anhui Medical University ，Hefei 230022，Anhui ，China
〔Abstract 〕
Objective ：To investigate the relationship between early embryo development arrest and chorionic villus.Methods ：
100chorionic villus specimens in our hospital from November ，2010to March ，2011were cultured for karyotype analysis.Results ：Of the 100cases ，
95chorionic villus was successfully cultured （95%），and abnormal embryo karyotypes were identified in 34cases （35.8%）.The abnormal karyotypes include trisomy or monosomy ，sex chromosome monosomy （23cases ），triploid （4cases ），tetraploid （1case ），chromosomal abnormalstructures （2cases ），mosaicism （4cases ）.Female embryos were 53.7%（51/95），male embryos were 46．3%（44/95）.Conclusion ：Embryo chromosomal abnormality is the most important reason of early embryo development arrest.
〔Key words 〕
Early embryo development arrest ；Chromosome ；Chorionic villus
胚胎停育是指由于孕卵缺陷或母体存在不利于妊娠的因素，导致妊娠早期胚胎死亡。

造成胚胎停育的具体原因主要包括遗传因素、免疫因素、激素水平、生殖道感染、甲状腺功能问题等，其中遗传因素，尤其是染色体异常被认为是最常见的诱发因素。

绒毛细胞是胚胎外胚层细胞，具有与胚胎组织相同的遗传性状，利用绒毛细胞染色体检查技术可以了解胚胎细胞的遗传性状，探讨胚胎停育的病因。

研究者对100例胚胎停育患者进行了绒毛组织的细胞遗传学核型分析。

1对象与方法
1.1
对象2010年11月 2011年3月安徽医科大学第一附
属医院妇产科门诊的早孕胚胎停育患者，孕6 15周，其中13 15周仅5例。

B 超提示胚胎停止发育，即无心管搏动，不能见到胚芽等。

1.2方法
1.2.1
标本采集和绒毛细胞培养
清宫手术过程中，将绒毛
组织无菌取出，生理盐水冲洗凝血块。

将位于超净台中的培养皿加入生理盐水后滴入双抗，将取得的绒毛组织约20mg 置于培养皿中。

选择呈“手指状”分枝较长的绒毛枝，约10 15mg 。

生理盐水漂洗2次后，用眼科剪剪碎，加入1ml 胶原酶和1ml 1.5%EDTA －胰酶，将其混匀后移入试管里，将试管置入37ħ、5%的CO 2温箱内消化15min 取出，加入2
ml 小牛血清终止消化，离心后弃上清液，接种于培养瓶中。

置入37ħ、5%CO 2温箱内培养5 7天，取出在倒置显微镜下观察细胞是否贴壁，见到梭形细胞克隆后换液。

继续培养2 3天，待大量的细胞呈圆形或卵圆形时收获。

1.2.2
细胞收获和染色体制备
用5ml 注射器加入浓度为
50μg /ml 的秋水仙素2滴，2.5h 后行细胞学处理。

加入0.4%EDTA －胰酶1.5ml 消化1min ，将离心管内培养基加入终止消化后，再移入离心管内。

2000r /min ，7min ，弃上清。

低渗：加入已预温至37ħ的0.075mol /L 的KCl 7ml ，用吸
管微吹打，放入37ħ水浴箱内5min 后取出，加入2ml 固定液，用吸管混匀后，静置5min ，预固定。

离心7min ，2000r /min 。

固定：弃上清，加入7ml 固定液，轻混匀后静置固定30min 。

离心7min ，2000r /min ，弃上清，加入7ml 固定液。

滴片：将最后一次固定的混合液离心后弃上清，用固定液将沉淀细胞调成细胞悬液，滴在冰片上，酒精灯火焰上烤片后，
置于80ħ烤箱2h 。

G 显带：将玻片置于预温至37ħ的0.5%胰酶溶液中消化2min 后，立即在生理盐水里漂洗2次，在预温至37ħ的Giemsa 溶液中染色3min ，自来水冲洗，吹干后阅片。

核型分析：每例计数30个分裂相，分析4个核型，如有嵌合体，加倍计数。

1.3统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行χ2
检验。

2结果
2.1
染色体异常核型分类
100例患者胚胎停止发育在6
15周的分别为4例、3例、8例、20例、19例、19例、22例、3例、1例、1例。

孕周最短的6周，妊娠囊大小为
·4014·中国妇幼保健2011年第26卷
1.0cmˑ0.8cmˑ0.8cm。

孕周最长的为15周，妊娠囊大小为6.7cmˑ5.1cmˑ6.1cm。

100例绒毛样本中，细胞培养成功95例，占95%。

有5例培养失败，其中3例因绒毛组织陈旧，培养过程中细胞不贴壁，2例因污染培养失败。

细胞培养成功的95例中异常核型34例，占35.8%，其中单纯常染色体数目异常占55.9%。

见表1。

2.2孕囊径线与孕周的分布见表2。

2.3胚胎性别与异常核型的关系95例早孕胚胎停育中，女性胚胎51例，占5
3.7%；男性胚胎44例，占46.3%。

染色体异常核型中，女性胚胎19例，占55.9%；男性胚胎15例，占4
4.1%。

在所有胚停标本和异常核型标本中，男女性别所占比例均未发现存在统计学差异。

表134例早孕胚停绒毛异常染色体核型分类
表2孕囊径线与孕周的分布
孕囊径线（mm）例数孕周
8.855
15.556
24.0237
29.1258
36.0199
43.01710
49.1411
55.7212
3讨论
自然流产在生育年龄妇女是最常见的医疗问题。

