hplc检测甜蜜素含量的研究

HPLC检测甜蜜素含量的研究

HPLC检测甜蜜素含量的研究

摘要：目的研究高效液相色谱法测定甜蜜素含量的方法。方法因为GB/T5009.97-2003方法中气相色谱法很容易造成含环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯，造成假阳性，所以，笔者选用C18色谱柱（4.6mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水：（80+20）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温25℃，检测波长为314 nm。结果甜蜜素在2～100 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，R2=0.9998，平均加样回收率为97.04%，RSD=4.1%（n=6）。结论本法操作简便，准确，重复性好，精密度高。

关键词：甜蜜素高效液相色谱法含量测定

甜蜜素（环已基氨基磺酸钠）是我国广泛使用的甜味剂之一，已应用于食品加工业、农业等各领域。由于过多的食用甜蜜素会对身体造成不良影响，因此在实际使用中应严格控制其添加量。

目前甜蜜素的检测采用的标准是GB/T 5009.97，该标准适用于食品中甜蜜素的通用检测的方法，但是白酒等类似食品中甜蜜素的检测若是采用此方法会导致某些食品中环己醇及环己基的类似物质可

能与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯，而被误认为是环已基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成其中含有甜蜜素的假象，因此通用甜蜜素的检测方法GB/T 5009.97不适用于白酒一类食品含有环己醇及环己基的类似物质中甜蜜素的检测。本试验采用高效液相色谱（HPLC）法测定食品中甜蜜素的含量。

1仪器与试剂

1.1仪器

岛津系列高效液相色谱仪：LC-20AT二元泵，SPD-20A检测器；

1.2药品

甜蜜素标准品中国计量科学研究院；除甲醇为色谱纯外其余均为分析纯

5%的硫酸

5%的碳酸氢钠

亚铁氰化钾溶液（92g/l）：称取亚铁氰化钾【K4Fe（CN）6?3H2O】106g，用水溶解于1000ml容量瓶中，定容到刻度后混匀。

乙酸锌溶液（183g/l）：称取乙酸锌【Zn（CH3COO）2?2H2O】219g，加入32ml乙酸，用水溶解于1000ml容量瓶中，定容到刻度后混匀。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Hypersil GOLD C18色谱柱：（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇+水（80+20），流速：1.0 mL/min，柱温：25 ℃，检测波长为：314 nm，进样量为：20μL。

2.3 溶液的制备

2.3.1甜蜜素标准储备液的制备

1000ug/ml甜蜜素标准储备液：精确称取100.0mg甜蜜素标准品，用水定容至100ml，配成浓度为1000ug/ml甜蜜素标准储备液

2.3.2 甜蜜素标准系列的配制

从1000ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取2、5、10ml溶液，分别定容至100ml，配成20、50、100ug/ml的甜蜜素的标准溶液。从100ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取5、10ml溶液，分别定容至100ml，配成5、10ug/ml的甜蜜素的标准溶液。从20ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取10ml溶液，分别定容至100ml，配成2ug/ml 的甜蜜素的标准溶液。

2.4样品的处理

2.4.1 标液的处理

分别准确吸取10ml浓度为2、5、20、50、100ug/ml的甜蜜素的标准溶液于分液漏斗中，加入2ml50%的硫酸，加入5ml正己烷，再加入2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈震荡，静置3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测。

2.4.2 空白试验

吸取10ml超纯水于分液漏斗中，加入2ml50%的硫酸，加入5ml

正己烷，再加入2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈震荡，静置3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测。

2.4.3样品的处理

1.取10～20g样品置于50ml容量瓶中，加入25ml水溶解，再加入2ml亚铁氰化钾溶液和2ml乙酸锌溶液。剧烈震摇，静置15min，然后用水定容至刻度，混匀，过滤。

2.吸取滤液10ml于分液漏斗中，加入2ml50%的硫酸，加入5ml 正己烷，再加入2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈震荡，静置3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测（若有乳化现象，需离心取上清液后保存）。

3 样品处理关键步骤对甜蜜素检测的影响结果

3.1 硫酸浓度的影响

准确吸取1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为30%、40%、50%、60%、70%的硫酸，按2.4.3―2的方法进行处理和测定，得知，加入50%的硫酸时峰面积最大、灵敏度最高。故采用50%的硫酸2ml作为调节PH值最佳。

3.2 次氯酸钠用量的影响

准确吸取1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为50%的硫酸，再分别加入0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml次氯酸钠溶液，按2.4.3―2的方法进行处理和测定，得知，加入2ml次氯酸钠时衍生较完全，杂质峰较少。故采用2ml次氯酸钠作为调节PH值最佳。

3.3 碳酸氢钠钠用量的影响

准确吸取1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，按2.4.3―2的方法进行处理和测定。

环已基氨基磺酸钠在强酸的条件下与次氯酸钠反应生成N，N-二氯环已基胺，经正己烷萃取后，仍残留次氯酸钠，因次氯酸钠会损坏色谱柱，所以残留的次氯酸钠必须除去。通过实验测定，5%的碳酸氢