辅助生殖技术的研究进展 综述

辅助生殖技术的研究进展

摘要：借助辅助生殖技术出生的儿童在世界上已数十万例,他们的生长发育与自然受孕出生儿童有否存在明显差异受到广泛的关注。本文综述体外受精、卵胞浆单精子注射、胚胎植入前诊断、低温保存技术等辅助生殖技术的妊娠结局,及其出生儿童在不同生长发育阶段(新生儿期、婴儿期、幼儿期、学龄前期、学龄期、青春期)的健康状况。资料表明辅助生殖技术出生儿童的生长发育无明显异常。

关键词：辅助生殖技术的研究进展，辅助生殖技术，辅助生殖的主要技术方法，人工授精（AI），体外受精-胚胎移植（IVF-ET），体外授精，胚胎移植辅助生殖的主要技术方法

世界卫生组织80年代中末期在25个国家的33个研究中心组织了一次采用标准化诊断的不孕症夫妇的调查结果表明，发达国家约有5％～8％的夫妇受到不孕症的影响，发展中国家一些地区不孕症的患者发病率可高达30％。全世界的不孕症人数约为5000-8000万^[1]。据不完全统计，中国育龄夫妇中不孕症患者约占2％～6％，目前还有增加的趋势。其中女性以输卵管因素为主，占40％～50％。男性以少精、阳萎、高密度畸形精子为常见因素^[2]。而传统的药物和手术治疗方法远不能满足患者对生育的需要。人类辅助生殖技术无疑是生物医学领域里的一场革命^[3]，解决了大多数不孕症患者通过其它治疗后仍不能受孕的问题。

1.人工授精（AI）是以非性交方式将精子置入女性生殖道内，使精子与卵子自然结合，实现受孕的方法。人类最早一例成功的AI治疗是John Hunter于1790年为严重尿道下裂患者的妻子进行的配偶间人工受精。至今虽已200多年，但仍是常用的有效有助孕技术。由于精液来源不同，AI分夫精人工授精（AIH）和供精（非配偶）人工授精（AID）。两者适应证不同，AIH治疗:（1）性交障碍;（2）精子在女性生殖道内运行障碍;（3）少、弱症。AID治疗:（1）无精症;（2）男方有遗传疾病;（3）夫妻间特殊性血型或免疫不相容。实施AID治疗时，供精

者须选择身体健康，智力发育好，无遗传病家族史的青壮年。还须排除染色体变异、乙肝、丙肝、淋病、梅毒，尤其是艾滋病（HIV）。血型要与受者丈夫相同。供精精子应冷冻6个月，复查HIV阴性方可使用［2］。因HIV的感染有6个月左右的潜伏期，此时诊断不易确定，所以供精精子一般应从精子库获取。

2. 体外受精-胚胎移植（IVF-ET）该技术是将从母体取出的卵子置于培养皿内，加入经优选诱导获能处理的精子，使精卵在体外受精，并发育成前期胚胎后移植回母体子宫内，经妊娠后分娩婴儿。由于胚胎最初2天在试管内发育，所以又叫试管婴儿技术。

3. 取卵用B超引导经阴道穿刺取卵术取卵。此法不需麻醉切口，也不经过膀胱，避免了尿液对精子的伤害，优于用腹腔镜或B超引导经腹取卵的方法。

4.体外授精将取到的卵泡液注入培养皿，肉眼快速辨认含卵细胞及其外周的透明带、放射冠的卵冠丘复合物。在解剖镜下确认有卵细胞存在后，置入CO 2 培养箱培养4～8h，再根据复合物的形态变化判断选择成熟卵细胞，按每卵配10～20万个精子的比例，投入经过洗涤优选已诱导获能的精子，授精后16～18h 观察情况，将受精卵移入培养试管/皿内培。

