硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖要点介绍
多糖含量测定实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖含量测定的原理和方法。
2. 熟悉实验仪器的操作。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子。
多糖含量测定常用的方法有苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法等。
本实验采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，其原理是：在酸性条件下，多糖与苯酚发生缩合反应，生成紫色化合物，通过比色法测定其吸光度，从而计算出多糖含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 标准葡萄糖溶液（浓度已知）- 标准多糖溶液（浓度已知）- 待测多糖样品- 苯酚、硫酸、盐酸等试剂2. 实验仪器：- 紫外可见分光光度计- 电子天平- 恒温水浴锅- 移液器- 离心机- 烧杯、试管、容量瓶等四、实验步骤1. 准备标准曲线：- 取7支试管，分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL标准葡萄糖溶液，用蒸馏水定容至1mL。
- 每支试管加入0.5mL苯酚-硫酸混合液，混匀，置于恒温水浴锅中加热10分钟。
- 取出冷却，加入5mL蒸馏水，混匀。
- 以蒸馏水为空白，在波长620nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
2. 测定待测多糖样品：- 取3支试管，分别加入0.1mL待测多糖样品、0.1mL标准多糖溶液和0.1mL 蒸馏水，用蒸馏水定容至1mL。
- 每支试管加入0.5mL苯酚-硫酸混合液，混匀，置于恒温水浴锅中加热10分钟。
- 取出冷却，加入5mL蒸馏水，混匀。
- 以蒸馏水为空白，在波长620nm处测定吸光度。
3. 计算待测多糖含量：- 根据待测多糖样品的吸光度，从标准曲线中查得相应的葡萄糖浓度。
- 根据待测多糖样品的体积和浓度，计算待测多糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：- 标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.999。
2. 待测多糖含量的测定：- 待测多糖样品的吸光度为0.632，查得相应的葡萄糖浓度为0.5mg/mL。
3. 待测多糖含量的计算：- 待测多糖含量为0.5mg/mL。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定麦冬中麦冬多糖含量的比较研究
苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定麦冬中麦冬多糖含量的比较研究作者：张妍，刘太林来源：《现代食品》 2018年第18期摘要：比较苯酚- 硫酸法和蒽酮- 硫酸法测定麦冬多糖含量的差异，并对两种方法的测定条件进行优化。
结果表明：苯酚- 硫酸法最佳测定条件为苯酚质量分数6%、硫酸用量5 mL、反应温度50 ℃、反应时间20 min，测得麦冬中多糖含量为42.96%。
蒽酮- 硫酸法最佳测定条件为蒽酮- 硫酸用量4 mL、反应温度100 ℃、反应时间15 min，测得麦冬中多糖含量为38.56%。
在10 ～100 μg/mL范围内，苯酚- 硫酸法呈良好的线性关系（R2=0.999 1），明显优于蒽酮- 硫酸法线性关系（R2=0.996 4）；苯酚- 硫酸法测定麦冬多糖精密度、重复性和加样回收率均优于蒽酮- 硫酸法，在0 ～ 120 min 内稳定性较蒽酮- 硫酸法差别不大。
综合考虑，苯酚- 硫酸法与蒽酮- 硫酸法均适用于麦冬多糖成分的测定，但苯酚- 硫酸法准确性与稳定性更好，故在麦冬中麦冬多糖含量测定时可优先考虑苯酚- 硫酸法。
关键词：麦冬多糖；苯酚- 硫酸法；蒽酮- 硫酸法麦冬[Ophiopogon japonicas （Thunb.） Ker-Gawl]为百合科沿阶草属多年生植物麦冬的干燥肉质块茎，主要分布于四川、浙江及江苏一带[1-3]。
《本草汇言》中记载：麦门冬，味甘、微苦，性微寒，归心、肺、胃经，可为清心润肺之药，常与其他中药配伍，用于治疗肺燥干咳、津伤口渴，心烦失眠、内热消渴以及肠燥便秘等[4]。
麦冬的有效成分包括甾体皂苷、多糖、异黄酮和氨基酸等，其中麦冬多糖含量较高，其药理作用主要表现为抗肿瘤、抗心肌缺血、抗氧化、抗过敏、降低血糖、增强机体免疫、润肺平喘并保护外分泌腺等[5-8]。
植物多糖的测定方法主要包括苯酚 - 硫酸法[9-11]、蒽酮 - 硫酸法[12-14]、还原糖测定法[15-16]、高效液相色谱法[17-18]、酶法[19-20] 等，当前文献报道植物多糖测定方法以苯酚- 硫酸法和蒽酮- 硫酸法较为多见。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖要点介绍
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖要点介绍硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项
硫酸蒽酮法测定多糖含量的10条注意事项：
1. 蒽酮不稳定，需要避光操作，保存也需避光保存。
2. 80%硫酸通常指体积分数。
3. 在配制80%硫酸的过程中，必须将硫酸缓慢沿容器壁加入到水中，并用比玻璃棒不断搅拌。
4. 蒽酮不是很好溶解，仔细观察硫酸蒽酮溶液是否澄清，如果没有，可以超声或加热使其溶解，溶解后为淡黄色澄清溶液。
5. 水浴温度为100℃，需要拿温度计量。
6. 冰浴最好量温度，每次保持一致。
7. 硫酸蒽酮不要加入过慢，否则会形成沉淀，以内局部硫酸被稀释，蒽酮会析出，呈乳白色。
加入后应及时涡旋或者其他方式混匀。
8. 冰浴不要太着急，让试管先适应一下温度的变化，否则可能会裂开，水会进入到试管中。
9. 试管要具塞，否则硫酸可能吸收空气中的水，而且便于混匀。
10. 糖的浓度设定要合适，使吸光度值落在0.2-0.8之间。
*有问题可联系我，一起探讨科学实验。
多糖的定性实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖的定性分析方法。
2. 了解多糖的化学性质及其与特定试剂的反应。
