Rh血型系统及检测-1

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Rh血型命名 Fisher-Race假说和命名：1943年Fisher使用Race提供的4种Rh血型抗 体，发现其中两种是对应的，识别的是等位基因编码的抗原称之 为C和c,而另外两种抗体识别的抗原显示不是等位基因编码的称 之为D和E。Fisher设想它们是紧密连锁的3个基因编码；D或d、 C或c、E或e抗原，并由此可组成8个不同的基因复合物或单倍体。 之后又出现了抗-e,支持Fisher假说，但始终未发现-d。目前CDE 表达和ISBC规范的字母/数字和数字量表达方式同时使用。 Winer假说 字母数字表述：Rosenfield等人1962年提出一种更适合电子计算机语言 的字母/数字方式来表达Rh血型方式。抗D和抗Rh表述为抗 Rh1,D+红细胞为Rh:1,D-为Rh:-1,等位基因表示为R1和R-1。传统 的CDE、Rh-Hr和ISBT规范的以字母、数字方式对Rh基因复合物 的表述以及其频率，见表1
• D抗原分类：根据D抗原的数量和质量不同以及抗原性不 同，将D抗原分类为5种。 • （1）D：常见的D抗原。 • （2）弱D：只是D抗原量少，质无变化，现称之为DU， 不同于传统的DU，传统的DU包括D抗原量减少和质量变 化的红细胞。 • （3）表位不完全型D（Partial D）D抗原数数目基本正常， 但缺失正常D抗原上部分抗原表位。 • （4）表位不完全型弱D：缺失部分D抗原决定簇同时D抗 原数目也减少。 • （5）增强D：D抗原数数量增多，抗原性大大加强。
Rh血型系统及检测技术
湖南省人民医院 欧阳显楚
概
述
• Rh血型在红细胞血型系统中序列为4，符号为RH。数字 表示为004。ISBT现已确定的Rh血型抗原有46个，其中D、 C、E、c、e抗原分别表示为RH1.RH2.RH3.RH4.RH5或 004001，004002，004003，004004，004005. • 人类Rh血型基因位于染色体IP36.13-P34.3上，现已明确 Rh血型的双结构基因（two structure RH genes）摈弃传 统假说，即Fisher-Race的紧密连接的3个基因位点C、D、 E基因假说和wienerr Rh-Hr多等位基因位点的单基因假说。 由于Fisher-Race CDE命名能够简单明了表述Rh血型系统， 且在文献中及日常血型工作中也更为人们所熟悉，故Rh 血型CDE表述和ISBT规范的数字、字母及6位数字表同时 应用，而不再使用Rh-Hr的表达方式。
• 表1 Rh 基因复合物三种表述及频率 • 基因 复合物 频率 ---------------------------------------------------------------------------------• CDE Rh-Hr 字母/数字 英国 中国(广东人) ---------------------------------------------------------------------------------• DCe R1 Rh1,2,-3,-4,5 0.4205 0.7292 • dce r Rh-1,-2,-3,4,5 0.3886 0.0232 • DcE R2 Rh1,-2,3,4,5 0.1411 0.1870 • Dce R0 Rh1,-2,-3,4,5 0.0257 0.0334 • dcE r” Rh-1,-2,3,4,-5 0.0119 0.0000 • dCe r’ Rh-1,2,-3,-4,5 0.0098 0.0189 • DCE Rx Rh1,2,3,-4,-5 0.0024 0.0041 • dCE Ry Rh-1,2,3,-4,-5 0.0000 0.0036
Rh血型基因
• 编码Rh血型抗原为两个高度同源的基因 RHD基因和RHCE基因，RHD编码D抗原， RHCE编码Cc/Ee抗原。RHD抗原阳性者的 人有RHD和RHCE基因，而RHD阴性的人 绝大部分只有RHCE基因无RHD基因，或 少部分为RHD阴性者有无功能的RHD基因， 因此不存在d抗原，也无抗-d抗体。RHD和 RHCE基因均含有10个内含子和10个外含 子，其两基因碱基数量及排列基本是一致 的。
