苯甲酸、山梨酸及山梨酸钾的测定—气相色谱法

苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾的测定—气相色谱法

一、实训内容

适用于测定酱油、果子汁等食品的苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾的含量。

通过酸化处理从样品中提取苯甲酸钠、山梨酸及山梨酸钾，气相色谱法测定，绘制标准曲线，计算样品含量。

二、实训目的、要求

①理解气相色谱法的原理，能熟练操作气相色谱仪。

②能熟练处理样品。

三、实训原理

样品酸化后，用乙醚提取山梨酸，用氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

四、仪器和用具

气相色谱仪：Agilent 7890气象色谱仪，配有氢火焰离子化检测器。

五、试剂

①乙醚：不含过氧化物。

②石油醚：沸程30~600 ℃

③盐酸。

④无水硫酸钠。

⑤盐酸（1+1）：取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL。

⑥氯化钠酸性溶液(40 g/L)：向氯化钠溶液(40 g/L)中加少量盐酸（1+1）酸化。

⑦山梨酸标准溶液：准确称取山梨酸（0.1g左右）g，置于100 mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液相当于（1m g/mL左右）山梨酸。

⑧山梨酸标准使用液：吸取适量的山梨酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于0.5150 mg、0.2575mg、0.1288 mg、0.06438 mg、0.03219 mg山梨酸。

⑨苯甲酸钠标准溶液：准确称取苯甲酸钠（0.1g左右）g，置于100 mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液相当于（1m g/mL左右）苯甲酸钠。

⑩苯甲酸钠标准使用液：吸取适量的苯甲酸钠标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶

剂稀释至每毫升相当于0.5245 mg、0.2623mg、0.1311 mg、0.06556mg、0.0375 0mg苯甲酸钠。

六、操作步骤

1. 样品提取（可口可乐、“6个柠檬”）

称取（10g左右）g可口可乐和（10g左右）g6个柠檬事先混合均匀的样品，分别置于50mL带塞锥形瓶中，加0.5mL盐酸（1+1）酸化，用15mL、10mL乙醚提取2次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞锥形瓶中。合并乙醚提取液，用3mL氯化钠酸性溶液（40g/L）洗涤2次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取10mL至带塞锥形瓶中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解残渣，备用。

2. 色谱参考条件

①色谱柱：毛细管柱，内径0.25mm，长30m，内装涂以5%苯基-甲基聚硅氧烷固定液的HP柱。

②气流速度：载气为氮气，压力10psi，分流比30:1，空气流速400mL/min，H2流速30mL/min，尾吹25mL/min。

③温度：进样口230℃；检测器230℃；柱温190℃。

3.测定

进样2 µL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸钠的峰高，以浓度为横坐标、相应的峰高值为纵坐标绘制标准曲线。同时进样2 µL样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。

七、测定结果

（一）标准系列

条件：

进样口：230℃

柱温：190℃等度，保持2.3min 检测器：230℃

压力：10psi

分流比：30:1

空气流速400 mL/min

H2流速30 mL/min

尾吹：25 mL/min

1.空白的测定

空白试剂：乙醚：石油醚（1:3）

出峰位置在1.735min

（空白的谱图）

2.山梨酸、苯甲酸钠标准品的测量

山梨酸单标（1.931min）

（谱图）

苯甲酸钠单标（2.057min）

（谱图）

山梨酸、苯甲酸钠混标

（谱图）

3.山梨酸标准系列

山梨酸标准系列的测量

（谱图及标准曲线）

4.苯甲酸钠标准系列

（谱图及标准曲线）

（二）、样品的测定

1. 可口可乐样品

1.1气象色谱图

（谱图）

与混标的对照图（红色—可口可乐；蓝色—混标）与山梨酸标准品的对照图（红色—可口可乐；蓝色—山梨酸

（谱图）

结论：可口可乐中是否含山梨酸，是否含苯甲酸钠？

1.2. 可口可乐样品中山梨酸含量的计算

可口可乐样品中山梨酸的含量

浓度（mg/mL ）

峰面积

利用标准曲线公式（ ）

计算得出2mL 提取液中山梨酸的浓度X= （ ）

称取可口可乐质量为（ ），原提取溶剂为50mL ，取10mL 浓缩至2mL 进行测定，所以计算得出可口可乐中山梨酸的含量为（ ）mg/g 。

2. “ 6个柠檬”样品

2.1气象色谱图

（谱图）

与混标的对照图（红色-6个柠檬；蓝色-混标） 与山梨酸标准品的对照图（红色-6个柠檬；蓝色-山梨酸 （谱图）

结论：6个柠檬中是否含山梨酸，是否含苯甲酸钠？

2.2.” 6个柠檬”样品中山梨酸含量的计算

6个柠檬样品中山梨酸的含量

浓度（mg/mL ）

峰面积

利用标准曲线公式y = （ ）

计算得出2mL 提取液中浓度X= （ ）m g/mL

称取6个柠檬质量为（ ），原提取溶剂为25mL ，取5mL 浓缩至2mL 进行测定，所以计算得出6个柠檬中山梨酸的含量为（ ）mg/g 。

八、计算公式

100025510001

221⨯⨯⨯⨯=V V m m X