不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究_王文高
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粮食与油脂
2016 年第 29 卷第 2 期
不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究
王文高 1，朱天仪 1，王 波 2 （1. 上海良友（集团）有限公司技术中心， 上海 200333；
2. 上海金伴药业有限公司， 上海 201801） 摘 要：采用 HPLC–ELSD 法测定不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱（LPC）的含量，并通 过对原料、工艺、储存期等因素的研究来确定溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。浓缩磷脂产品中 LPC 含量约为 0.80%，大豆粉末磷脂中 LPC 含量为 1.35%，大豆磷脂一次醇溶产品中 LPC 含量为 2.87%，大豆磷脂二次醇溶产品中 LPC 含量为 12.88%。在 –20 ℃、避光储存条件下，各样品一年储 存期内 LPC 含量的变化不大。 关键词：溶血磷脂酰胆碱；含量；储存期
增加的水解、盐析以及活性炭脱色过程都是导致磷脂
发生水解转化为溶血磷脂的因素。LPC 含量的变化
提醒我们，提高产品中 PC 含量的同时，一定要注意所
采取的工艺条件对 LPC 含量的影响。
2.4.3 样品储存期 LPC 含量变化研究
我们按照药品的储存条件（–20 ℃，避光），分别研
究了大豆粉末磷脂、大豆磷脂一次醇溶产物、大豆磷
蒸发光检测（HPLC–ELSD）法测定不同形态大豆磷
色谱柱：Vennsil XBP Silica（4.6 mm×250 mm，
脂产品中溶血磷脂酰胆碱的含量，研究了不同形态大 5 μm）；
豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。
流动相：流动相 A：甲醇 – 水 – 冰醋酸 – 三乙胺
1 材料与方法
（85∶15∶0.45∶0.05，V∶V∶V∶V），流动相 B：正己烷 –
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 6 大豆粉末磷脂 LPC 图谱
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
取大豆浓缩磷脂 0.4 g，大豆粉末磷脂、大豆磷脂 一次醇溶提取产物、大豆磷脂二次醇溶提取产物 0.1 g， 精密称定，置 25 mL 量瓶中，用三氯甲烷 – 甲醇（2∶1， V∶V）溶解并定容到刻度。
不同形态的大豆磷脂产品，按 1.2 方法检测，外标
-46
法计算含量，结果见表 2。
表 2 不同形态大豆磷脂产品 LPC 含量
products. At –20 ℃，without light，the content of LPC of all samples had little change in one year of
storage period. Key words：LPC；content；storage period
0.00
0.00
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
-1$
图 2 A 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
-1$
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
中图分类号：TS201.2
文献标识码：A
文章编号：1008― 9578（2016）02― 0076― 03
大豆磷脂是大豆油精炼过程中毛油水化脱胶时 美国 Waters 公司。
的副产品，经进一步脱水、脱油纯化处理后制成黄色 固状大豆磷脂〔1〕。大豆粉末磷脂是一种混合磷脂，主
1.1.2 主要试剂 溶 血 磷 脂 酰 胆 碱 标 准 品（纯 度≥99%）：美 国
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 7 大豆磷脂一次醇溶提取产物 LPC 图谱
-1$
-1$
量从 55.70% 增加到 66.50%，但 LPC 含量也有了较大
的增幅，可能在于二次乙醇提取的工艺路线过长，其
2.4.1 原料中 LPC 含量分析 作为磷脂产业链产品的最初原料，我们比较了四
家公司的浓缩磷脂产品的 LPC 含量，市售的浓缩磷 脂产品中 LPC 含量大都在 1% 之下，唯一 LPC 含量 比较大的是 D 公司的样品，由于其存放期超过两年且 没有避光储存，不适宜的储存条件导致磷脂的大量水 解。LPC 含量的变化提醒我们，在采购磷脂原料时， 一定要注意浓缩磷脂的新鲜度，同时采购后的原料一 定要正确储存。 2.4.2 工艺条件对 LPC 含量影响
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 3 B 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
-1$
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