在60年代中期，人们发现孕妇D抗原阴性， 胎儿RhD阳性。在胎儿出生后很短时间内 母亲被注射抗D免疫球蛋白，能够防止由于 RhD血型不相容妊娠所导致的母亲被D抗原 免疫，有效地预防胎儿新生儿溶血病 （HDN）。这样，在Levine和他的同事发 现了HDN的病因并能够成功地采取预防措 施，这经过了1/4世纪左右的时间。
Rh血型抗原
• Rh血型基因编码两条多肽，即RHD编码D抗原多肽， RHCE基因编码CcEe多肽，两条多肽均为416个氨基酸组 成，贯穿红细胞膜12次，成6个环，NH2端和COOH端均 在细胞浆中。应用分子生物学技术和单克隆抗D试剂研究 u 结果，摈弃了传统的D D variant和Dmosaic等几种表示弱 D抗原的方式。现将RHD抗原分为5种，分别是：（1）D正常D抗原（2）弱D(WeakD）-抗原质正常而量少的RhD抗 原（3）不完全D-抗原(partial D)数目基本正常，缺少部分D 抗原表位，（4）不完全弱D(partial weak D)型抗原数量少同 时缺少抗原决定簇的D抗原（5）增强性D-(elevated D) D抗 原在数量上增加很多，抗原性增强。Rh血型抗原只存在 于红细胞膜中，不存在于其他组织细胞膜、体液和分泌液 中。
Rh血型抗体
• Rh血型抗体是妊娠、输血或其他明确原因 产生的同种异型免疫抗体。极少见RH血型 自然发生的抗体。自身免疫性溶血性疾病 体内可发现Rh自身抗体。人源淋巴细胞杂 交瘤技术制备的RH血型单克隆抗体已被用 于临床常规血型试剂，也被应用于Rh血型 抗原表位的研究。
Rh血型功能
• Rh血型抗原多肽在红细胞膜上发挥结构和 功能蛋白的作用，即维持红细胞膜结构完 整性，同时发挥着阳离子膜转运通道的作 用，以及可能发挥着磷脂酰丝氨酸在细胞 膜双层间运动的催化作用。
双结构基因模型
• Tippert在1986年提出Rh血型的双结构模型: 一个基因编码D抗原,另一个编码CcEe抗原; 一些少见的Rh复合物即Rh抗原不正常表达 的原因被认为是基因的突变或两等位位点 不交换等,之后分子生物学研究大量结果证 实了Tippert提出的Rh血型双结构基因模型 (two structural Rh gene models),见图.
D抗原
• D血型抗原 ISBT表述为RH1或004001。发生频率在高加索人约为 85%，黑人为92%，亚洲人和土著美国人99%以上。D抗原只存在于 红细胞膜（包括脐带血红细胞）不存在于其它组织细胞中，体液和分 泌液中也无D抗原。D抗原的表述有量的变化和质的变化。 • D抗原量的变化表现其抗原性的强弱。表型D/D抗原量最多，抗原性 最强，而弱D抗原量少，最弱的抗原是Del，要通过试验确定Del抗原 性。每个红细胞D抗原数为普通D表型1.0×104～3.3×104，弱D表型 2.0×102～1.0×104，增强型D表型7.5×104～4.5×104。在C抗原 存在时，D抗原性减弱DcE/DcE红细胞的D抗原性强于DCe/DCe红细 胞。对一些常见的红细胞的D抗原强度序列大致是：DcE/DcE＞ DCe/DCe＞DcE/dce（见正文），D抗原的质变主要是指D抗原表位 数目减少。RH基因变异导致D抗原表位部分缺失，大多数表现为抗原 性减弱，但部分抗原性正常增强。该类红细胞称之D抗原性表位不完 全型红细胞（Partial D red Cells）。D抗原性表位不完全红细胞也为 D阳性，但是有D表位不完全型红细胞的人可能由输血后妊娠产生针 对其红细胞缺失的抗原表位的抗体。
• 1、RH血型抗原由两个基因编码，RHD编码D抗原， RHCE编码Cc/Ee抗原。 • 2、RHD阳性人有RHD和RHCE基因，RHD阴性人大部份 只有RHCE基因无RHD基因，但少部分人有无功能的RHD 基因。 • 3、RHD和RHCE基因均为10个外含子和10个内含子。 • 4、RHD无等位基因，既无d基因，也必然无d抗原和-d抗 体。 • 5、现在已经摈弃了RH血型基因两个假说： • （1）Fisher-Races:C,D,E三个紧密连接的基因位点学说。 • （2）wieners:Rh-Hr单一基因的多等位基因假说。