3. 学会使用苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法和DNS法对多糖进行定性检测。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的大分子碳水化合物，广泛存在于自然界中。
多糖具有多种生物学功能，如储存能量、提供结构支持和调节免疫反应等。
本实验通过苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法和DNS法对多糖进行定性检测，分别利用多糖与特定试剂反应产生的颜色变化来判断多糖的存在。
1. 苯酚-硫酸法：多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物。
在波长490nm左右处，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
2. 蒽酮-硫酸法：多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与蒽酮反应生成紫色衍生物。
在波长590nm左右处，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
3. DNS法：在碱性条件下，DNS试剂与还原糖发生显色反应，生成橙红色复合物。
在540nm波长处，该复合物的吸收值与还原糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定还原糖的含量。
三、实验材料及试剂1. 实验材料：小麦面粉、玉米淀粉、海藻糖、葡萄糖、果糖等。
2. 实验试剂：苯酚、浓硫酸、蒽酮、硫酸、DNS试剂、氢氧化钠、无水乙醇等。
3. 仪器：分光光度计、移液器、容量瓶、试管等。
四、实验步骤1. 苯酚-硫酸法（1）取一定量的多糖样品，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
（2）取1mL样品溶液，加入5mL苯酚和7mL浓硫酸，混匀，放置5min。
（3）在490nm波长处，用分光光度计测定吸光度。
2. 蒽酮-硫酸法（1）取一定量的多糖样品，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
（2）取1mL样品溶液，加入5mL蒽酮和7mL浓硫酸，混匀，放置5min。
（3）在590nm波长处，用分光光度计测定吸光度。
蒽酮- 硫酸法与苯酚- 硫酸法测定苦瓜多糖的比较
蒽酮- 硫酸法与苯酚- 硫酸法测定苦瓜多糖的比较作者：张洁媛，张丽，宁恩创来源：《现代食品》 2018年第22期摘要：为了比较苯酚- 硫酸法与蒽酮- 硫酸法在测定苦瓜多糖中的应用效果，采取单因素实验和正交试验确定出最适合的测定条件，主要比较了两种方法的精密度、稳定性、重复性和回收率，通过实验结果算出两种方法各自的RSD 值，比较得出结论。
关键词：苦瓜多糖；蒽酮- 硫酸法；苯酚- 硫酸法1 材料及方法1.1 材料基本材料苦瓜粉，颜色为淡黄绿色，易溶于水，目数在100 ～ 150 目，不含任何添加剂和防腐剂；试剂选择蒽酮、苯酚、硫酸和无水葡萄糖；仪器选择电子天平、紫外可见分光光度计、电磁炉。
其余的试剂和仪器按照基本配备。
1.2 苦瓜多糖的提取苦瓜多糖是苦瓜中的一种有效活性成分，在对苦瓜多糖提取方法的研究中，使用较多的是热水浸提法，以热水浸提，然后用乙醇进行沉淀。
超声波提取法，操作方法与常规方法相同，只需增加使用超声波仪器，无需其他试剂，便可使多糖的提取率提高，粗多糖中多糖的含量也提高。
在本次实验中，选取超声波浸提法对苦瓜多糖进行浸提[1]。
超声波提取苦瓜多糖的主要过程为：苦瓜粉→乙醇回流→超声波浸提→过滤→浓缩→醇析→洗涤→干燥→苦瓜粗多糖。
1.3 苯酚- 硫酸法测定苦瓜多糖糖在浓硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在最大吸收波长处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈正比关系，可以利用分光光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。
1.3.1 单因素实验影响苯酚- 硫酸法测定苦瓜多糖的因素有5% 苯酚的量、浓硫酸的量、反应时间、最大吸收波长，结合4 个因素的影响设计单因素实验，确定最适的条件。
1.3.1.1 5% 苯酚试剂的量取11 支具塞试管，其中一支做空白。
10 支分别加入0.5 mL 的0.408 4 mg·mL-1 的样品，加入1.5 mL的蒸馏水，空白加入2 mL 蒸馏水，所有试管中再加入1 mL 的苯酚试剂，再加入6 mL 的浓硫酸；1 号、2 号试管加入0.6 mL 的5% 苯酚试剂；3 号、4 号试管加入0.8 mL 的5% 苯酚试剂；5 号、6 号试管加入1.0 mL 的5% 苯酚试剂；7 号、8 号加入1.2 mL 的5% 苯酚试剂；9 号、10 号加入1.4 mL 的5% 苯酚溶液。
资料多糖含量测定的各类方式优缺点
苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
二、试剂1、浓硫酸：分析纯，%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期贮存。
3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期贮存。
6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期贮存。
7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，别离吸取、、、、、、及，各以蒸馏水补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以水按一样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少量5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少量5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一路到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