中的溶血磷脂含量增多，可使红细胞发生进行性的变 二次醇溶提取产物（PC 含量 66.50%）：大豆磷脂一
形和阳离子的通透增多，最后发生溶血〔4–6〕，故对其含 次醇溶提取产物经水解、盐析后，再经 95% 乙醇提取，
量应进行严格控制，溶血磷脂含量测定也被列为磷脂 活性炭脱色，取上清液浓缩干燥。
有关物质检查的重要项目。本文采用高效液相色谱 – 1.2 色谱条件
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 5 D 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
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粮食与油脂
2016 年第 29 卷第 2 期
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2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
图 1 LPC 标准曲线
2.2 精密度试验 取浓度为 200 μg/mL 的 LPC 对照品溶液，连续进
样 6 次，测得 RSD。结果见表 1。
表 1 精密度试验测定结果指浓源自 /（g/mL）平均值 RSD
标 测定 1 测定 2 测定 3 测定 4 测定 5 测定 6 /（μg/mL） /%
LPC 197.89 201.25 199.12 205.75 205.11 203.06 201.82 1.58
浓缩磷脂通过丙酮去油制备大豆粉末磷脂的过 程中，LPC 含量从 0.8% 增加到 1.35%。大豆粉末磷 脂通过 95% 乙醇萃取制备一次醇溶产物过程中，LPC 含量从 1.35% 增加到 2.87%。一次醇溶产物通过水解、 盐析，再经 95% 乙醇提取、活性炭脱色工艺制备二次 醇溶产物过程中，LPC 含量从 2.87% 增加到 12.88%， 相对于一次乙醇提取物，二次乙醇提取产物中 PC 含
由 上 表 可 以 看 出，LPC 的 RSD 为 1.58%，小 于 2%。结果显示，仪器精密度良好。 2.3 LPC 最低检测限
取线性关系项下的最低浓度标准溶液 20 μg/mL， 经 多 步 稀 释，信 噪 比 为 3∶1 时，LPC 最 低 检 测 限 为 25 ng。 2.4 不同形态大豆磷脂产品 LPC 含量的测定
类型
大豆浓缩磷脂（A 公司） 大豆浓缩磷脂（B 公司） 大豆浓缩磷脂（C 公司） 大豆浓缩磷脂（D 公司）
大豆粉末磷脂 大豆磷脂一次醇溶提取产物 大豆磷脂二次醇溶提取产物
LPC/%
0.76 0.80 0.80 4.28 1.35 2.87 12.88
-46
-46
1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
粮食与油脂
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样量 20 μL；柱温 40 ℃。
时间 /min
流动相 A/%
0
10
20
30
35
95
36
10
41
10
流动相 B/%
90 70 5 90 90
2 结果与讨论 2.1 线性关系考察
精 密 称 取 对 照 品 LPC，配 制 成 20、60、100、200、 300 μg/mL 的溶液。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐 标，进行 lg–lg 线性回归，得回归方程。
2. Shanghai Jinban Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shanghai 201801，China）
Abstract：This article investigated the content of LPC in different forms of soybean lecithin by HPLC– ELSD. The related factors influencing content changing，including materials，process and storage period，were also studied. The content of LPC was about 0.80% in soybean phospholipids concentrate， 1.35% in soy lecithin powder，2.87% in 1st alcohol soluble products and 12.88% in 2ed alcohol soluble
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 4 C 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
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2111110044668822000000000000000000000...........0000000000000000000000 0.00
