不同土炒白术中白术内酯Ⅲ和白术多糖含量比较

不同土炒白术中白术內酯Ⅲ和白术多糖含量比较
陈鸿平刘友平刘承萍李萍
（成都中医药大学四川成都 610075）
摘要:目的探讨不同辅料土炮制白术对其主要有效成分的影响，为辅料土的筛选提供依据。

方法采用同批药材，用5种不同品种的辅料土炮制；采用高效液相色谱法白术內酯-Ⅲ的含量，采用紫外分光光度法测定不同土炒白术中多糖的含量。

结果白术内酯-Ⅲ含量高低为：为赤石脂炒白术＞壁土炒白术＞灶心土炒白术＞窑土炒白术＞黄土炒白术＞生白术；多糖含量高低为：灶心土炒白术＞黄土炒白术＞赤石脂炒白术＞窑土炒白术＞壁土炒白术＞生白术。

结论白术经不同辅料土炒炮制后，白术內酯-Ⅲ和多糖的含量均有增高，但不同炮制品之间无显著差异。

关键词：白术；土炒炮制；白术內酯Ⅲ；白术多糖
Content Comparision of Atractylode III and Soluble
Polysaccharide Processed with Different Soils
CHEN Hong-ping, LIU You-ping, LIU Cheng-ping, LI Ping
(Chengdu University of TCM, chengdu 610075, China)
Abstract: Object:To discuss on the effect on the main effective ingredients of proce ssed Atratylodes (Baizhu) with different soils as excipient and provide the basis for s creening soils as processing excipient. Methods: Atratylodes of the same batch are pr ocessed with 5 different kinds of soils. Content of Atractylode III is determined by H PLC and Soluble Polysaccharide by UV spectrophotometry in different processed Atrat ylodes.Results:The contents of Atractylode III in different processed Atratylodes are Halloysitum rubrum processed Atratylodes＞Wall soil processed Atratylodes＞kitchen r ange soil processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞loess processed Atrat ylodes＞raw Atratylodes; The contents of Soluble Polysaccharide in different processed Atratylodes are kitchen range soil processed Atratylodes＞loess processed Atratylodes ＞Halloysitum rubrum processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞Wall so il processed Atratylodes＞raw Atratylodes. Conclusion: the contents of both Atractylo de III and Soluble Polysaccharide increased after soil processed. However, there is no significant difference among the processed Atratylodes with different soils.
Key words: Atratylodes (baizhu), soil processing, Atractylode III, Soluble Polysacchari de
白术为菊科植物Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根茎。

始载于《神农本草经》，为常用中药。

具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎等功效[1]。

传统认为白术生品燥湿力强，炮制后可缓和药性，增强健脾和胃、补脾止泻的功效。

白术历代炮制方法主要有熬制、土制、炒制、泔制、麸炒、醋制、煨制、焙制等，现代炮制方法多为清炒、土炒、麸炒、蜜炙麸炒等，其中土炒是最常见的炮制方法之一。

白术土炒起源于晋、唐时期，常用的辅料土有黄土、陈壁土、灶心土，《中华人民共和国药典》2005年版一部规定使用灶心土。

但随着社会发展，灶心土越来越难以获得，各地出现的替代品种类不一，常使用的主要有黄土、窑土和赤石脂，均缺乏系统研究，严重影响了土炒炮制品的质量。

而不同种类辅料土对土炒白术饮片的质量影响尚未见文献报道。

本研究采用历代常用的灶心土、壁土、窑土、黄土、赤石脂等不同“土”作为辅料来炮制白术，对白术生品及各种土炮制品进行化学成分的定性定量比较研究,以白术多糖和白术内酯-Ⅲ的含量为测定指标，对各种土炮制白术前后及相互之间的化学成分影响进行初步研究，以探讨白术土炒炮制的意义，同时为辅料土的种类筛选提供依据。

1．仪器与试药
1.1仪器岛津LC 10-ATVP高效液相色谱仪、紫外检测器、岛津工作站（日本岛津仪器公司），UV-1100紫外可见分光光度计（上海天美科技有限公司），分析纯BP211D（十万分之一）、BP121S（万分之一）型电子分析天平（德国Satorius公司），BUG25-12 超声波清洗机（25kHz,500W,上海必能信超声波有限公司）。

1.2试剂白术内酯Ⅲ对照品（购自成都曼思特生物科技有限公司，经HPLC检测，纯度＞98%），葡萄糖（成都化学试剂厂），甲醇、乙腈均为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯（成都科龙化工试剂厂）。

1.3药材赤石脂于2008年3月购于四川成都市西南药都；灶心土来自四川广元市剑阁县某农家；窑土来自四川乐山市夹江县某农家；壁土来自四川乐山市夹江县某农家；黄泥土来自四川成都市温江区。

白术于2008年3月购于西南药都，经鉴定为植物白术Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根茎。

1.4不同土炒白术炮制品的制备取上述各种土过120目筛的细粉，分别投入热锅中，加热至呈滑利状态时，投入净白术片，迅速翻炒，炒至白术表面均匀挂土色时，取出，筛去土粉，放凉，备用。