2）离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液维持18毫升左右。
3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸以后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
4）定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
定容至25毫升的容量瓶中。
吸取 ml的样品液，以蒸馏补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。
动物多糖--总糖的测定
1.硫酸蒽酮法（1）样品处理：称取0.1g样品（动物），以E/S比为1/25的比例，加入0.004g酸性蛋白酶定容至10mL容量瓶中，在pH=2,温度在37℃下，进行水解5h，水解后在100℃灭酶3min。
将经酶处理过的样品用5mL注射器经0.45um针孔滤膜过滤，收集滤液，并取1mL 滤液定容至50mL容量瓶中待用。
（2）紫外分光检测：准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容到100ml后，分别取出1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml,配成了浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml 、80ug/ml、100 g/ml, 以蒸馏水做对照空白，各取1ml于试管中，再加入4ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几只试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴锅中，为防止水分蒸发，应在试管口上加塞。
自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却。
然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长620nm有最大吸收峰，选择620nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色。
其标准曲线制作如表1.1 所示：表1.1 葡萄糖标准曲线结果标样号浓度（ug/ml）吸光度(ABS)1 20.000 0.067282 40.000 0.257233 60.000 0.438604 80.000 0.589235 100.000 0.74802多糖含量（%）=（样品浓度×稀释倍数×样品体积）/式样称重量×100%。
2．苯酚-硫酸法（1）标准曲线的制备: 准确称量干燥至恒重的葡萄糖标准品0.020g,置于体积500mL的容量瓶中定容并摇匀,得到葡萄糖的标准溶液。
以2.0mL蒸馏水作为空白样,依次取0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, l.0mL, 1.2mL,1.4mL, 1.6mL,1.8mL 葡萄糖标准溶液,用蒸馏水补足至2.0mL,在每个样品中按顺序加入浓度为6%的苯酚溶液l.0mL,98%的浓硫酸5.0mL,静置10min后摇匀,室温下放置20min,再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长490nm有最大吸收峰，选择490nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色，测得吸光值。
测定多糖的方法
测定多糖的方法：蒽酮—硫酸法，苯酚—硫酸法，比色定量法，纸色谱法，离子交换色谱法，酶法，原子吸收法，HPLC法，DNS（还原法），磷钼比色法。
一、苯酚—硫酸法1、原理：糖在浓硫酸作用下脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物。
在10～100mg范围内其颜色与糖的含量成正比。
在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖和多糖的测定方法。
简单，灵敏度高，实验室基本不受蛋白住存在的干扰。
2、实验药品浓硫酸苯酚3苯酚溶液的配制（1）先配制80%苯酚溶液，然后称取80.0g苯酚加20.0g水，使之溶解，置于冰箱中，避光长期保存。
取80%苯酚37.5mL定容到500Ml.配制成60%的苯酚溶液，避光保存。
（2）取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集182℃馏分。
称取7.5g加水150mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
二、蒽酮—硫酸显色法1、实验药品蒽酮硫酸2、溶液的配制称取蒽酮0.2g，加浓硫酸100mL混均即可（现用现配）三、高效液相色谱法多糖溶液进行高效液相色谱，利用TSK—GEL G4000PW柱.RI—10A示差折光检测器，以双蒸馏水为流动相，溶液浓度为0.5mg/Ml,进样量50μL，根据峰形判断样品的纯度。
四、DNS法为排除还原性单糖的干扰，可采用DNS（3,5—二硝基水杨酸）比色法测定还原糖的含量。
1、原理在碱性溶液中3,5—二硝基水杨酸与还原性糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系。
再将通过硫酸—苯酚，或者蒽酮—硫酸法得到的总糖结果减去还原糖，即得较准确的多糖含量。
五、地衣酚—硫酸法溶液的配制称取400mg地衣酚（3，5—二羟基甲苯）溶于155mL浓盐酸中，另加45mL含0.33%三氯化铁的0.01mol·mL_1盐酸，临用前配制。
苯酚—硫酸法和蒽酮—硫酸法的缺陷：首先葡萄糖是单糖而植物多糖的组成是多样的，只是用葡萄糖作为参照不确切，其次，显色试剂的不专属单糖的干扰严重，实际上测得的结果是总糖的结果。
实验一硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸苯酚法测多糖含量The pony was revised in January 2021实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求? 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．2．方法原理3．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