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 8 大豆磷脂二次醇溶提取产物 LPC 图谱
脂肪乳剂中有着广泛应用〔3〕。由于磷脂产品在纯化、 （PC 含量 23.50%）：上海金伴药业有限公司；大豆磷
储藏过程中易发生水解，失去一分子脂肪酸后生成溶 脂一次醇溶提取产物（PC 含量 55.70%）：大豆粉末
血磷脂酰胆碱（LPC）、溶血磷脂酰乙醇胺（LPE），磷脂 磷脂经 95% 乙醇提取，取上清液浓缩干燥；大豆磷脂
LPC 回归方程：Y=1.15X+4.17，R2=0.997 0 由以上结果可见，LPC 在线性范围内，线性关系 良好。
䲎厶
7.50 7.00 6.50 6.00 5.50 5.00 4.50 4.00
0.000.200.40 0.600.801.00 1.201.40 1.601.802.00 2.20 2.40 ॗ䛻
The content of LPC in different forms of soybean lecithin
WANG Wen-gao1，ZHU Tian-yi1，WANG Bo2 （1. Technology Center of Shanghai Liangyou（Group）Co.，Ltd.，Shanghai 200333，China；
要含有磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰 Sigma 公司；甲醇、冰醋酸、三乙胺、正己烷、异丙醇等
肌醇（PI）等成分〔2〕，按照磷脂酰胆碱含量的多少，大 试剂为色谱纯。
豆粉末磷脂可以进一步提纯制成口服或注射用级别 1.1.3 试验原料
的大豆磷脂，作为药用辅料在脂质体制备和静脉注射
大豆浓缩磷脂：公司 A、B、C、D；大豆粉末磷脂
1.1 试验材料和仪器
异丙醇 – 流动相 A（20∶48∶32，V∶V∶V）。
1.1.1 主要试验仪器
按照下表比例进行梯度洗脱。
2695 型高效液相色谱仪（2424 型蒸发光检测器）：
检测器：蒸发光散射检测器；流速 1 mL/min；进
收稿日期：2015–12–09
2016 年第 29 卷第 2 期
脂二次醇溶产物一年的储存期实验，LPC 含量变化如
表 3 所示，
表 3 样品储存期 LPC 含量变化 /%
种类
实验前 LPC/% 实验后 LPC/%
大豆粉末磷脂
1.35
1.41
大豆磷脂一次醇 溶提取产物
2.87
3.03
大豆磷脂两次醇 溶提取产物
12.88
13.11
△ LPC/% 0.06 0.16
0.23
粮食与油脂
2016 年第 29 卷第 2 期
不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究
王文高 1，朱天仪 1，王 波 2 （1. 上海良友（集团）有限公司技术中心， 上海 200333；
2. 上海金伴药业有限公司， 上海 201801） 摘 要：采用 HPLC–ELSD 法测定不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱（LPC）的含量，并通 过对原料、工艺、储存期等因素的研究来确定溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。浓缩磷脂产品中 LPC 含量约为 0.80%，大豆粉末磷脂中 LPC 含量为 1.35%，大豆磷脂一次醇溶产品中 LPC 含量为 2.87%，大豆磷脂二次醇溶产品中 LPC 含量为 12.88%。在 –20 ℃、避光储存条件下，各样品一年储 存期内 LPC 含量的变化不大。 关键词：溶血磷脂酰胆碱；含量；储存期
增加的水解、盐析以及活性炭脱色过程都是导致磷脂
发生水解转化为溶血磷脂的因素。LPC 含量的变化
提醒我们，提高产品中 PC 含量的同时，一定要注意所
采取的工艺条件对 LPC 含量的影响。
2.4.3 样品储存期 LPC 含量变化研究
我们按照药品的储存条件（–20 ℃，避光），分别研
究了大豆粉末磷脂、大豆磷脂一次醇溶产物、大豆磷
蒸发光检测（HPLC–ELSD）法测定不同形态大豆磷
色谱柱：Vennsil XBP Silica（4.6 mm×250 mm，
脂产品中溶血磷脂酰胆碱的含量，研究了不同形态大 5 μm）；
豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。
流动相：流动相 A：甲醇 – 水 – 冰醋酸 – 三乙胺
1 材料与方法
（85∶15∶0.45∶0.05，V∶V∶V∶V），流动相 B：正己烷 –
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 6 大豆粉末磷脂 LPC 图谱
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
取大豆浓缩磷脂 0.4 g，大豆粉末磷脂、大豆磷脂 一次醇溶提取产物、大豆磷脂二次醇溶提取产物 0.1 g， 精密称定，置 25 mL 量瓶中，用三氯甲烷 – 甲醇（2∶1， V∶V）溶解并定容到刻度。
不同形态的大豆磷脂产品，按 1.2 方法检测，外标
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法计算含量，结果见表 2。
表 2 不同形态大豆磷脂产品 LPC 含量