即得灶心土炒白术、赤石脂炒白术、窑土炒白术、壁土炒白术、
黄土炒白术5种白术炮制品。

每100g药材用辅料土20g。

2．方法与结果
2.1不同土炒白术炮制品中白术内酯Ⅲ的含量比较
（250mm×4.6mm,5μm)；紫外检测器；流2.1.1色谱条件色谱柱：Hypersil- ODS C-
18
动相:甲醇-水（65：35）；柱温:30℃；流速:1.0ml·min-1；检测波长:220nm。

2.1.2对照品溶液的制备精密称取白术内酯Ⅲ对照品10.6mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.106g·L-1）。

2.1.3 供试品溶液的制备分别取白术生品及5种土炒炮制品细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.1.4系统适用性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，按“2．1．1”色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。

在此色谱条件下可将供试品溶液中白术内酯Ⅲ与其他成分完全分离，理论塔板数以白术内酯Ⅲ峰计，应不低于3000。

2.1.5 线性关系考察分别精密吸取对照品贮备液0.25ml, 0.5ml,0.75ml, 1.0ml, 1.5m1，2.0ml,置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

取上述溶液各10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X(μg)为横坐标，进行回归分析，得回归方程为：Y=3×106X+12090，r=0.9998，表明白术内酯Ⅲ含量在0.265～2.12μg范围内呈良好的线性关系。

2.1.6重复性实验精密吸取对照品溶液10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3020952，RSD为0.97%；
精密吸取同一灶心土炒白术供试品溶液10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3089322，RSD为0.22%；
2.1.7中间精密度实验精密吸取同一灶心土炒白术供试品溶液10μl，分别于0h、12h、24h、48h、72h、96h注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3100211，RSD为1.23%。

2.1.8加样回收率实验取已知含量的生白术细粉约0.5g6份，精密称定，分别加入白术内酯Ⅲ对照品溶液0.5ml，按“2．1．3”项下方法制备供试液，各精密吸取10ul，注入液相色谱仪，测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果
Tab1 Average recovery of atractylcnolide Ⅲ
Samples Content
/mg Added
/mg
Found
/mg
Recovery
/%
Average recovery
/%
RSD/%
1 0.05888
5 0.053 0.1113
98.9
2 0.058991 0.05
3 0.111
4 98.88
3 0.058356 0.053 0.1117 100.65 99.81 1.69
4 0.058556 0.053 0.1118 100.46
5 0.060274 0.053 0.112 97.6
6 0.057249 0.053 0.1115 102.36
2.1.9样品含量测定按“2．1．3”方法制备供试品溶液，按分别精密吸取各供试品溶液及对照品各10ul,按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，测定白术内酯-Ⅲ的峰面积值，计算含量，结果表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)
Tab2 Results of determination of samples．n=3
Samples name Content/ mg·g-1
1 raw Atratylodes 0.1177
2 Halloysitum rubrum processed Atratylodes 0.4754
3 kitchen range soil processed Atratylodes 0.4206
4 Wall soil processed Atratylodes 0.4699
5 kiln soil processed Atratylodes 0.4021
6 loess processed Atratylodes 0.3527
2.2不同土炒白术炮制品中多糖的含量比较
2.2.1 标准溶液的制备精密称取葡萄糖对照品（于105℃干燥至恒重）50.0mg，置50ml 量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，得葡萄糖对照品贮备液。

精密吸取贮备液5ml置50ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得葡萄糖标准溶液（0.1 g·L-1）
2.2.2 供试品溶液的制备分别取白术生品及5种土炒炮制品粗粉（过二号筛）约1g，精密称定，置250ml具塞锥形瓶中，加入70%的乙醇50ml，冷浸2h，超声提取20min，滤过，药渣用70%的热乙醇洗涤后，挥干乙醇，加入50ml蒸馏水回流提取1h，趁热过滤，药渣及烧瓶用少量热蒸馏水洗涤，洗涤液并入滤液，置100ml量瓶中，冷却至室温后稀，加蒸馏水释至刻度，摇匀，得供试品贮备溶液。

精密吸取上述贮备液1ml于100ml量瓶中，
加蒸馏水释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2.3 显色条件的考察苯酚-浓硫酸法测定多糖含量时影响因素主要有显色温度、显色时间和显色剂用量。

本试验对这三个影响因素进行了考察，确定测定白术多糖的显色条件为：供试品溶液2ml，加显色剂（10蒸馏水加入50浓硫酸中，于冰水浴中冷却，再加入0.6的苯酚晶体，超声溶解，即得）5ml，摇匀，放置10min，于沸水浴加热30min，取出冷却至室温，于490nm波长处测定吸收度。

2.2.4 标准曲线的绘制精密吸取葡萄糖对照品溶液0，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6ml于具塞试管中，蒸干，精密加入蒸馏水2ml溶解残渣，加显色剂5ml，摇匀，放置10min，于沸水浴加热30min，取出冷却至室温，于490nm波长处测定吸收度。

