检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄ—ｄｉｍｅｒ；Ｄｏｔ ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ；Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ；Ｄｅｅｐ ｖｅｉｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ；Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｍｂｏｌｉｓｍ
近十多年来，国内外的研究充分证实了Ｄ－二 聚体检测对一些疾病的疗效观察和预后判断具有 广泛的应用价值，如深静脉血栓栓塞（ＤＶＴ）、肺 栓塞（ＰＥ）、弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）、心血管疾 病、肝脏疾病、恶性肿瘤等。Ｄ－二聚体测定的常用 方法有定性和半定量的胶乳凝集试验（ＬＡＴＥＸ） 及定量的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。半定量胶 乳试验简便、快速，但需肉眼观察试验结果，不同 观察者主观差异对结果影响较大，结果不够准确， 且敏感性不高，不能满足临床需要；传统ＥＬＩＳＡ 的Ｄ·二聚体定量检测，虽然检测性能尚佳，但操 作较复杂，每次需要做标准曲线，繁琐、耗时，不适 于紧急情况下单个样本的检测，也不能完全满足 临床急诊医疗的需要…。而近年来，随着金标记 技术的发展，利用金标斑点渗滤法（ＤＩＧＦＡ）测定 血浆中Ｄ一二聚体含量的优势已有所展现。该法
除ＶｒＩＥ外，Ｄ一二聚体还是早期诊断ＤＩＣ较敏 感的指标。ＤＩＣ发生前期，纤溶受抑，早期纤溶系 统的启动以Ｄ－二聚体水平升高为主。血中Ｄ一二 聚体水平检测对早期发现危重患者ＤＩＣ，及时阻 断其向纤溶亢进期发展有重要意义。
上述疾病理想的筛选试验应该具备快速、准
万方数据
确、简便的特点。而ＤＩＧＦＡ检测Ｄ一二聚体就具备 以下优点：可以单人份使用，可迅速获得测试结 果，因此在基层医院也可广泛开展。这对血栓性 疾病的诊断，尤其是对于低临床概率的排除性诊 断具有重要的意义。
作者简介：张莉，女，１９６５年生，学士，副主任技师，主要从事临床免疫学研究。
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度按比例精确稀释作为样本，计算其实际测试值 与理论值在此范围内的线性关系。
２．精密度评价将浓度为０．３及３．０ ｎｇ／Ｌ 的质控品作为样本，１ ｄ内测定２０次，之后每天测 定２次，连续测定１０ ｄ。分别计算其批内和批间 变异系数（ｃｖ）。
表１批内、批间ＣＶ结果
３．回收率评价对按３种比例混合的样本 进行测定。根据回收率＝回收浓度／加入浓度× １００％的方法计算，３个浓度的回收率分别为 １０６．７％、９４．４％、１０２．７％，总回收率为１０１．３％。
二、临床标本比对结果 １．２３４例样本中，Ｄ—Ｄ ＤＯＴ检测Ｄ－二聚体阳 性率为３６．３％，ＮｙｃｏＣａｒｄ试剂盒为３８．０％，二者
Ｋａｐｐａ值即内部一致性系数，是评价判断一 致性程度的重要指标，取值在０—１之间旧’１０｜。有 学者将其评价阶段分为：Ｋａｐｐａ值＞１０．７５两者一 致性较好；０．７５＞Ｋａｐｐａ值≥０．４两者一致性一 般；Ｋａｐｐａ值＜０．４两者一致性较差。本研究中 ２种试剂盒检验结果的Ｋａｐｐａ值达到０．９５，说明 他们具有非常好的一致性。
以上３项临床比对数据的统计指标和对试剂
盒基本性能的评价结果均显示，Ｄ－Ｄ ＤＯＴ完全能 够满足临床的需要。
Baidu Nhomakorabea参考文献
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目前Ｄ一二聚体检测没有国际标准品和行业 标准品，各公司的标准品不统一、不通用，通常只 适合于与其配套的检测系统的自身校正。另外， 由于各个检测系统所使用的免疫抗体差异较大， 抗原决定簇各有不同，从而造成不同的检测方法 之间数据差异很大，其阳性率、敏感性、特异性均 不同，甚至对于同一个样本（枸橼酸抗凝血浆）的 读数亦存在较大差异。
３．回收率评价将定值质控品按ｌ：ｌ、Ｉ：３、 Ｉ：９的比例混合加至新鲜健康人血浆中进行测 定，每份测定３次，计算回收率。
４．临床标本比对 同时使用国产及进口２ 种试剂盒对所收集的血浆样本进行测定。分别严 格按照各自说明书进行操作。
四、统计学方法 利用ＳＰＳＳ １３．０统计软件对比对结果进行配 对ｒ检验、Ｋａｐｐａ一致性检验和Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相 关分析。
