地中海贫血筛查-血液学分析
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
如CD41-42，CD71-72 ，CD17突变后形成终止子， 表现为0。
• 非编码区IVS-1和IVS-2突变
如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为＋。
• 影响转录的突变：
如-28，-29的突变影响基因的转录，表现为＋ 。
地贫的基因型与表现型
重型-地中海贫血＋/ ＋、0/ 0 、0/ ＋（纯合子或双重杂合子）
人类不同时期血红蛋白的组成
人血红蛋白的组成
• 胚胎期血红蛋白：
– – – – Hb Gower 1 （x2 e2 ） Hb Gower 2 (2 e2) Hb Portland (x2 g2) 即Hb Portland 1 另有少量Hb Portland 2 (x2 2)，Hb Portland 3 (x2 d2)
所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红 细胞体积小且低色素。过剩的游离α链形成α链包涵体，引起溶血性贫血，靠 输血维持生命。
实验室检查主要可见：①血红蛋白定量约为20-30g/L或更低；②红细胞体积细小，形 态不一，靶形红细胞较常见，网织红细胞增高；③血红蛋白电泳时HbA缺乏或严重缺 乏，HbF增高达30％以上（偶可达90%以上）。
• Hb电泳对轻型α-地贫无诊断意义
• 轻型α-地贫无HbBart′s(γ4)和HbH
• β-地中海贫血复合α-地中海贫血时多表现为β-地 中海贫血的特征,造成α-地贫漏检. • 地中海贫血合并缺铁性贫血造成地贫漏检.
谢谢！
亚能生物技术（深圳）有限公司 http://www.dbs-decipher.com
β－地中海贫血
MCV＜82fL、HbA2 ＞3.5%、HbF ＞3.5%、红细胞 形态异常，其中一项阳性者。
Normal
AA2
AE
Bart’s AF
HA
血红蛋白电泳图谱
+
1. 正常人HB 2. 轻型地贫 3. 异常HB E 杂合子 4. 新生儿HB Bart’s (γ4 )(地贫标 准型） 5. HB H (β4 )
RBC脆性 RBC 参数 MCV MCH 细胞形态变化
Hb电泳分析 Hb A2 () 或 () Hb Bart’s () Hb H () Hb E ()
贫血实验室诊断程序
贫血的形态学分类
贫血类型 MCV（fl） MCH(pg) MCHC(g/L) 特征
小细胞低色素性贫血
• 胎儿期主要血红蛋白：
– HbF （2 g2 ）
• 成人主要血红蛋白：
– HbA （ 2 2）约占血红蛋白总量96.5—97.5% – HbA2 （2 d2 ） 约占血红蛋白总量2.5—3.5% – HbF （ 2 g2）约占血红蛋白总量1%以下。
地中海贫血表型阳性诊断参考标准
α－地中海贫血 MCV＜82fL、HbA2 ＜2.5%、HbF ＜2%、红细胞形 态异常，其中一项阳性者。
1 2 3 4
500V, 25min
5
全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱
1、正常成人HbA2,无HbF区带; 2、成人HbA2升高,但HbF碱变性含量正常,图谱中不能扫描出HbF区带; 3、成人HbA2升高,HbF碱变性含量稍高于正常,图谱中可见浅染HbF区带; 4、成人HbA2升高,HbF碱变性含量高于正常,图谱中可见一浅染HbF区带; 5、成人HbA2升高,HbF碱变性含量明显高于正常,图谱中可见一清晰HbF 区带。
小红细胞正色素性贫血
<80
< 80 ＞94
<24
<24
200~300
320~360
珠蛋白合成异常，缺铁性 贫血，慢性失血
慢性肾功能衰竭等慢性病贫 血 骨髓呈巨幼红细胞特征
大红细胞正色素性贫血
>32 27～32
320~360
正红细胞正色素性贫血
80~100
320~360
急性失血，急性溶血，再生 障碍性贫血
地中海贫血检测
血液学分析
容敏逢
主要内容
• 筛查方案 • 血液学分析 • 地贫基因型与临床表现
地中海贫血筛查及产前诊断流程
被检对象（婚前或孕中期）
血液学分析（MCV，Hb A2变化） 排除地贫 地贫携带者
遗传咨询
双亲基因分析 胎儿产前诊断
遗传咨询，配偶检查
血液学分析（MCV Hb A2变化） 地贫携带者 排除地贫