products. At –20 ℃，without light，the content of LPC of all samples had little change in one year of
storage period. Key words：LPC；content；storage period
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5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
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图 2 A 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
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2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
中图分类号：TS201.2
文献标识码：A
文章编号：1008― 9578（2016）02― 0076― 03
大豆磷脂是大豆油精炼过程中毛油水化脱胶时 美国 Waters 公司。
的副产品，经进一步脱水、脱油纯化处理后制成黄色 固状大豆磷脂〔1〕。大豆粉末磷脂是一种混合磷脂，主
1.1.2 主要试剂 溶 血 磷 脂 酰 胆 碱 标 准 品（纯 度≥99%）：美 国
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 7 大豆磷脂一次醇溶提取产物 LPC 图谱
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量从 55.70% 增加到 66.50%，但 LPC 含量也有了较大
的增幅，可能在于二次乙醇提取的工艺路线过长，其
2.4.1 原料中 LPC 含量分析 作为磷脂产业链产品的最初原料，我们比较了四
家公司的浓缩磷脂产品的 LPC 含量，市售的浓缩磷 脂产品中 LPC 含量大都在 1% 之下，唯一 LPC 含量 比较大的是 D 公司的样品，由于其存放期超过两年且 没有避光储存，不适宜的储存条件导致磷脂的大量水 解。LPC 含量的变化提醒我们，在采购磷脂原料时， 一定要注意浓缩磷脂的新鲜度，同时采购后的原料一 定要正确储存。 2.4.2 工艺条件对 LPC 含量影响
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 3 B 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
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2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
中的溶血磷脂含量增多，可使红细胞发生进行性的变 二次醇溶提取产物（PC 含量 66.50%）：大豆磷脂一
形和阳离子的通透增多，最后发生溶血〔4–6〕，故对其含 次醇溶提取产物经水解、盐析后，再经 95% 乙醇提取，
量应进行严格控制，溶血磷脂含量测定也被列为磷脂 活性炭脱色，取上清液浓缩干燥。
有关物质检查的重要项目。本文采用高效液相色谱 – 1.2 色谱条件
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 5 D 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
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2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
图 1 LPC 标准曲线
2.2 精密度试验 取浓度为 200 μg/mL 的 LPC 对照品溶液，连续进
样 6 次，测得 RSD。结果见表 1。
表 1 精密度试验测定结果指浓源自 /（g/mL）平均值 RSD
标 测定 1 测定 2 测定 3 测定 4 测定 5 测定 6 /（μg/mL） /%
LPC 197.89 201.25 199.12 205.75 205.11 203.06 201.82 1.58
浓缩磷脂通过丙酮去油制备大豆粉末磷脂的过 程中，LPC 含量从 0.8% 增加到 1.35%。大豆粉末磷 脂通过 95% 乙醇萃取制备一次醇溶产物过程中，LPC 含量从 1.35% 增加到 2.87%。一次醇溶产物通过水解、 盐析，再经 95% 乙醇提取、活性炭脱色工艺制备二次 醇溶产物过程中，LPC 含量从 2.87% 增加到 12.88%， 相对于一次乙醇提取物，二次乙醇提取产物中 PC 含
由 上 表 可 以 看 出，LPC 的 RSD 为 1.58%，小 于 2%。结果显示，仪器精密度良好。 2.3 LPC 最低检测限
取线性关系项下的最低浓度标准溶液 20 μg/mL， 经 多 步 稀 释，信 噪 比 为 3∶1 时，LPC 最 低 检 测 限 为 25 ng。 2.4 不同形态大豆磷脂产品 LPC 含量的测定
类型
大豆浓缩磷脂（A 公司） 大豆浓缩磷脂（B 公司） 大豆浓缩磷脂（C 公司） 大豆浓缩磷脂（D 公司）