文章编号：１６７３－８６４０（２０１０）０１－００３０－０３
中图分类号：Ｒ４４６．６１
文献标识码：Ａ
检测血浆Ｄ·二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性
张莉 （上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院检验科，上海２０２１５０）
摘要：目的 比较２种金标斑点渗滤法（ＤＩＧＦＡ）试剂盒在测定Ｄ．二聚体浓度中的临床适用性。方法同时 采用ＮｙｃｏＣａｒｄ公司与国产奥普Ｄ．二聚体检测试剂盒（Ｄ—Ｄ ＤＯＴ）对２３４份血浆样本进行测试，比较２种方法的 一致性。结果Ｄ－Ｄ ＤＯＴ线性范围内相关系数（ｒ）＝０．９９８；总批内、批问变异系数（ｃｖ）分别为１０．７７％和 １２．８ｌ％；总回收率为１０１．３％。配对，检验、Ｋａｐｐａ检验（０．９５）及Ｓｐｅａｒｍａｎ系数（０．８７）均显示Ｄ－Ｄ ＤＯＴ与 ＮｙｃｏＣａｒｄ检测结果有良好的一致性。结论新的ＤＩＧＦＡ Ｄ·二聚体检测试剂盒与进Ｉ＝Ｉ ＮｙｃｏＣａｒｄ试剂盒有良好的 一致性，能够满足临床需要。
当前ＰＥ的症状和体征与其他多种疾病有重 叠，常被误诊为其他疾病，鉴别诊断困难。肺血管 造影、肺扫描并不普及。胸片、血气诊断特异性 差。因此，在怀疑ＰＥ的患者中仅有不到３５％的 患者被真正确诊为ＰＥ。影像学诊断通常只能在 大医院进行，其过程复杂【５］。有学者建议，临床 上低度怀疑ＰＥ（如Ｗｅｌｌｓ积分＜２）的患者加上血 浆Ｄ．二聚体检测可以可靠地排除ＰＥ【６ Ｊ。
静脉造影是最早应用于诊断ＤＶＴ的方法，现 仍是诊断ＤＶＴ的金标准。但静脉造影是一种侵 入性诊断方法，存在风险且价格昂贵。目前应用 较多的一些非侵袭性的诊断方法仍较昂贵，且敏 感性不高。国外研究资料显示，若Ｄ一二聚体检测 水平正常，结合临床可有效排除ＤＶＴ，不需要进 一步超声检查＂Ｊ。若用Ｄ．二聚体在人群中大规 模筛选和排除ＤＶＴ，可以极大地节省时间和经 费Ｌ４ Ｊ。目前快速Ｄ一二聚体测定已作为ＤＶＴ诊断 的首选项目。
ＭｃＮｅｍａｒ ｔｅｓｔ，Ｋａｐｐａ ｖａｌｕｅ（０．９５）ａｎｄ Ｓｐｅａｒｍａｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ（０．８７）ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｗｏ ｋｉｔｓ ｈａｄ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ Ｄ—Ｄ ＤＯＴ ＤＩＧＦＡ ｋｉｔ ｈａｓ蹰ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｋｉｔ ｆｒｏｍ ＮｙｃｏＣａｒｄ ａｎｄ ｉｔ Ｃａｌｌ ｍｅｅｔ ｔｈｅ ｎｅｅｄｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．
２０２１５０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｗｏ ｄｏｔ ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ（ＤＩＧＦＡ）ｋｉｔｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｄ－ｄｉｍｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｋｉｔｓ ｆｒｏｍ ＮｙｃｏＣａｓｄ ａｎｄ Ｕｐｐｅｒ（Ｄ—Ｄ ＤＯＴ）ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ Ｄ—ｄｉｍｅｒ ｉｎ ２３４ ｐｌａｓｍａ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅ ｗａｇ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ Ｄ—Ｄ ＤＯＴ Ｗａｓ ０．９９８；ｉｔｓ ｗｉｔｈｉｎ—ｒｕｎ ａｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ—ｒｕｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ（ｃｖ）ｗｅｒｅ １０．７７％ａｎｄ １２．８１％；ｉｔｓ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗｅｒｅ １０１．３％．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ
Ｄ．二聚体项目目前公认的敏感性在９０％以 上，而特异性为４０％～６０％左右ｏ ７１，因此诊断疾 病时，其意义主要在于阴性结果，即他是用于排除 性的诊断而非确诊性的诊断哺Ｊ。鉴于此现状，国 际上通常将其作为定性试剂盒来进行评价，除考 察敏感性、特异性外，还大致包括以下３个统计学
分析：配对，检验、Ｋａｐｐａ一致性检验、Ｓｐｅａｒｍａｎ
差异无统计学意义（ｒ＝２．２５，Ｐ＞０．０５）。二者 阳性符合率为９５．５％，阴性符合率为１００，Ｏ％，总
符合率为９８．３％。见表２。
表２ ２种试剂盒检测２３４例样本Ｄ－二聚体结果比较
２．采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件对２种试剂盒检 测结果进行Ｋａｐｐａ一致性检验，得Ｋａｐｐａ值＝ ０．９５，Ｄ－Ｄ ＤＯＴ和ＮｙｃｏＣａｒｄ试剂盒结果具有非常 好的一致性。
等级相关系数。
配对矿检验考察２种检验方法的结果或２ 类计数资料是否有本质差异。本研究显示，２种 试剂盒的测定结果差异无统计学意义。其阴性符
合率达到１００．Ｏ％，阴阳不符的４例病例均为 ＮｙｃｏＣａｒｄ试剂盒阳性而Ｄ—Ｄ ＤＯＴ阴性，对于注重 阴性排除试验的Ｄ一二聚体检测项目，这样的结果 显示出Ｄ－Ｄ ＤＯＴ更具临床适用性。
关键词：Ｄ一二聚体；金标斑点渗滤法；运用；深静脉血栓；肺栓塞
Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａ ｉｌｅｗ ＤＩＧＦＡ ｋｉｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｐｌａｓｍａ Ｄ－ｄｉｍｅｒ ＺＨＡＮＧ反 （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｆｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｈｏｎｇｍｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆＸｉｎｈｕａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ旷Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ
结果
一、试剂盒性能评价 １．线性评价用Ｄ—Ｄ ＤＯＴ检测５个浓度系 列稀释的样本（０．３、０．５、１．０、２．０及３．０ ｍｇ／Ｌ）， 每份测定３次。所获得的实际测定值与理论值的 线性回归方程为：Ｙ＝０．９７９ １Ｘ＋０．０６８ ４，ｒ＝ ０．９９８。此结果显示，在Ｄ－二聚体浓度为０．３— ３．０ ｍｇ／Ｌ，即说明书所示线性范围内，该试剂盒 线性良好。 ２．精密度评价测定２个浓度样本的２０次 批内和批间ＣＶ结果见表１。总批内及批间ＣＶ分 别为１０．７７％和１２．８１％。
３．在全部２３４例样本中，２种试剂盒均在读 数范围内（Ｄ一二聚体Ｏ．１—５．０ ｍｇ／Ｌ）的样本数共 ９９例。采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件进行Ｓｐｅａｒｍａｎ 分析，得Ｓｐｅａｒｍａｎ系数为０．８７，按照双尾检测，认 为两者显著相关。
讨论
当前，Ｄ－二聚体的临床检测主要应用于排除 静脉血栓栓塞（ＶＴＥ），这其中包括了ＤＶＴ和ＰＥ。 ＶＴＥ每年人群中的发病率约为７１／１０万，这其中 约２／３为ＤＶＴ，另１／３则是ＰＥ悼１。
有研究显示，针对已上市的２３种Ｄ一二聚体 检测试剂盒之间的比对评估，他们的Ｓｐｅａｒｍａｎ等 级相关系数在０．７９４～０．９９３之间【ｉ１１。本研究所 采用的对照试剂盒ＮｙｃｏＣａｒｄ Ｄ．二聚体单一试剂 盒也在其中。而Ｄ—Ｄ ＤＯＴ与ＮｙｃｏＣａｒｄ试剂盒的 Ｓｐｅａｒｍａｎ系数为０．８７，说明其与进口试剂盒间的 差距并不大。
结合了ＬＡＴＥＸ及ＥＬＩＳＡ的优点，既简便、快速 （３ ｒａｉｎ），又能定量，单个或成批标本可随时检测。
本研究对国产新研制的Ｄ．二聚体检测试剂盒作 了基本的性能评价，并将其与挪威进口试剂盒的 临床测试结果进行了比较。
材料和方法
一、仪器与试剂 １．Ｄ一二聚体检测试剂盒（Ｄ－Ｄ ＤＯＴ）及配套 Ｕｐｐｅｒｇｏｌｄ Ｕ２金标斑点法定量读数仪均由上海奥 普生物医药有限公司生产。另有奥普公司提供 Ｄ一二聚体高值质控品及稀释液，质控品标示为Ｄ． 二聚体５ ｍｇ／Ｌ。 ２．挪威ＮｙｃｏＣａｒｄ公司生产的Ｄ－二聚体单一 试剂盒及配套测读仪ＮｙｃｏＣａｒｄ Ｒｅａｄｅｒ １１。 二、标本 进行２种试剂盒比对的标本为临床收集的新 鲜枸橼酸抗凝血浆，共２３４份。 三、方法 １．线性评价将高值质控品根据其标示浓