麻风分枝 杆菌的实验室检查

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麻风分枝杆菌的 实验室检查
艾滋病性病皮肤病防治研究所
一、临床意义
(1 )
麻风病人的诊断; (2) 麻风病人的疗效观察; (3) 确定三联化疗治疗方案; (4) 判断预后、确定复发; (5) 科研。如鼠足垫接种、药 物筛选等。
二.取材部位的选择

( 1 )常规查菌部位 : 眉弓、耳垂、 下颌、皮损。 ( 2 ) 结节取中央、斑块取边缘 交界处。 (3)不要选择冻疮、溃疡、裂口 和结痂部位。
平均每视野有100-1000条ML

(4) BI指数(细菌指数)计算公式: 各涂膜BI总和 BI (细菌指数)= 涂膜数

(5)菌团细菌数的估计方法:

细菌计数时,经常会遇到菌球 或菌团,因此需按照菌团或菌束 的大小估计其细菌数。一般大菌 球约百条细菌,中菌球约 50 条细 菌,小菌球约 20 条细菌。能直接 计数的尽量直接计数。
麻风病人面部温度示意图
耳垂取材操作图
组织液涂片操作图
五.染片

(1)染液配制: A 石碳酸复红液,取碱性复红4G,溶于 95% 酒精 100ML 中制成饱和液。再取饱和液 10ML与5%石碳酸液90ML混匀即成。 B 1%的盐酸酒精,取浓盐酸1ML,70%酒 精99ML混匀即成。 C 碱性美兰液,取美兰 2G,溶于 95% 酒 精100ML中制成饱和液,再取饱和液30ML加入 蒸馏水100ML及10%的氢氧化钾0.1ML混匀即成。
(3) 雷德里计数标准:

0=观察100个油镜视野未查见ML。 1=观察100个油镜视野查见1-10条ML。 2=观察100个油镜视野, 平均每10个视野有1-10条ML。 3=观察25个油镜视野, 平均每视野有1-10条ML。 4=观察25个油镜视野, 平均每视野有10-100条ML。 5=观察25个油镜视野, 平均每视野有100-1000条ML。 6=观察25个油镜视野, 平均每视野有1000或1000条以上ML。
抗酸染色镜下的麻风杆菌
抗酸染色镜下的麻风杆菌

(2)镜检方法:涂片自然凉干 后放入分辨率较高的显微镜上, 先用低倍镜对焦,找到涂膜中间 部分,然后移去低倍镜,放入镜 油,换上油镜,以弓字形方式逐 一检视整个涂膜,按雷德里记数 标准计算结果。要求,阳性涂膜 至少检视50 个视野,阴性涂膜至 少检视200个视野。
麻风分枝杆菌形成的菌团
七.报告
(1)麻风病细菌学检查需报 告检查部位的细菌(“ + ”数) 和雷德里分级数( BI 指数)两 种结果。 (2) 不要直接报告“查见麻 风杆菌”或“未查见麻风杆 菌”。

八、注意事项
1、涂片质量要高:涂片厚薄一 致,涂点大小一致,不含红细胞, 最好每个视野有一两个巨噬细胞。 2、染色质量要好:麻风杆菌成 鲜红色,淋巴细胞呈兰色。 3、显微镜分辨率要好; 4、检验人员技术要硬。
Hale Waihona Puke Baidu (2)

染色:
A 固定,以钟摆的速度将涂片通过 酒精灯火焰中部3次。 B 滴入足够的石碳酸复红液(将 涂膜全部覆盖)于玻片涂片上,加热使 冒气,保持10分钟。 C 待冷后用水冲去玻片上的染液, 1%的盐酸酒精脱色10-30秒,以涂膜呈极 淡红色或无色为宜。用水冲去脱色剂。 D 加美兰液复染半至一分钟,水 洗,自然干燥。
麻风面部结节伴巩膜麻风瘤
三.取材方法
(1 )
消毒。 (2) 使局部贫血。 (3) 伤口长约5毫米、深约2-3 毫米。 (4) 止血。 (5) 取足够的组织液。(不得 少于绿豆大小。)
四.涂片
( 1 )以 45 度角将皮肤组织液均
匀地涂布于载玻片上,涂点大小 7毫米。 ( 2 )自然干燥后妥善保管,防 蚊蝇吃掉,防玻片断裂,注意编 号,查对真实姓名,保证玻片编 号及姓名与真实姓名吻合。 (3) 防止混血和污染。
六.镜检

(1) 麻风杆菌形态:麻风杆菌一般 为短小直棒状或稍有弯曲,长约 1-8 微米, 宽约 0.3-0.4 微米。没有鞭毛、芽胞和荚 膜。麻风杆菌具有抗酸性,即具有抵抗稀 酸类脱色剂脱色作用的性质。抗酸性是麻 风杆菌的一个重要特征。麻风杆菌革蓝氏 染色呈阳性。麻风杆菌另一个重要特点就 是多形性。未经治疗的早期病人或复发病 人其形态较为完整。治疗后多为断裂或颗 粒形。此外麻风杆菌数量较多时往往集簇 存在,形成菌团或菌束。

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