RH血型检测
• 一、血清克隆抗D检测D抗原 • 原理：由细胞培养而得的lgM人类免疫球蛋白单克隆抗体，适合于玻 片法和试管法，用来鉴定人Rh血型系统中的D抗原。 • 操作步骤（试管法）： • 1、用等渗盐水配制3%～5%待检红细胞悬液。 • 2、在相应标记的试管中加一滴血清克隆抗D试剂和一滴红细胞悬液。 • 3、1000rpm(150×g)离心2分钟或3000rpm（1000×g）离心20秒。 • 4、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果。 • 5、若反应为阴性、弱阳性或可疑，20摄氏度孵育15分钟。 • 6、1000rpm（150×g）离心2分钟或3000rpm（1000×g）离心20秒。 • 7、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果。
D抗原与临床
• D抗原、抗体与输血的关系仅次于ABO血型，RhD阴性人接受阳性血 后，至少20%要对D抗原发生致敏，在第二次体内接触（再次输注Rh 阳性血）该抗原则会发生溶血反应。RhD阴性妊娠妇女的胎儿是阳性 时，可能胎儿红细胞通过胎盘进入母体，RhD抗原致敏母体，该妇女 再妊娠时，就可能发生新生生溶血病。 • ABO-HDN将近—半发生于第一胎。Rh-HDN的第一胎往往不发病， 除非母亲曾接受过Rh阳性血或第一胎是Rh阳性而且母亲已产生了对 抗以后婴儿红细胞的抗体。 • 西方国家妊妇Rh-HDN约占全部新生儿1/180。ABO-HDN发病率约为 1/40，但症状比Rh-HDN较轻。 • 卫生部制定的《临床输血技术规范》规定，从2000年10月1日起，每 个病人均要检查Rh(D)血型，这是确保临床输血安全有效的又一项重 要举措。各单位要认真落实《规范》精神。采供血机构也要适应这一 新形势，开展Rh血型检测及HDN的有关实验室检查，确保病人的安 全。
D基因 D阳性（RH：1） X D抗原多肽 无D基因 D阳性（RH：-1）
Baidu Nhomakorabea
CE基因
Cc和Ee抗原多肽 CE基因
Cc和Ee抗原多肽 无效D基因 X 不编码D抗原多肽 Cc和Ee抗原多肽 CE基因
图 RH双结构基因—Two Structural Rh Geneg
(1986年Tippett提出，cDNA，PCR技术证实)
历史和命名
Rh血型发现和历史： 1939年Levine 和Stetson发现一例流产死胎妇女的血清凝集其丈夫红细 胞，也凝集ABO血型相容80%献血者的红细胞，实验表明该红细胞抗原 不同于当时已发现的人类ABO、MN、和P血型抗原。他们认为是该妇女 被胎儿携带的源自父亲的抗原所免疫，产生的抗体与父亲红细胞反应， 也是该抗体导致胎儿溶血死亡。1940年Landsteiner和Wiener用恒河猴红 细胞免疫兔（后来用豚鼠），产生的抗体与恒河猴红细胞反应，也凝集 85%的白人的红细胞。同年，Wiener和Peter通过实验认为Levine和 Stetson发现的血清抗体和其他一些输用ABO血型相容血液之后，发生输 血反应的病人血清中抗体与抗-Rh是一致的。但两年后的1942年，Fisk 和Foord确证动物和人抗-Rh是不同的特异性：所有新生儿红细胞，用人 抗-Rh确定的不论是Rh阳性或者Rh阴性，与动物抗-Rh反应均为阳性。 然而，又经过20年时间，证明动物和人抗-Rh识别的是不同抗原。1963 年Levine提议将动物抗-Rh识别的抗原命名为LW,以纪念Levine和Wiener 的工作。考虑已发表的成千上万篇文章，人们已形成习惯，故将Levine 和Stetson发现的人抗体所识别的抗原仍称之为Rh抗原。目前已明确Rh 和LW是不同的血型系统，Rh系统序列为4，LW序列为16，各具有不同 的的抗原，各自编码基因分别位于染色体第1和19条上，基因已被克隆 出来。