4．3．主要实验仪器及材料5．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
6．４．掌握要点7．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
8．５．试剂配制9．1）葡萄糖标准液的配制10．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
11．2）90%苯酚液的配制12．?准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤7.管号 0? 1 2 3 4 5 6 78.葡萄糖9.10.苯酚液11.浓硫酸?12.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL 软件求得回归方程13.2）待测样品多糖的测定与计算14.将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1. 目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2•方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3•主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
5 .试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL,即得90 %苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1标准曲线的制作步骤AvV 口吕号0 1 2 3 4 5 6葡萄糖0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表 2方法在操作，先在冰水浴中加入 0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20mi n, 取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零，在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用 exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
多糖的实验实验报告
一、实验目的1. 学习多糖的提取方法；2. 掌握多糖的鉴定方法；3. 了解多糖的理化性质。
二、实验原理多糖是由许多单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物，广泛存在于自然界中。
多糖在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用。
本实验通过提取植物中的多糖，并对其进行鉴定，以了解多糖的性质。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：干海带、干紫菜、大枣等；2. 实验试剂：纤维素酶、1mol/L氯化钙溶液、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、葡萄糖、DE-23、DE-41、Sepharose(2B 4B 6B)等；3. 仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计等。
四、实验步骤1. 多糖提取（1）将干海带、干紫菜、大枣等植物材料分别研磨成粉末；（2）将粉末加入适量蒸馏水，搅拌均匀；（3）将混合液在80℃条件下加热提取2小时；（4）提取液过滤，滤液即为多糖粗提液。
2. 多糖鉴定（1）硫酸蒽酮法测定多糖含量①配制硫酸蒽酮试剂：称取蒽酮0.1g，溶于100mL 98%硫酸中；②取1mL多糖粗提液，加入5mL硫酸蒽酮试剂，混匀；③在60℃水浴中反应30分钟；④以蒸馏水为空白对照，在620nm波长处测定吸光度；⑤根据标准曲线计算多糖含量。
（2）苯酚-硫酸法鉴定多糖①配制苯酚-硫酸试剂：称取苯酚10g，溶于100mL 95%乙醇中；②取1mL多糖粗提液，加入5mL苯酚-硫酸试剂，混匀；③在60℃水浴中反应10分钟；④以蒸馏水为空白对照，在490nm波长处测定吸光度；⑤根据标准曲线计算多糖含量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取通过提取实验，从海带、紫菜、大枣等植物中成功提取出多糖。
2. 多糖鉴定（1）硫酸蒽酮法测定多糖含量通过硫酸蒽酮法测定，海带、紫菜、大枣中多糖含量分别为：1.5%、2.0%、1.8%。
（2）苯酚-硫酸法鉴定多糖通过苯酚-硫酸法鉴定，海带、紫菜、大枣中均存在多糖。
六、实验结论1. 通过提取实验，成功从海带、紫菜、大枣等植物中提取出多糖；2. 通过硫酸蒽酮法和苯酚-硫酸法鉴定，证实了提取物中含有多糖；3. 本实验为多糖的提取与鉴定提供了理论依据和方法指导。
硫酸苯酚法测多糖含量
硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量，如1型。
2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存可达半年。
3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6. 实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3. 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以1.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 （mL）蒸馏水（mL ）0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（mL）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 3 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在0.1——0.3之间。
比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较
苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较一、本文概述香菇多糖作为一种重要的生物活性物质，近年来在食品、医药等领域的应用日益广泛。
准确测定香菇多糖的含量对于其质量控制和应用研究具有重要意义。
目前，苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法是常用的两种测定香菇多糖含量的方法。
本文旨在对这两种方法进行比较研究，探讨它们的优缺点和适用范围，为香菇多糖的测定提供更为准确、可靠的方法依据。
本文将简要介绍苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法的基本原理和操作步骤。
随后，通过实验对比两种方法在测定香菇多糖含量时的准确性、稳定性和重复性，评估它们的优劣。
还将探讨影响两种方法测定结果的因素，如样品处理、反应条件等，并提出相应的改进措施。
本文的研究结果将为香菇多糖的含量测定提供更为全面、深入的理论依据，有助于推动香菇多糖在食品、医药等领域的应用发展。
也为其他多糖类物质的含量测定提供参考和借鉴。
二、苯酚硫酸法测定香菇多糖含量苯酚硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，因其操作简便、灵敏度高而广泛应用于食品、医药等领域。
该方法基于多糖在浓硫酸的作用下，能脱水生成糠醛或其衍生物，这些衍生物与苯酚能发生显色反应，生成的有色化合物在特定波长下具有最大吸收，从而可通过比色法测定多糖的含量。
在测定香菇多糖含量的过程中，我们首先需要制备香菇多糖的提取液。
将香菇干燥、粉碎后，用适宜的溶剂（如热水、稀碱等）进行提取，得到多糖的粗提物。
然后，将粗提物进行纯化，去除其中的杂质，得到较为纯净的多糖。
接下来，按照苯酚硫酸法的操作步骤，将多糖溶液与苯酚-硫酸试剂混合，并在沸水浴中加热一定时间，使多糖完全脱水生成糠醛衍生物。
然后，将反应液冷却至室温，用分光光度计在特定波长下测定其吸光度值。
为了得到准确的测定结果，我们需要绘制标准曲线。
选取一系列不同浓度的标准多糖溶液，按照上述方法进行处理，测定其吸光度值，并绘制出标准曲线。
通过比较样品溶液的吸光度值与标准曲线，即可计算出香菇多糖的含量。
硫酸苯酚法测多糖含量
硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量，如1型。
2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存可达半年。
3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6. 实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
总多糖含量测定方法
总多糖含量测定方法
总多糖的含量测定方法有多种，其中包括苯酚-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸比色法、蒽酮-硫酸法等。
1. 苯酚-硫酸法：苯酚-硫酸试剂可与游离的或多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490nm波长处、戊糖及糖醛酸在480nm 波长处有最大吸收，吸收度与糖含量呈线性关系。
2. 3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）：3，5-二硝基水杨酸与多糖水解后的还原糖生成有色物质进行测定。
这种方法是在碱性条件下显色，较准确测定还原糖与总糖的含量从而求出多糖的含量，可消除还原性杂质的干扰。
3. 蒽酮-硫酸法：多糖与硫酸发生脱水反应，生成糠醛或其衍生物，与蒽酮试剂缩合生成有色物质进行测定。
此外，间羟基联苯法也是一种常用的多糖中糖醛酸含量测定方法，该法较硫酸咔唑法受中性糖残基的干扰更小。
另外还有超氧阴离子清除率和羟自由基清除率的检测方法、水分的检测方法等。
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硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖
【实验原理】
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】
1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：
（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】
1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。
由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。
式中：C一标准方程求得糖量（ug）
α一吸取样品液体积（mL）
V－提取液量（mL）
n一稀释倍数
W一组织重量（g）
（二）蒽酮法测定可溶性糖
【实验原理】
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应X 所以用愈酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用意酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与意酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行比色。
【实验仪器及试剂】
1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20ml刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：
（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）浓硫酸（比重1.84）
【实验步骤】
1．标准曲线的制作：按方法一标准曲线的制作方法加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
2．可溶性糖的提取同方法一第二步。
3．显色测定：吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。
4．计算可溶性糖的含量，计算公式同方法一。