血红蛋白测定及注意事项

（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。

然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。

（3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)
3.使用沙里氏血红蛋白计测定
沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。

（1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。

比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。

为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。

（2）具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。

②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。

③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。

操作时勿产生气泡,以免影响比色。

用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。

④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。

⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。

用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。

⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。

比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。

换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。

[注意事项]
1.取血前要做好充分的消毒。

2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。

洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。

作为学生练习，微量采血管可反复使用。

3.使用血红蛋白仪测定时，吸样管应插入试管底部，避免吸入气泡，否则会影响测试结果。

仪器连续使用时，每隔4小时要观察一次零点，即吸入文齐试剂，用“调零旋钮”使仪器恢复到零点。

仪器用完后，关机前要用清洗液清洗。

否则会影响零点的调整。

[实验结果]
报告该实验动物的血红蛋白浓度。

并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示。

[思考题]
血红蛋白的含量与年龄的关系？
影响血红蛋白含量的主要因素？※1.HiCN转化液：即文齐氏液，有标准商品出售。

也可配制：高铁氰化钾(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化钾（KCN）50 mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸馏水加至1000 ml。

过滤后为淡黄色透明液体，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加盖、冷暗处保存。

如发现试剂变绿、变浑浊则不能使用。

2.用分光光度计直接测定血红蛋白
（1）取血、血红蛋白转化和比色同前述1、2的方法，得到标本的吸光度A。

（2）根据标本吸光度A直接计算出血红蛋白浓度：
式中A：为波长540nm处标本吸光度。

44：为HiCN在波长540nm，光径1.0cm条件下的毫摩尔消光系数（L· mmol-1· cm-1）。

64485（mg）：为Hb的毫克分子量，即1 mmol·L-1 Hb溶液中的Hb毫克数。

1000：为将mg转变为g。

251：为血液稀释倍数。

因是通过分光光度计比色直接计算出血红蛋白浓度，因此分光光度计的波长和光程必须准确、灵敏度要高、线性好、无杂光，否则会影响结果的准确性。

故仪器的校正在测定中十分重要。

上述介绍的几种方法中，以分光光度计直接测定和比色法测定血红蛋白较为精确，但对分光光度计的精密程度要求较高，分光光度计校正起来较为麻烦。

沙里氏血红蛋白计测定操作简便适于基层单位，但准确性稍差。

血红蛋白计操作较为简便，因有标准的商品试剂出售，因此也比较精确，目前普遍被医疗单位使用。

HiCN法操作的注意事项是检验主管技师考试的部分内容，医学教育网搜集整理相关内容
供大家参考。

1、测定：在5ml HiCN转化液中，加血20μl，充分混合，静置5min后，在波长540nm 处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。

（2）绘制标准曲线：
采用HiCN参考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），在分光光度计上，波长540nm处，测定各种参考液的吸光度，以参考液血红蛋白含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，或求出换算常数K（K=SHb/ S A）。

根据样本吸光度从曲线上查出对应的
Hb，或用K值计算：
Hb（g/L）=K′A.
2、HiCN储存：棕色容器（在塑料容器中CN-丢失，测定结果偏低），有塞。

4°C保
存数月，不能在0 °C保存，试剂失效。

3、干扰：WBC过高或球蛋白过高，干扰检测结果。

解决办法：WBC过高可先离心后取上清比色；球蛋白过高可在比色液中加入少量固体NaCl或碳酸钾，混匀后溶液澄清再比
色。

4、氰化钾试剂处理：废液先以水1：1稀释，再加次氯酸钠35ml/L，充分混匀，放置15h以上，使CN-氧化成CO2和N2挥发，或水解成CO32-和NH4+，再排入下水道。

废液不能和酸性溶液混合，否则产生剧毒氰氢酸气体。