四种脾虚证造模方法的差异性研究

四种脾虚证造模方法的差异性研究
刘华生,陈铭佳,王艳明
(黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040)
摘 要:目的:探讨D-木糖吸收值及外周血T 淋巴细胞百分率在四种脾虚模型中的变化规律。

方法:采用耗气破气法、耗气破气加饥饱失常法、劳倦加饥饱失常法及劳倦加饮食失节法塑造脾虚证动物模型。

用间苯三酚法检测不同模型大鼠D-木糖吸收值的变化;用ANAE 法检测不同模型大鼠外周血T 淋巴细胞百分率的变化。

结果:四组模型在D-木糖吸收值及外周血T 淋巴细胞百分率等项指标上存在着明显差异。

结论:在脾虚证中,D-木糖吸收值存在升高的情况;外周血T 淋巴细胞百分率在耗气破气法中降低最明显。

关键词:脾虚证;动物模型;木糖;外周血T 淋巴细胞
中图分类号:R285 5 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2005)04-0079-02作者简介:刘华生(1950-),男,研士研究生导师,现主要从事中医证
候规范化和证候模型研究。

收稿日期:2005-01-01
继1977年首次研制脾虚证动物模型以来,脾虚证动物模型逐渐成为中医动物模型的一个代表,且已在脾主运化、脾主肌肉、脾虚证与微量元素、脾虚证与血液流变学、脾虚证与免疫功能等诸多方面进行了实验性探索。

笔者采用耗气破气法、耗气破气加饥饱失常法、劳倦加饥饱失常法及劳倦加饮食失节法塑造脾虚证动物模型,观察D-木糖吸收率及外周血T 淋巴细胞百分率在这四种脾虚模型中的变化,以期发现不同造模方法对大鼠上述两项指标的影响规律,并且可以为研制脾虚证的治疗新药提供具有可靠实验依据的动物模型。

1 实验材料
1 1 动物
选用Wistar 系雄性大鼠25只(由黑龙江中医药大学实验动物中心提供),体重120~150g 。

1 2 实验药物及试剂
大黄、厚朴、枳实;精炼猪油;大白菜;D-木糖试剂盒(南京建成生物工程研究所);KH 2PO 4,Na 2HPO 4,a -醋酸萘酯,乙二醇甲醚,副品红,盐酸,亚硝酸钠等。

1 3 劳倦装置
水迷宫:中国医学科学院药物研究所制。

1 4 主要仪器
722型光栅分光光度仪(山东高密分析仪器厂);酸度计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);LD5-2电动离心机(北京医用离心机厂)。

2 实验方法
2 1 造模方法及分组
2 1 1 耗气破气组(1组) 造模药物配制方法参照文献[1]。

每日经口灌喂药物2次,每次2ml 。

共造模42天。

2 1 2 耗气破气加饥饱失常组(2组) 造模药物配制方法参照文献[2]。

灌药时间间隔1天,每次灌2ml,上下午各1次。

喂药当天禁食,次日给足量食物。

共造模42天。

2 1
3 劳倦加饥饱失常组(3组) 劳倦采用游泳消耗体力法,参照文献[3]。

隔日给食,保证足量。

共造模21天。

2 1 4 劳倦加饮食失节组(4组) 参照文献[4]
,把上
跑步机改为游泳法。

2 1 5 对照组(5组) 每日给予普通饲料,自由取食。

2 2 客观指标检测方法
2 2 1 D-木糖检测方法 血清木糖浓度检测法:参考南京建成生物工程研究所试剂盒说明书。

2 2 2 外周血T 淋巴细胞百分率 采用 -醋酸奈酶(ANAE)染色法,取大白鼠尾血涂片,干燥后置37 孵育液中3h,冲洗后1%孔雀绿复染,干燥后油镜下检查100个淋巴细胞,记录阳性细胞(T 淋巴细胞)数,求出T 淋巴细胞百分率。

2 3 统计学处理方法
测试结果均为( x s ),组间比较用t 检验。

79 中医药信息2005年第22卷第4期
3 结果
3 1 四种脾虚模型大鼠的一般体征观察
四种脾虚模型大鼠均出现眯眼、懒动、扎堆、便稀,背毛散乱而无光泽等症状。

