枸杞多糖

1 前言

2 实验目的

3 实验原理

3.1枸杞多糖提取原理

萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。

多糖类化合物的溶剂提取，溶剂的选择是根据原料中被提成分，即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性，遵循相似相溶的原则，使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。一般而言，分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断，分子中含有羟基或羧基基团越多，极性就越大，亲水性就越强；反之极性就越小，亲脂性越强。要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来,一般要求将试样尽可能地粉碎。根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40%～50%)不宜粉碎等情况,采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。

3.2脱蛋白

常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。从资料知，枸杞子水溶性蛋白质为1.54%，这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中，在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质，许多人在提取分离流程中采用了Sevage法脱蛋白质手续。Sevage方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。

Sevage法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性。

3.3 乙醇沉淀多糖的适宜浓度

要使枸杞多糖完全地沉淀出来，并尽量减少对杂质的吸附，待沉淀的多糖浓缩液中多糖含量及用乙醇沉淀时在全部溶液中乙醇的最终浓度都要适度。为此，根据已知资料和我们的实验数据，待沉淀液中多糖含量在2 %以下为宜，即200g枸杞子经有机溶剂脱脂和用 80%乙醇回流提取单糖等杂质后，再用热水提取多糖并将此溶液浓缩到500ml即可。当用95 %乙醇沉淀时，加入500ml后开始出现沉

淀(此时乙醇浓度为47.5%)，在充分搅拌的同时，继续加乙醇到上清液不再产生沉淀为止，共加入95 %乙醇2000ml(即乙醇的最终浓度为76 %)。因此，在80%乙醇浓度下，枸杞多糖可完全地沉淀出来。但是，在用热水直接提取法中，由于提取液中水溶性成分多，杂质浓度大且不易浓缩，沉淀液体积大一些为好，这样再用乙醇沉淀出多糖时，可减少对单糖等杂质的吸附作用。另外，用乙醇反复多次进行沉淀，当加入乙醇到80%浓度后还不出现沉淀时，向沉淀液中加入少量(最终浓度为1%～2%)的醋酸钠，以提高溶液的离子强度，放置后多糖即凝聚而沉淀。所以，本实验研究直接用80%乙醇溶液提取。

3.4 测定枸杞多糖含量的原理:多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

4 实验设备：鼓风干燥箱、干燥器、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、SHB—IH循环水式多用真空泵、电子天平、紫外分光光度计

5 实验仪器及试剂

5.1仪器：研钵、蒸馏烧瓶、球形冷凝管、酒精灯

5.2药品及试剂：宁夏枸杞(为宁夏中宁产)、精河枸杞（为新疆精河县产）、a-无水葡萄糖、95％乙醇、无水乙醇、浓硫酸、丙酮、三氯甲烷和甲醇

6 实验步骤

6.1枸杞多糖的提取：实验装置如图1

6.1.1 枸杞的预处理：称取适量枸杞子置干燥箱中于60℃烘干，取出后放入干燥器中24h；

6.1.2 脱脂：取10g干燥后的枸杞研碎置普通回流装置中，加入氯仿：甲醇(2：1)60℃回流脱脂2次，每次2h，滤出溶剂；

6.1.3 提取：上步所得的残渣风干后用80％乙醇适量60℃回流2次，每次2h，回收乙醇，再以60℃水提2次，共4h，液固比为1：15-1：30，合并滤液浓缩至20 mL左右，以4—5倍95％的乙醇沉淀，放置24h，抽滤，所得固形物先后以95％乙醇、无水乙醇、丙酮依次洗涤、真空干燥(50℃)，即得固形物枸杞多糖粗

图1

6．2枸杞多糖的测定

6.2.1最大吸收度的确定

采用苯酚一硫酸比色法，a 一无水葡萄糖作为标准品。精密称取葡萄糖对照品50mg ，置105℃(i 干燥箱中干燥至恒重后置于50mL 容量瓶中，加水溶解至刻度，精密吸取该溶液1.0、2.0,3.0,4.0和5．0mL 于50mL 容量瓶中(即得5个浓度

1C =0．02mg/mL ，2C =0．04mg/mL ，3C =O ．06mg/mL ，4C =0．08mg/mL ，5C =1．

00mg/mL)，加水稀释至刻度，各取1 mL 于10mL 比色管中，分别加入5％苯酚溶液1 mL ，摇匀，匀速加入5mL 浓42SO H ，冷水浴冷却至室温。以蒸馏水同法做空白参比，在450—500m 处测A 值

6.2.2 标准曲线的绘制

根据已确定的最大吸收度，以浓度做横坐标，以吸收度做纵坐标绘制标准品曲线，并得出回归方程A=K C+B ．r=?(K 为斜率，C 为浓度，r 为相关系数)。图2

6.2.3 枸杞多糖含量的计算

多糖浓度c(mg ／mL)= (A-B)/K

7 结果计算

7.1表1

表1 葡萄糖标准品各浓度吸光度登记表

组别

1 2 3 4 5 浓度

0．02mg/mL 0.04mg/ml 0.06mg/ml 0.08ug/ml 1.00ug/ml 吸光度

7.2图2 标准曲线0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

0246810121416

浓度（ug/ml）

吸光度

图1 葡萄糖标准曲线

8 可行性分析

8.1 本实验原料枸杞盛产于宁夏、新疆，原料便宜易得，又不会造成环境污染。

8.2 枸杞多糖在枸杞中含量丰富，本实验从枸杞中提取枸杞多糖，能获得较大提取量。

8.3 本次实验的提取方法较为简单，并且实验过程中所用仪器均为实验室中常见仪器，可操作性较高。

9 实验亮点分析