不同剂量交泰丸对2型糖尿病db_db小鼠治疗作用的比较研究_胡娜

据采用均数 ± 标准差（ x ± s ） 表示， 两组间均数的比较采用 t 检验， 多组间均数的比较采用 ANOVA 程序进行单因素的方 P ＜ 0. 05 时判定差异 差分析， 并用 LSD 程序进行两两比较， P ＜ 0. 01 被认为有非常显著性的差异 。 有显著性， 2 2. 1 2. 1. 1 实验结果 各组小鼠一般情况 各组小鼠体重的变化 见表 1 。
。虽然前期研究证实交泰丸对高糖高脂联合小剂
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量链脲佐菌素制备的 2 型糖尿病大鼠有明确的降糖降脂 、 保 护胰岛细胞作用 ， 但是还有很多关键问题没有解决， 如： 交泰丸对经典 T2DM 动物模型 db / db 小鼠是否有效？ 不同 剂量的交泰丸疗效有无差别？ 交泰丸降糖的有效剂量为多 少？ 为了进一步证明这些问题， 在本次实验中， 采用低剂量 交泰丸（ 人等效剂量） 和高剂量交泰丸（ 4 倍人等效剂量） 两 个标准进行不同剂量交泰丸对 db / db 小鼠治疗效果的比较 研究。 本实验结果显示， 不同剂量的交泰丸在糖尿病 db / db 小 鼠治疗疗效上有所差别， 低剂量的交泰丸在给药期间内虽然 “三多” 症状， 但对 db / db 小鼠无降血糖 能减少 db / db 小鼠的 疗效， 也不能改善其葡萄糖耐量； 高剂量的交泰丸能显著降 “三多 ” 低 db / db 小鼠的 FBG， 非常显著的减少其 症状， 且其 症状改善效果优于罗格列酮， 并能非常显著的改善其葡萄糖 耐量， 效果与罗格列酮相似。提示高剂量交泰丸对 db / db 小 鼠的降糖疗效优于低剂量交泰丸 。 小鼠胰腺 HE 染色结果显示， 模型组小鼠胰岛大小不
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＊ ＊ ＊ 3. 70 ± 0. 44 ＊ 3. 87 ± 0. 3 ＊ 286. 67 ± 178. 40 ＊ ＊ ＊ ＊ 4. 28 ± 0. 5 ＊ 384. 00 ± 162. 88 ＊ 3. 38 ± 0. 39 ＊ 18. 05 ± 2. 07 9. 32 ± 0. 9 1166. 25 ± 296. 64 * ＊ ＊
。 笔者前期实验已经证明交
泰丸有明确的降糖作用， 为进一步明确交泰丸的降糖剂量， 探讨交泰丸降糖作用机制， 观察了不同剂量交泰丸对 2 型糖 尿病 db / db 小鼠的治疗作用。 1 1. 1 材料和方法 实验动物 C57BL / KSJ － Lepdb （ db / db） 小鼠， 6 周龄，
24 只； 同窝出生的 db / m 小鼠， 12 只； 购自美国 雌性， 雌性， Jackson 实验室， 繁殖于上海中医药大学实验动物中心， 饲养 于上海中医药大学 SPF 级实验室层流架内。 1. 2 主要试剂与药物 葡萄糖注射液： 华裕（ 无锡） 制药有 B： 限公司； 甲醛溶液： 国药集团化学试剂有限公司； 伊红 A、 上海来泽化工研究所生产； 显微镜用中性树胶（ Neurtral balsam） ： 国药集团化学试剂有限公司； Super Picture 二抗： 上海 立瑶生物 工 程 科 技 有 限 公 司； 胰 岛 素 兔 抗 鼠 一 抗 （ insulin Rabbit － mouse IgG） ： 购自博士德生物工程有限公司； DAB 显色试剂盒（ DAB Kit） ： 购自康为世纪。 交泰丸水煎剂： 黄连 15g、 肉桂 1. 5g， 制备过程在上海中 医药大学科技实验中心分析测试实验室完成 。 交泰丸水煎 剂浓度： 低剂量 0. 21g / ml、 高剂量 0. 84g / ml。 罗格列酮钠片 （ Rosiglitazone Sodium Tablets， ROS） ： 葛兰素史克（ 天津） 有限
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中国中医药科技 2013 年 9 月第 20 卷第 5 期 Sep． 2013 Vol. 20 No. 5
不同剂量交泰丸对 2 型糖尿病 db / db 小鼠 * 治疗作用的比较研究
胡 娜 袁 琳 林 敏 孙银强 钟霄毓 李慧娇 黄 诚 毛泉明 张永煜 陆 雄△
( 上海中医药大学·上海 201203 ) 摘 要 目的: 比较不同剂量交泰丸对 db / db 糖尿 病 小 鼠的 治 疗作 用。方 法: db / db 小 鼠分为模型组、 交