●HbH病基因型可分成缺失型和非缺失型两种：
①缺失突变基因型：（-a3.7/--）、（-a4.2/--）及(-a2.7/--) ②非缺失突变基因型： （aaT/--）和（aaT/ aaT ）
a-地中海贫血临床类型
• 根据临床表现严重程度，可分成以下四种
静止型a-地贫 （aa／ a-）或（aa／a aT） 出生时脐血血红蛋白含少量Hb Bart's，-般少于5％ 患者无临床症状
轻型-地中海贫血A/ ＋、A/ 0 （杂合子）
患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色
素，MCV、MCH较低。
实验室检查可见：①血红蛋白定量约为90-120g/L或更低;②小细胞低色素性贫血，
MCH和MCV分别为20～22pg和50～70fl;③红细胞脆性降低；④约50%患者HbF增高，
HB Bart's胎儿水肿综 合征（--/--）
β-珠蛋白基因的突变
• -珠蛋白基因点突变：
β-珠蛋白基因最常见的突变类型。包括单碱基置换和数个碱基缺失或 插人突变。在中国β-地贫群体中
41/42（-TCTT）、 IV S-Ⅱ-654(C→T), CD17(A→T), -28（A→G） 和CD71/72（+A）等5种突变最常见，约占总突 变率90%以上
a-珠蛋白基因突变及其遗传学分型
●就遗传单体型而言a-珠蛋白基因突变可分成三类：
a-地贫2缺失 突变 a-地贫I缺失 突变
左缺失 （-a4.2） ，右缺失（-a3.7） 、-a2.7 基因型为（--）， 包括：--SEA、--THAI、-
-FIL及--HW
QS ，
a-地贫非缺失 基因型为（a aT） ，包括： a aCS， a a 突变 a a ws
Βιβλιοθήκη Baidu
血液学分析的敏感性和特异性
• RBC脆性假阴性 • 血常规检测(MCV)对静止型地贫有小概率的漏检
• • 静止型a-地贫患者多无临床症状 βE/N基因型患者的MCV十分接近筛查值这部分地贫患者极易漏诊
• 通过Hb电泳可对β-地贫进行明确诊断
• HbA2轻度增高诊断β-地贫的敏感性可达96.8%,特异性可达97.4%
轻型（标准型）a-地贫 出生时脐血血红蛋白Hb Bart's （a a /--）或（a-／a-） 占5％-10% 血红蛋白H病 （-a /--），或（a -/-），或（a aT /--），或 （a aT／a aT）
患者多无明显临床症状,实验室检 查可小细胞低色素性贫血，MCH 和MCV均较低．
出生时脐血Hb Bart's约占20％- 终生轻度至中度贫血和肝脾肿大 30％，此时HbH含量较低；但 等，但差异较大 .实验室检查可 出生后Hb Bart's含量迅速降低， 见小细胞低色素性贫血，红细胞 HbH含量逐渐增高。通常成年 内可见包涵体． 期患者HbH含量会持续在4%20%范围内。 Bart’s为主, 少量 Hb H 和HbPortland 患胎多于妊娠晚期（34～40周） 或产后数小时内死亡 ．
约为1％-3%，甚少大于5%；⑤HbA2量增高（达4%-8%）。
地贫的基因型与表现型
中间型-地中海贫血＋/ ＋、＋/ 0 （纯合子或双重杂合子）
患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸
等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。
实验室检查呈小细胞低色素性贫血症改变，血红蛋白定量部分患者可低至60g/L，但 也有患者高达100-120g/L本型患者通常属某些β-地中海贫血变异型纯合子，如日β+ 地贫（高F）／β+(高 F)地贫或两种不同变异型地中海贫血的双重杂合子，如β+地贫 ／δβ+地贫。
• 大片段缺失：
缺失突变涉及基因组上较大片段的缺失包括δβ-地贫和遗传性胎儿血红 蛋白持存症(hereditary persistance of fetal hemoglobin,HPFH)。此外， Gγ-和A γ-珠蛋白基因启动子区的突变也可导致HPFH。
突变类型
• 编码区的无义突变、移码突变和起始密码 突变：
地中海贫血的临床特征
小细胞低色素性溶血型贫血(中、重度)
黄疸
肝脾肿大 (脾大明显)
骨髓扩增
发育迟缓
合并感染 Bart’s 水肿胎(α地贫,宫内或出生后数小时内死亡)
地贫血液学分析
• 最常用的方法:
红细胞平均容积(MCV)、红细胞脆性试验、 Hb电泳联合检测进行筛查,发现异常者再 进行基因诊断。
地中海贫血的血液学表型特征
• 非编码区IVS-1和IVS-2突变
如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为＋。
• 影响转录的突变：
如-28，-29的突变影响基因的转录，表现为＋ 。
地贫的基因型与表现型
重型-地中海贫血＋/ ＋、0/ 0 、0/ ＋（纯合子或双重杂合子）
人类不同时期血红蛋白的组成
人血红蛋白的组成
• 胚胎期血红蛋白：
– – – – Hb Gower 1 （x2 e2 ） Hb Gower 2 (2 e2) Hb Portland (x2 g2) 即Hb Portland 1 另有少量Hb Portland 2 (x2 2)，Hb Portland 3 (x2 d2)
所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红 细胞体积小且低色素。过剩的游离α链形成α链包涵体，引起溶血性贫血，靠 输血维持生命。
实验室检查主要可见：①血红蛋白定量约为20-30g/L或更低；②红细胞体积细小，形 态不一，靶形红细胞较常见，网织红细胞增高；③血红蛋白电泳时HbA缺乏或严重缺 乏，HbF增高达30％以上（偶可达90%以上）。
• Hb电泳对轻型α-地贫无诊断意义
• 轻型α-地贫无HbBart′s(γ4)和HbH
• β-地中海贫血复合α-地中海贫血时多表现为β-地 中海贫血的特征,造成α-地贫漏检. • 地中海贫血合并缺铁性贫血造成地贫漏检.
谢谢！
亚能生物技术（深圳）有限公司 http://www.dbs-decipher.com
β－地中海贫血
MCV＜82fL、HbA2 ＞3.5%、HbF ＞3.5%、红细胞 形态异常，其中一项阳性者。
Normal
AA2
AE
Bart’s AF
HA
血红蛋白电泳图谱
+
1. 正常人HB 2. 轻型地贫 3. 异常HB E 杂合子 4. 新生儿HB Bart’s (γ4 )(地贫标 准型） 5. HB H (β4 )
RBC脆性 RBC 参数 MCV MCH 细胞形态变化
Hb电泳分析 Hb A2 () 或 () Hb Bart’s () Hb H () Hb E ()
贫血实验室诊断程序
贫血的形态学分类
贫血类型 MCV（fl） MCH(pg) MCHC(g/L) 特征
小细胞低色素性贫血
• 胎儿期主要血红蛋白：
– HbF （2 g2 ）
• 成人主要血红蛋白：
– HbA （ 2 2）约占血红蛋白总量96.5—97.5% – HbA2 （2 d2 ） 约占血红蛋白总量2.5—3.5% – HbF （ 2 g2）约占血红蛋白总量1%以下。
地中海贫血表型阳性诊断参考标准
α－地中海贫血 MCV＜82fL、HbA2 ＜2.5%、HbF ＜2%、红细胞形 态异常，其中一项阳性者。
1 2 3 4
500V, 25min
5
全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱
1、正常成人HbA2,无HbF区带; 2、成人HbA2升高,但HbF碱变性含量正常,图谱中不能扫描出HbF区带; 3、成人HbA2升高,HbF碱变性含量稍高于正常,图谱中可见浅染HbF区带; 4、成人HbA2升高,HbF碱变性含量高于正常,图谱中可见一浅染HbF区带; 5、成人HbA2升高,HbF碱变性含量明显高于正常,图谱中可见一清晰HbF 区带。
小红细胞正色素性贫血
<80
< 80 ＞94
<24
<24
200~300
320~360
珠蛋白合成异常，缺铁性 贫血，慢性失血
慢性肾功能衰竭等慢性病贫 血 骨髓呈巨幼红细胞特征
大红细胞正色素性贫血
>32 27～32
320~360
正红细胞正色素性贫血
80~100
320~360
急性失血，急性溶血，再生 障碍性贫血
地中海贫血检测
血液学分析
容敏逢
主要内容
• 筛查方案 • 血液学分析 • 地贫基因型与临床表现
地中海贫血筛查及产前诊断流程
被检对象（婚前或孕中期）
血液学分析（MCV，Hb A2变化） 排除地贫 地贫携带者
遗传咨询
双亲基因分析 胎儿产前诊断
遗传咨询，配偶检查
血液学分析（MCV Hb A2变化） 地贫携带者 排除地贫
●HbH病基因型可分成缺失型和非缺失型两种：