传统的细胞遗传学核型分析结果认为，50% 70%的自然流产绒毛标本存在细胞遗传学异常〔1〕。

流产标本核型异常的比率在早孕时较高，随着妊娠时间的延长，自然流产儿的染色体异常发生率呈下降趋势。

该实验结果异常核型率为35.8%，低于文献报道的发生率。

小于18周的胚胎或胎儿因为没有胎动，孕妇难以准确感知其死亡。

通过此100例病例分析，研究者发现妊娠囊停育时间多集中于孕7 10周〔2〕，而多数胚停孕妇的就诊时间则多集中于孕9 12周，且就诊原因多为阴道出血。

可见，多数孕妇在胚胎死亡后的两周出现阴道流血。

因此，孕妇在孕8 10周应常规行B超检查，以使发育异常的胚胎被及早发现。

染色体异常的类型包括染色体数目异常和染色体结构异常两种。

该研究中非整倍体（包含三体型、单体型、复合型、嵌合型）27例，占异常核型的79.4%；异常整倍体5例，占异常核型的14.7%，其中三倍体4例，四倍体1例。

结构异常2例，占异常核型的5.9%，上述数据与文献报道接近〔3〕。

常染色体三体的出现归因于配子形成过程中减数分裂染色体不分离。

文献报道自然流产标本核型数目异常最常见的是16－三体，占常染色体三体异常的20% 30%〔1〕，该研究中16－三体9例（占26.5%）。

由于性染色体丢失所形成的45，xo核型比较常见。

文献报道称，45，xo核型导致的流产约占早孕期自然流产的10%〔4〕。

另外，由常染色体丢失导致的非整倍体极为罕见，说明常染色体单体是一种致死性的畸形，可能在早早孕时已经流产。

新生儿中三倍体或多倍体罕见，表明多倍体是致死性染色体异常。

该研究中发现染色体结构异常2例，这说明染色体的多态性可能会导致早孕期胚停，引起自然流产，这可能是由于重复的DNA序列会使有丝分裂出现错误或影响基因调节。

该次研究中，培养成功的95例绒毛核型结果女性为51例，占53.7%，男性44例，占46.3%；34例染色体异常核型中，女性胚胎19例，约占55.9%；男性胚胎15例，约占44.1%；男女两种性别所占比例无明显统计学差异。

但有研究认为自然流产存在性别特异性的胚胎淘汰，即无论是流产胚胎或异常核型胚胎中，男女两种性别所占比例均存在差异，女性胚胎明显高于男性胚胎〔5，6〕。

该研究与文献报道的差异提示可能样本量不足，地域存在差异。

综上所述，自然流产对有染色体异常的胚胎是一种重要的自然淘汰过程，因而临床上早孕期出血患者，胚胎有染色体异常的可能，不宜盲目保胎。

胚胎染色体异常与早孕胚停关系密切，核型异常种类多样，如果能常规及时行早孕胚停绒毛染色体分析，将可明显提高检出率，收集多区域、大样本的数据结果，将有助于病因探讨，为遗传咨询及优生优育提供指导。

4参考文献
1Reece AE，Hobbins J，ed.Clinial obstetrics：The fetus and the mother 〔M〕.Oxford：Blackwell Publishing，2007：143
2曹海根，王金锐主编.实用腹部超声诊断学〔M〕．北京：人民卫生出版社，2007：413
3Carrera M，Ribas I，Torrents M et al.Spontaneous repeat abortions and numerical chromosome anomalies：genetic diagnosis before preimplanta-tion alternative diagnosis〔J〕.Prog Diagn Prenat，1996，8：342
4Lebedev I.Molecular cytogenetics of recurrent missed abortions〔J〕.
India J Med Res，2006，124（1）：41
5熊丽，刘洁，邓康et al.早期自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析110例〔J〕.南方医科大学学报，2009，29（1）：64
6Menasha J，Levy B，Hirschhorn K et al.Incidence and spectrum of chromosome abnormalities in spontaneous abortions：new insights from a 12－year study〔J〕.Genet Med，2005，7（4）：251
（2011-05-03收稿）〔编校邹庆红〕
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马玲利等100例早孕胚停绒毛染色体核型分析第26期。