泽， 进食量、 饮水量以及体重变化。 小鼠空腹血糖及腹腔注射葡萄糖耐量（ IPGTT ） 测定 2 周末尾静脉取血检测空腹血糖（ FBG） ： 采用罗康全活力 型血糖检测仪检测； 腹腔注射 0. 5g / kg 葡萄糖注射液， 分别 15 、 30 、 60 、 120 分钟尾静脉取血检测血糖水平 。 于注射后 0 、 1. 4. 3 胰腺病理变化观察 打开腹腔， 于脾和十二指肠之 取靠近脾脏的胰尾部进行石蜡切片 、 常 间找到并分离胰腺， 。 规 HE 染色， 光镜观察胰腺形态学变化 。 1. 4. 4 1. 5 胰岛素表达检测 统计学 处 理 免疫组化法。 采用 SPSS15. 0 进行统计分析。 实验数
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偶见空泡变性； 无胰岛固缩变小现象。 罗格列酮组： 个别胰 岛细胞肿胀， 但其胰岛形态和结构明显好于其他各用药组 。 2. 4 各组小鼠胰腺胰岛素表达的免疫组织化学检测结果 正常组： 小鼠胰岛内可见数量多 、 染色深的胰岛素阳性 细胞。模型组： 小鼠胰岛素阳性细胞数量较少， 染色较浅。 交泰丸低剂量组： 较模型组无明显差异。 交泰丸高剂量组： 胰岛内胰岛素阳性细胞较多， 染色较深。 罗格列酮组： 胰岛 素阳性深染的细胞明显多于其他各用药组 。 见表 2 。 3 讨论 在现代医学研究中， 尽管对黄连、 肉桂单味药治疗糖尿 病作用有大量报道， 但是目前对交泰丸整方的糖尿病治疗研 究较少
见表 3 。
FBG
＊ 5. 42 ± 0. 66 ＊ ＊ 6. 16 ± 0. 89 ＊ 22. 09 ± 3. 67
x ± s） 各组小鼠空腹血糖比较 （ mmol / L，
14. 18 ± 3. 59 22. 24 ± 7. 03
*
14. 68 ± 5. 50 *
与模型组比较* P ＜ 0. 05 ， ＊＊P ＜ 0. 01
与模型组比较* P ＜ 0. 05
2. 1. 2
表2
各组小鼠饮水量 、 进食量及尿量的变化
剂量 / （ kg） 饮水量（ ml） — 2. 1g — 进食量（ g）
n = 6） 各组小鼠饮水量、 进食量及尿量的变化（ x ± s， 组别 6 小时尿量（ ml）
正常组 正常交泰丸组 模型组 罗格列酮组 交泰丸低剂量组 交泰丸高剂量组
泰丸高剂量组、 交泰丸低剂量组和 罗格 列 酮 组， 另 取 db / m 小 鼠分为 正 常 对 照 组 和 正 常 加 交 泰 丸 低 剂量 组。各组药物灌胃 4 周， 对照组给予生理盐水。观察 小 鼠的 进 食 量、 饮 水 量、 尿 量 以 及 体 重 变化， 观察 空 HE 染色， 腹血糖( FBG) 、 腹腔注射葡萄糖耐量( IPGTT) 变化， 光镜观察 胰 腺 组 织 病理学变化， 免疫 组化 检 测胰岛素表达。结果: 低剂量交泰 丸 降 糖 作 用 不 明 显; 高 剂量 交 泰 丸 有 明 显 的 降 糖 作 用 ( P ＜ 0. 05 ) 。 与 模型组比较， 交泰丸高剂量组胰岛形状较规则， 外分 泌 腺 浸 润 现 象 减少; 胰 岛 内 细胞 数 目 较 多， 偶见 空 泡 变性; 罗格列酮组仅见个别胰岛细胞肿胀， 明显优于其他各组; 高剂量交泰丸可增强 db / db 小 鼠 胰 腺 组 织 的胰岛素表达。结论: 高剂量交泰丸有效好的降糖作用及保护胰岛细胞的作用。 主题词 糖尿病， 非胰岛素依赖型 / 中医药疗法 交泰丸 / 治疗应用 胰腺 / 病理学 小鼠
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18. 33 ± 1. 03 20. 00 ± 0. 89 20. 00 ± 1. 26 21. 17 ± 0. 98 18. 00 ± 1. 26 19. 60 ± 1. 34 19. 40 ± 1. 34 21. 00 ± 0. 71 35. 50 ± 1. 93 37. 88 ± 2. 23 38. 63 ± 2. 62 40. 50 ± 2. 78 33. 83 ± 2. 04 41. 17 ± 1. 60 * 45. 67 ± 2. 16 * 48. 00 ± 2. 19 * 34. 38 ± 2. 39 35. 38 ± 3. 46 35. 88 ± 3. 83 36. 13 ± 5. 14 34. 38 ± 3. 40 37. 14 ± 3. 53 37. 67 ± 4. 72 38. 83 ± 6. 11