大豆粉末磷脂 大豆磷脂一次醇溶提取产物 大豆磷脂二次醇溶提取产物
LPC/%
0.76 0.80 0.80 4.28 1.35 2.87 12.88
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样量 20 μL；柱温 40 ℃。
时间 /min
流动相 A/%
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流动相 B/%
90 70 5 90 90
2 结果与讨论 2.1 线性关系考察
精 密 称 取 对 照 品 LPC，配 制 成 20、60、100、200、 300 μg/mL 的溶液。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐 标，进行 lg–lg 线性回归，得回归方程。
2. Shanghai Jinban Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shanghai 201801，China）
Abstract：This article investigated the content of LPC in different forms of soybean lecithin by HPLC– ELSD. The related factors influencing content changing，including materials，process and storage period，were also studied. The content of LPC was about 0.80% in soybean phospholipids concentrate， 1.35% in soy lecithin powder，2.87% in 1st alcohol soluble products and 12.88% in 2ed alcohol soluble
0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 4 C 公司浓缩磷脂 LPC 图谱
2000.00 1800.00 1600.00 1400.00 1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00
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2111110044668822000000000000000000000...........0000000000000000000000 0.00
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 ᬢ䬠 NJO
图 8 大豆磷脂二次醇溶提取产物 LPC 图谱
脂肪乳剂中有着广泛应用〔3〕。由于磷脂产品在纯化、 （PC 含量 23.50%）：上海金伴药业有限公司；大豆磷
储藏过程中易发生水解，失去一分子脂肪酸后生成溶 脂一次醇溶提取产物（PC 含量 55.70%）：大豆粉末
血磷脂酰胆碱（LPC）、溶血磷脂酰乙醇胺（LPE），磷脂 磷脂经 95% 乙醇提取，取上清液浓缩干燥；大豆磷脂
LPC 回归方程：Y=1.15X+4.17，R2=0.997 0 由以上结果可见，LPC 在线性范围内，线性关系 良好。
䲎厶
7.50 7.00 6.50 6.00 5.50 5.00 4.50 4.00
0.000.200.40 0.600.801.00 1.201.40 1.601.802.00 2.20 2.40 ॗ䛻
The content of LPC in different forms of soybean lecithin
WANG Wen-gao1，ZHU Tian-yi1，WANG Bo2 （1. Technology Center of Shanghai Liangyou（Group）Co.，Ltd.，Shanghai 200333，China；
要含有磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰 Sigma 公司；甲醇、冰醋酸、三乙胺、正己烷、异丙醇等
肌醇（PI）等成分〔2〕，按照磷脂酰胆碱含量的多少，大 试剂为色谱纯。
豆粉末磷脂可以进一步提纯制成口服或注射用级别 1.1.3 试验原料
的大豆磷脂，作为药用辅料在脂质体制备和静脉注射
大豆浓缩磷脂：公司 A、B、C、D；大豆粉末磷脂
1.1 试验材料和仪器
异丙醇 – 流动相 A（20∶48∶32，V∶V∶V）。
1.1.1 主要试验仪器
按照下表比例进行梯度洗脱。
2695 型高效液相色谱仪（2424 型蒸发光检测器）：
检测器：蒸发光散射检测器；流速 1 mL/min；进
收稿日期：2015–12–09
2016 年第 29 卷第 2 期
脂二次醇溶产物一年的储存期实验，LPC 含量变化如
表 3 所示，
表 3 样品储存期 LPC 含量变化 /%
种类
实验前 LPC/% 实验后 LPC/%
大豆粉末磷脂
1.35
1.41
大豆磷脂一次醇 溶提取产物
2.87
3.03
大豆磷脂两次醇 溶提取产物
12.88
13.11
△ LPC/% 0.06 0.16
0.23