5. 胚胎移植于取卵后48h，胚胎发育成2～8个细胞阶段或在取卵后72h 胚胎发育至8～16个细胞时植入子宫。后者较符合自然受精胚胎进入子宫的时间，且在传统体外培养条件下，只有最健康的胚胎才能活到3天，故移植成功率高。有报道，应用共培养术，可使胚胎培养至囊胚期再移植，妊娠率高达50% 。一次移植的胚胎数以2～3枚为宜。因为增加胚胎移植数，妊娠率虽呈不按比例的增加，但多胎率也会随之增加，经对几组移植1～6胎资料的比较，其中以移植3个胚胎的妊娠率相对较高，而多胎率相对较低。

辅助生殖技术是近年解决不孕不育的重要手段.辅助生殖技术在卵母细胞的体外培养、卵巢及卵母细胞的冻存、卵巢的激活、胚胎的体外培育及移植等诸多方面已取得了不小的成绩,为人类生殖做出了巨大贡献.但辅助生殖技术仍存在许多问题,如胎儿出生后遗传印记的缺失,其机制还有待进一步研究.辅助生殖技术远期安全性也是值得重视的问题.辅助生殖技术有广阔的发展前景,值得辅助生殖工作者进行大量深入的研究并不断完善.

1978年世界首例试管婴儿的降生开创了不孕症治疗的新纪元，也对生命科

学的发展产生了深远的影响，由此而衍生的胚胎干细胞研究被"Science"杂志评为20世纪十大科技成就之首，位居人类基因组计划之前。由试管婴儿为基础而发展起来一系列衍生技术统称为人类辅助生殖技术，是目前治疗不孕症的十分有效而安全的方法。继国内首例腹腔镜下配子输卵管内移植术后，经过10年的努力，我们不仅取得了一系列辅助生殖技术的成功，包括体外受精胚胎移植术(IVF_ET)，俗称试管婴儿，卵母细胞内单精子注射术(ICSI)，睾丸或副睾穿刺单精子注射术(PESA/TESA)，赠卵试管婴儿，胚胎冷冻复苏，人工孵化，多胎减胎术等，而且技术水平不断地提高和成熟，目前已常规应用于临床，为湖北省乃至全国各地的不孕家庭带来了幸福和欢乐。自1997年～2005年5月共进行辅助生殖技术4375例，其中冷冻胚胎复苏移植555个周期，妊娠1418例，已分娩948例，获活婴1260个。平均妊娠率达到35.7％，累计妊娠率39.7％，着床率达17.8％，并于2002年10月通过卫生部论证评审，获得实施人类辅助生殖技术的准入资格证书。此外，我们在国内率先开展玻璃化冷冻的基础和临床研究，取得了国内首例玻璃化冷冻复苏婴儿的出生，目前玻璃化冷冻已成为本中心胚胎冷冻的另一项选择，妊娠率高达19.7％。与此同时，以辅助生殖技术作为平台，我们对生殖医学的基础进行了一系列研究，包括玻璃化冷却的基础研究，子宫内膜接受性的研究，其中Hoxa10在胚胎着床中的分子机制研究也获得了阶段性的进展，为进一步深入进行着床机理的研究奠定了基础；利用废弃和冷冻胚胎进行囊胚培养和干细胞建系的研究均取得了阶段性或突破性的进展。此外，还进行了以下创新性研究：首先开展中国汉族人CYP11a微卫星多态性与PCOS高雄激素血症的关系的研究；率先开展关于第一极体的形态与人卵母细胞非整倍体的关系的研究；率先发现并进行了人类胚胎培养系统污染发生率、污染来源及其预防机制的研究。生殖医学作为一门基础与临床相互渗透、相互依存的交叉性学科，其相关的临床及实验技术具有极其重要的推广应用价值。该系列科学技术成果不仅可在IVF-ET的临床及实验室中推广，还可应用于产前优生诊断、胚胎干细胞的培养及诱导分化、胚胎着床机制等相关前沿研究领域。玻璃化快速冷冻胚胎技术的开展以及胚胎培养系统污染来源的研究可为众多发展中的生殖中心提供可参考的技术模板；种植前遗传学诊断技术在分子水平扩展了早期产前优生诊断方法；利用D3天废弃胚胎建立的胚胎干细胞系，不仅部分解决了建立胚胎干细胞库过