与模型组比较 * P ＜ 0. 05 ，＊＊ P ＜ 0. 01 ； 与罗格列酮组 比较 △P ＜ 0. 05
2. 2 2. 2. 1
表3
各组小鼠血糖变化 各组小鼠空腹血糖（ FBG） 的变化
组别 正常组 正常交泰丸组 模型组 罗格列酮组 交泰丸低剂量组 交泰丸高剂量组 n 6 6 6 6 6 6 剂量（ / kg） — 2. 1g 5mg — 2. 1g 8. 4g
《韩氏医通 》 交泰丸首见于明代韩懋 一书， 由黄连、 肉桂 两味药物以 10 ： 1 比例组成， 为中医“交通心肾 ” 的经典方。 在现代医学研究中， 尽管对交泰丸整方的糖尿病治疗研究较 但对其组成单味药物黄连 、 肉桂治疗糖尿病的作用有大 少， 量的临床和实验研究报道
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公司， 批号： 10055183 ， 研 成 粉 末 后， 加蒸馏水配成浓度为 0. 5mg / ml 混悬液， 放入 4℃ 冰箱保存备用。 1. 3 分组及给药 db / db 小鼠（ 6 周龄） ， 适应性喂养两周后， 按血糖分层 交泰丸低剂量组（ 2. 1g / kg， 人等效剂 随机分为模型对照组、 量） 、 交泰丸高剂量组（ 8. 4g / kg， 人等效剂量的 3 倍） 和罗格 6 只 / 组； db / m 小鼠分为正常对照组和正 列酮组（ 5mg / kg） ， 每组 6 只。各用药组以 0. 1ml /10g 体 常加交泰丸低剂量组， 重的剂量灌胃治疗； 正常对照组和模型对照组予等量生理盐 水灌胃； 每日 1 次， 连续灌胃 28 天。 1. 4 1. 4. 1 1. 4. 2 观察指标与检测 一般情况 每周观察动物精神状况 、 反应、 体毛色
* 上海市卫生局顶目 No． 20114051 上海市教育委员会预算内科研项目 No． 2010JW23 上海市教育委员会预算内科研项目 No． 2011JW18 △通讯作者
中国中医药科技 2013 年 9 月第 20 卷第 5 期 Sep． 2013 Vol. 20 No. 5
表1 组别 正常组 正常交泰丸组 模型组 罗格列酮组 交泰丸低剂量组 交泰丸高剂量组 g， n = 6） 各组小鼠体重的变化（ x ± s， 剂量（ /kg） — 2. 1g — 5mg 2. 1g 8. 4g 用药前 用药 1W 用药 2W 用药 3W
2. 2. 2
表4
各组小鼠腹腔注射葡萄糖耐量（ IPGTT ） 的测定
n = 6， mmol / L） 用药 2W 后各组小鼠 IPGTT 测定（ x ± s，
0min 15min 30min 60min 120min
结
一， 形状不规则， 胰岛细胞肿胀空化， 部分胰岛固缩消失， 胰 岛内间质细胞和炎症细胞增多， 有外分泌腺的入侵； 且 Insulin 免疫组化结果显示， 胰岛内深染的胰岛素阳性的细胞减 少。低剂量交泰丸胰腺 HE 染色和 Insulin 免疫组化结果与 模型组并无明显差异， 提示此剂量的交泰丸并没有起到保护 胰岛形态和功能的作用 。然而， 交泰丸高剂量组胰岛形状较 规则， 外分泌腺入侵现象减少； 胰岛内细胞较模型组多， 偶见 空泡变性； 无胰岛固缩变小现象； 胰岛内深染的胰岛素阳性 的细胞增多， 提示高剂量的交泰丸有一定程度的保护胰岛形 态和功能的作用。 然而， 罗格列酮组小鼠的胰岛形态结构好于交泰丸组； 胰腺 insulin 的免疫组化显示， 交泰丸组胰岛素阳性、 深染的 细胞少于罗格列酮组， 似乎提示交泰丸的作用不及罗格列 酮， 但在本实验中， 交泰丸降低 db / db 小鼠 FBG 的疗效却与 罗格列酮组并无差异； 同时， 肥胖是 2 型糖尿病的危险因素 之一， 从体重结果来看， 与模型组比较， 罗格列酮组显著增加 db / db 小鼠的体重， 而交泰丸并没有使其体重增加， 表明交 泰丸与罗格列酮有着相同的降糖疗效， 同时交泰丸没有罗格 列酮增加体重的作用。 这些结果提示交泰丸的降糖机制不 仅仅在于对胰岛细胞和功能的保护作用， 其多靶点、 多途径
5mg 14. 47 ± 0. 73 8. 21 ± 0. 6 716. 67 ± 218. 14 ＊ 2. 1g 14. 48 ± 4. 24 * 7. 50 ± 1. 2 * 592. 50 ± 321. 37 ＊ △ ＊ ＊ ＊ ＊ 6. 65 ± 1. 5 8. 4g 7. 60 ± 2. 76 ＊ △ 673. 57 ± 320. 06 △