以吸收度为纵坐标（A），葡萄糖含量C（g·L-1）为横坐标，得回归方程A=1
3.363C+0.0239，r =0.9993，葡萄糖含量在0.02～0.08 g·L-1范围内线形关系良好。

2.2.5 稳定性试验精密移吸取白术生品供试液2ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下至“加显色剂5ml……”起操作，每隔30min测定一次吸收度，结果供试品溶液在120min钟内保持稳定。

2.2.6精密度试验精密移取白术生品供试液2ml，6份分别于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下至“加显色剂5ml……”起操作，测定吸收度，结果其平均吸收度为0.524，RSD为0.85%，符合要求。

2.2.7 不同土炒白术多糖的提取与精制分别称取白术生品及各种土炮制品粗粉（过二号筛）50g,，加6倍量70%乙醇回流提取2次，每次2h，滤过，以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分。

药渣加8倍量水煎煮2次，每次1.5h，合并水煎液，浓缩至100ml（相当于药材0.5g/ml），静置过夜，取上清液，离心(3500r/min)30min，取离心后上清液加入95%乙醇调至乙醇浓度为70%.，冰箱静置24h，滤过，沉淀用蒸馏水溶解，离心(3500r/min)30min，上清液再加入95%乙醇调至乙醇浓度为70%，冰箱静置24h，滤过，沉淀用无水乙醇反复洗涤，60℃真空干燥，即得不同土炒白术的精制多糖。

2.2.8 换算因子的测定精密称取精制多糖50mg于50ml量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至，摇匀，精密吸取1ml于25mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

精密吸取供试液2ml于具塞试管中，按“标准的制备”项下的方法测定吸收度，从回归方程中计算出多糖供试液中以葡萄糖计的浓度，按式f=W/C*D计算出换算因子。

W为多糖的重量（g）；C为多糖供试液中以葡萄糖计的浓度（g·L-1）；D为多糖的稀释因素。

2.2.9 加样回收率试验取已知多糖含量的生白术细粉约0.5g6份，精密称定，分别精
密加入葡萄糖0.25g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定吸收度，计算回收率，结果见表3。

表3 回收率试验结果
Tab3 Average recovery of polysaccharide
Samples Content/g Added
/g
Found
/g
Recovery
/%
Average recovery
/%
RSD/%
1 0.2358 0.25 0.482
2 0.9856
2 0.236
3 0.25 0.4857 0.9976
3 0.236 0.25 0.493
4 1.0296 99.94 1.83
4 0.2356 0.2
5 0.4821 0.986
5 0.2354 0.25 0.488
6 1.0128
6 0.2351 0.25 0.4813 0.9848
2.2.10 样品含量测量精密吸取各供试品溶液2ml于具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下的方法测定吸收度，从回归方程中计算出多糖供试液中以葡萄糖计的浓度，按下式：多糖含量（%）=（C*D*f）/W *100%，计算出样品中多糖的含量，C为多糖供试液中以葡萄糖计的浓度（g·L-1）、D为多糖的稀释因素、 f 为换算因子、W为多糖的重量（g）。

结果见表4
表4 样品多糖含量的测定（n=3）
Tab4 Results of determination of samples．n=3
Samples name Content/%
1 raw Atratylodes 47.12
2 Halloysitum rubrum processed Atratylodes 50.88
3 kitchen range soil processed Atratylodes 55.70
4 Wall soil processed Atratylodes 49.98
5 kiln soil processed Atratylodes 50.41
6 loess processed Atratylodes 52.42
3.讨论
3．1试验结果表明，白术土炒炮制后白术内酯Ⅲ和多糖的含量均明显增高，其中白术内酯Ⅲ含量增加尤为明显，约为生品的3至4倍，与文献报道一致[2]。

白术多糖具有提高机体免疫能力，增强机体对自由基的清除、抗氧化的作用；白术内酯Ⅲ则具有抗炎和抗癌作用。

二者含量在炮制后均明显提高，表明土炒炮制提供一定的科学依据。

3.2不同土炒白术中白术内酯Ⅲ的含量：赤石脂炒白术＞壁土炒白术＞灶心土炒白术＞窑土炒白术＞黄土炒白术，除黄土炒白术含量稍低外，其余四种炮制品无显著性差异。

不同土炒白术中多糖的含量：灶心土炒白术＞黄土炒白术＞赤石脂炒白术＞窑土炒白术
＞壁土炒白术，但均无显著性差异。

结果表明不同种类的辅料土炮制对白术多糖和内酯类成分的影响不大，但并不能就此说明这几种土均能替代灶心土使用，还应对其药理作用和毒理进行系统比较研究，以最终筛选和确定辅料土的种类，保证土炒饮片的临床疗效和用药安全。

参考文献
[1]Ch．P(2005) V olⅠ（中国药典2005年版．一部）［S］．2005:68
[2]YU Y M,SONG C Y ,JIA T Z.Quality standard of processed products of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae[J].Chinese Traditional Patent Medicine(中成
药),2005,27(6):669-672。