实验过程中四组脾虚模型动物体重增长缓慢,尤以耗气破气加饥饱失常组最为明显。

另外,耗气破气组及耗气破气加饥饱失常组大鼠的便质呈溏便-成形-溏便的变化,与文献[5]报道基本一致。

3 2 四种脾虚模型大鼠D-木糖吸收值的变化
实验结果如表4所示,四种脾虚模型大鼠D-木糖吸收值与对照组相比均有变化。

其中劳倦加饥饱失常组及劳倦加饮食失节法组大鼠D-木糖吸收值与对照组相比均下降(P <0 05),两组模型之间有明显差别(P <0 05),耗气破气组及耗气破气加饥饱失常组大鼠D -木糖吸收值与对照组相比显著升高(P <0 05),两组模型之间有显著差别(P <0 05)。

3 3 四种脾虚模型大鼠外周血T 淋巴细胞百分率的变化
实验结果如表4所示,四种脾虚模型大鼠外周血T 淋巴细胞百分率与对照组相比均显著降低。

耗气破气加饥饱失常组与劳倦加饮食失节组之间,劳倦加饥饱失常组与劳倦加饮食失节组之间无差别(P >0 05)。

表4 四种脾虚模型大鼠D-木糖吸收值与外周血T
淋巴细胞百分率的变化 ( x s )
组别例数D-木糖吸收值(n)
外周血T 淋巴细胞百分率(n )
1组52 85 0 42*76 10 5 81**
2组51 94 0 21
*
84 7 3 58**
3组50 52 0 16*90 8 3 96*4组50 71 0 0788 3 2 73
*
5组
5
1 3
2 0 55
95 2 1 48
(1)与对照组比较:*P <0 05,**P <0 001;(2)组间比较:P 1-2,
P 3-4,P 1 -2 ,P 2 -3 均小于0 05
4 讨论
4 1 D-木糖吸收值
木糖吸收试验用于检测小肠的吸收功能,已于1986年在郑州召开的全国虚证研究会议上被确定为脾虚证诊断的参考指标之一。

木糖是戊糖的一种,它由上段空肠吸收,但不为肝脏所利用,部分在体内破
坏,大部分以原形从尿中排出。

大量文献报道,脾虚证时D-木糖吸收值下降。

本实验中,劳倦加饥饱失常组及劳倦加饮食失节法组大鼠D-木糖吸收值下降,说明这两种模型也存在小肠吸收功能低下。

且今后在研制新药以D-木糖吸收值为评定指标时,选择劳倦加饥饱失常的造模方法最具说服力。

但耗气破气组及耗气破气加饥饱失常组大鼠D-木糖吸收率却显著升高,这与文献
[6]
一致。

本研究从实验方面证明了D-
木糖吸收率有升高的可能,且以耗气破气组升高最显著(P <0 05)。

升高的机制还有待进一步研究。

4 2 外周血T 淋巴细胞百分率
免疫学指标的改变为脾虚的重要检测指标,脾虚证患者在不同程度上均有免疫功能低下的表现。

而对外周血中各种免疫功能执行细胞的计数,在一定程度上可以反映机体的细胞免疫功能状态。

本实验四组脾虚证动物模型的外周血T 淋巴细胞百分率均下降,且以耗气破气组下降最显著(P <0 001)。

那么选择该模型用于这方面的研究最为理想,而且饥饱失常这一造模因素是否起作用还有待进一步研究。

由于条件限制,本实验仅进行了四种脾虚证模型的D-木糖吸收率及外周血T 淋巴细胞百分率的研究,其差异性是显著存在的。

但无论在模型还是客观指标的选择上,还不能从整体上全面反映脾虚动物模型之间的差异。

为了使今后能更好地研究脾虚证及研制脾虚证的治疗新药,特别是在动物模型的选择上做到有据可循,本方面的研究尚需做进一步探讨。

参考文献:
[1] 阚甸嘉,滕静茹,傅湘琦,等 用耗气破气理论塑造脾气虚动物模
型[J] 吉林中医药,1990,(2):32-34
[2] 傅湘琦,张奇,唐党生,等 根据中医耗气破气理论塑造大白鼠
脾气虚证 模型血小板形态变化的电子显微镜观察[J ] 山西中医,1990,6(1):32-33
[3] 王雪萍,刘旺根,王玎玎 黄芪建中汤对脾虚大鼠胃粘膜组织代
谢的影响[J] 河南中医学院学报,2003,18(106):25-26
[4] 傅湘琦,唐党生 过劳和饮食失节塑造大白鼠脾气虚证模型的研究
-肝脏线粒体超微结构的观察[J] 云南中医杂志,1986,(5):10-11 [5] 陈小野,邹世洁,张智 大鼠长期脾虚造模的实验研究[J] 中国
中医基础医学杂志,1995,1(1):37-41
[6] 张志华 谈谈对 脾 的新认识[J] 中华名医论坛,2003,(9):28-29
80 ITC M Jul 2005,Vol 22,NO 4。