①缺失突变基因型：（-a3.7/--）、（-a4.2/--）及(-a2.7/--) ②非缺失突变基因型： （aaT/--）和（aaT/ aaT ）
a-地中海贫血临床类型
• 根据临床表现严重程度，可分成以下四种
静止型a-地贫 （aa／ a-）或（aa／a aT） 出生时脐血血红蛋白含少量Hb Bart's，-般少于5％ 患者无临床症状
轻型-地中海贫血A/ ＋、A/ 0 （杂合子）
患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色
素，MCV、MCH较低。
实验室检查可见：①血红蛋白定量约为90-120g/L或更低;②小细胞低色素性贫血，
MCH和MCV分别为20～22pg和50～70fl;③红细胞脆性降低；④约50%患者HbF增高，
HB Bart's胎儿水肿综 合征（--/--）
β-珠蛋白基因的突变
• -珠蛋白基因点突变：
β-珠蛋白基因最常见的突变类型。包括单碱基置换和数个碱基缺失或 插人突变。在中国β-地贫群体中
41/42（-TCTT）、 IV S-Ⅱ-654(C→T), CD17(A→T), -28（A→G） 和CD71/72（+A）等5种突变最常见，约占总突 变率90%以上
a-珠蛋白基因突变及其遗传学分型
●就遗传单体型而言a-珠蛋白基因突变可分成三类：
a-地贫2缺失 突变 a-地贫I缺失 突变
左缺失 （-a4.2） ，右缺失（-a3.7） 、-a2.7 基因型为（--）， 包括：--SEA、--THAI、-
-FIL及--HW
QS ，
a-地贫非缺失 基因型为（a aT） ，包括： a aCS， a a 突变 a a ws
Βιβλιοθήκη Baidu
血液学分析的敏感性和特异性
• RBC脆性假阴性 • 血常规检测(MCV)对静止型地贫有小概率的漏检
• • 静止型a-地贫患者多无临床症状 βE/N基因型患者的MCV十分接近筛查值这部分地贫患者极易漏诊
• 通过Hb电泳可对β-地贫进行明确诊断
• HbA2轻度增高诊断β-地贫的敏感性可达96.8%,特异性可达97.4%
轻型（标准型）a-地贫 出生时脐血血红蛋白Hb Bart's （a a /--）或（a-／a-） 占5％-10% 血红蛋白H病 （-a /--），或（a -/-），或（a aT /--），或 （a aT／a aT）
患者多无明显临床症状,实验室检 查可小细胞低色素性贫血，MCH 和MCV均较低．
出生时脐血Hb Bart's约占20％- 终生轻度至中度贫血和肝脾肿大 30％，此时HbH含量较低；但 等，但差异较大 .实验室检查可 出生后Hb Bart's含量迅速降低， 见小细胞低色素性贫血，红细胞 HbH含量逐渐增高。通常成年 内可见包涵体． 期患者HbH含量会持续在4%20%范围内。 Bart’s为主, 少量 Hb H 和HbPortland 患胎多于妊娠晚期（34～40周） 或产后数小时内死亡 ．
约为1％-3%，甚少大于5%；⑤HbA2量增高（达4%-8%）。
地贫的基因型与表现型
中间型-地中海贫血＋/ ＋、＋/ 0 （纯合子或双重杂合子）
患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸
等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。
实验室检查呈小细胞低色素性贫血症改变，血红蛋白定量部分患者可低至60g/L，但 也有患者高达100-120g/L本型患者通常属某些β-地中海贫血变异型纯合子，如日β+ 地贫（高F）／β+(高 F)地贫或两种不同变异型地中海贫血的双重杂合子，如β+地贫 ／δβ+地贫。
• 大片段缺失：
缺失突变涉及基因组上较大片段的缺失包括δβ-地贫和遗传性胎儿血红 蛋白持存症(hereditary persistance of fetal hemoglobin,HPFH)。此外， Gγ-和A γ-珠蛋白基因启动子区的突变也可导致HPFH。
突变类型
• 编码区的无义突变、移码突变和起始密码 突变：
地中海贫血的临床特征
小细胞低色素性溶血型贫血(中、重度)
黄疸
肝脾肿大 (脾大明显)
骨髓扩增
发育迟缓
合并感染 Bart’s 水肿胎(α地贫,宫内或出生后数小时内死亡)
地贫血液学分析
• 最常用的方法:
红细胞平均容积(MCV)、红细胞脆性试验、 Hb电泳联合检测进行筛查,发现异常者再 进行基因诊断。
地中海贫血的血液学表型特征