第4章多肽与蛋白质类药物

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第4章多肽与蛋白质类药物
（五）纯度检查
l 确定protein 的纯度标准一般为： l 分子大小是否均一，电荷是否均一，是否
具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N 端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生 物活性是否有所提高等。
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第4章多肽与蛋白质类药物
（五）纯度检查
常用蛋白质纯度检查的方法有： l 1．HPLC或FPLC l 2．电泳均一性 l 3．免疫化学法 l 4．生物测定法 l 5. 分光光度法：A280/A260为1.75
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第4章多肽与蛋白质类药物
㈢蛋白质提纯的一般方法
l 5．根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质 亲和层析法 固相化金属亲和层析：干扰素、胃肠道多肽
l 6．根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来 纯化蛋白质。
l 7．根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋 白质
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第4章多肽与蛋白质类药物
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第4章多肽与蛋白质类药物
l 主要步骤：
l ⑴基团保护：把不应与接肽试剂发生作用 的官能团，加以封闭和保护。肽链形成之 后，再将保护剂去除。
l ⑵肽的合成：液相合成 固相合成
l ⑶合成肽链的纯化
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第4章多肽与蛋白质类药物
基因工程法
l 基因工程技术就是将重组对象的目的基因 插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构 成工程菌，实现遗传物质的重新组合，并 使目的基因在工程菌内进行复制和表达的 技术。
㈢蛋白质提纯的一般方法
l 8．根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋 白质。
l 9．根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质。 l SOD
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第4章多肽与蛋白质类药物
（四）溶液中蛋白质浓度的测定
l 1. UV法 （1）280nm光吸收法 （2）280nm和260nm的吸收差法
蛋白质浓度(mg/ml)=1.45A280-0.74A260 l 2. 双缩脲法:540nm l 3. 福林-酚试剂法:750nm l 4. 考马斯亮蓝G-250染色法:595nm
第4章-多肽与蛋白质类 药物
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2020/11/26
第4章多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质类药物
l 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 l 第二节 多肽类药物 l 第三节 蛋白类药物
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第4章多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质类药物
l 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法
1.蛋白质类药物的分离纯化
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第4章多肽与蛋白质类药物
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（一）材料选择
l 原料来源包括动物、植物及微生物等。选 择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、 成本低且易于提取的材料。
l 同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、 来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌 或细胞等因素的影响。
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第4章多肽与蛋白质类药物
多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般
为
, 但它们的生理活性很强，在调
节生理功能时起着非常重要的作用。
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第4章多肽与蛋白质类药物
概述
l 活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细 胞和体液中产生或获得的。
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第4章多肽与蛋白质类药物
多肽类
概述
l 由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它 们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子 氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CONH-键而相互连接起来的。
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第4章多肽与蛋白质类药物
概述
一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化 合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某 些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远 不如蛋白质，其构象的浮动性很大。
㈡提取
l 是分离纯化的第一步，是将目的物从复杂 的生物体系中转移到特定的人工液相体系 中。提取的总要求是最大限度的把有效成 分提取出来，关键是溶剂的选择。
l 选择标准：首先对制备物有最大的溶解度， 并在提取中尽可能减少一些不必要的成分。
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第4章多肽与蛋白质类药物
㈢蛋白质提纯的一般方法
l 1982年第一个基因重组产品--人胰岛素
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第4章多肽与蛋白质类药物
l 优点：①可以大量生产过去难以获得的生 理活性蛋白和多肽；②提供足够数量的生 理活性物质，以便对其进行深入研究，扩 大应用范围；③生理活性物质作为药物使 用时存在的不足之处，可以通过基因工程 和蛋白质工程进行改造和去除；④利用基 因工程可获得新型化合物，扩大药物来源。
第4章多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质类药物
l 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 l 第二节 多肽类药物 l 第三节 蛋白类药物
1.概述 2.主要蛋白质类药物的制备
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第4章多肽与蛋白质类药物
蛋白质类药物的分离与纯化
l （一）材料选择 l （二）蛋白质提纯的一般方法 l （三）蛋白质的分离和纯化 l （四）溶液中蛋白质浓度的测定 l （五）纯度检查
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第4章多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质的化学合成
l 多肽合成可以验证一个新的多肽的结构； 设计新的多肽，用于研究结构与功能的关 系；为多肽生物合成反应机制提供重要信 息；也是多肽药物制备的有效方法。
l 多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程， 合成一般从C端向N端进行。
l 固相法合成多肽省时、省料、便于计算机 控制、便于普及推广
l 1．根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。 l 2．根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质。
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第4章多肽与蛋白质类药物
㈢蛋白质提纯的一般方法
l 3．根据溶解度的不同来纯化蛋白质。 l 4．根据电离性质的不同来纯化蛋白质。
对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维 和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等 为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大的蛋白 质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。
2.多肽与蛋白质的化学合成
l
3. 基因工程法
l 第二节 多肽类药物
l 第三节 蛋白类药物
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第4章多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质类药物
l 第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 l 第二节 多肽类药物
1.概述 2.主要多肽类药物 3.主要多肽类药物制备 l 第三节 蛋白类药物
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