ACL系列血凝仪检测原理介绍及血栓止血临床基础

PT-INR 口服抗凝药监测的重要指标
据了解PT存在的主要问题在于INR! 由于： INR = PT Sample Time MNPT
ISI
所以INR不好可能原因有： 病人PT或PT质控时间不对（可以通过以上几点检查） 正常人PT时间（MNPT）不对 试剂对应仪器的ISI值不对
不适用INR的三种情况包括
APTT
内源性凝血途径与 APTT

是反映内源性凝 血 途 径 中 VIII、IX 、XI、XII 因 子 水 平的实验， APTT 只反映因子水平 ，并不反映凝血 因子是否活化。
APTT的检测原理
APTT Reagent
in Blood
XIII XII IX
in Plasma
XIII XII
Intrinsic System
ATIII
XII
XI
PS PC
Ca++
PL PL
VIIa TF PL
VII
IX
Intrinsic pathway
Ca++
Extrinsic pathway
维生素K依赖 凝血因子
X
II
Fibrinogen
Ca++ PL
IIa
ATIII
Common pathway
Fibrin
口服华法令治疗机理和过程
华法令通过拮抗维生素K的作用从而减少和阻止维生素K依赖的凝血因子 II、VII 、IX、X的合成，从而影响内源性凝血途径。

免疫比浊法： （透射光比浊检测）

波长：405nm (ACL200以上仪器)
凝 固 法 发色底物和 免疫比浊法
ACL 00/10000检测原理
离心式液体分配 系统：加入样品和 试剂后，反应盘 1200rpm旋转，使 其在瞬间充分混匀 ，结果准确、精密 度高；
ACL 00/10000检测原理



不同型号血凝仪检测原理介绍
ACL
00/7000 ACL 8/9/10000 ACL FUTURA/ADVANCE ACL TOP
ACL 00/10000检测原理
凝固法（散射比浊）

凝固法：检测根据Fib的凝固形成颗粒，检测900光散射值的增 加值。信号经过软件设计的一系列数学运算法则连续监测凝固 过程曲线，获得结果。
PT INR与华法林
抗栓机制：华法林 减少凝血酶原（II）和FX的作用更重要， 减少FVII和FIX相对较弱。 华法林抗栓作用起效需要6d，主要减少凝血酶原

的生成（凝血酶原有较长的半寿期）。
华法林抗凝作用起效需要2d。
PT INR与华法林

血栓病人口服抗凝药治疗过渡中，肝素与华法 林重叠直至PT INR延长至有效治疗范围，因 为凝血酶原半寿期为60~72h，故重叠4d是必 要的。


INR不适用于测定口服抗凝药初期的病人血浆， 凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ的水平和活性在血浆中半寿 期不同，所以在口服抗凝药初期这些因子的作用 与口服抗凝药稳定后PT延长中起的作用是不同的 INR不适用于肝病 凝血因子缺陷病人的血浆 INR不适用于非抗凝治疗 而PT延长的病人血浆。

维生素K依赖凝血因子
Normal Range 180-360 mg/dL
凝血酶时间TT检测原理

试剂成分：

华法林抗栓效应的另一个提示
PT INR与华法林 WHO的建议

术前预防深静脉血栓 2.0~2.5 髋关节和股骨骨折术前预防 2.0~3.0 深静脉血栓或肺梗死治疗 2.0~3.0 短暂发作的局部缺血 2.0~3.0 心肌梗死 3.0~4.5 动脉血栓 3.0~4.5 心瓣膜置换或修复 3.0~4.5
Activator
Ellagic acid, silica etc. Phospholipid
PL
X IX VIII VII V IV
Blood Sampling Trisodium Citrate
CaCl2
XII XI IX VIII Ca2+, PL
IX VIII VII V
without
without
外源性凝血途径与 PT
PT是反映外 源性凝血途径中II 、V、VII、X因子 水平的实验，PT 只反映凝血因子 水平，并不反映 凝血因子是否活 化。
PT的检测原理
in Blood
XIII XII
IX
in Plasma
XIII XII
PT 试剂 Extrinsic System
III IV
组织因子 Calcium (Ca2+)
出血性疾病的诊断
凝血因子VII缺陷症 （遗传性、获得性） 凝血因子XIIII缺陷症 （遗传性、获得性）
外源途径缺陷
凝血因子VIII、IX、XI缺陷症 （遗传性、获得性）
APTT(N)
因子XIII定性 实验阳性
PT(A) PT(N) PT(N) PT(A)
内源途径缺陷
APTT(N) APTT(A) APTT(A)
光学法提供凝固曲线
LS
数据连续监测
本底扫描， 消除黄疸、 高血脂干扰
Time 凝固点确定： 最大反应速度，与光散绝对值无关
干扰因素


游离血红蛋白〈1g/L,溶血到一定程度,本身会 激活凝血因子 甘油三酯〈7.7mmol/L 胆红素〈256.5umol/LΒιβλιοθήκη Baidu
血栓止血临床基础
止凝血过程
①
血管損傷(出血)
PT INR与华法林 国内资料



术前预防深静脉血栓 1.5~2.5 髋关节和股骨骨折术前预防 2.0~2.5 深静脉血栓或肺梗死治疗 2.0~2.8 短暂发作的局部缺血 2.0~2.8 心肌梗死 2.5~3.0 动脉血栓 2.5~3.0 心瓣膜置换或修复 2.5~3.0
活化部份凝血活酶时间
ACL全自动凝血/纤溶分析仪
生产商：IL公司简介
IL:Instrumentation Laboratory
始建于
1959年
处于全球实验室诊断领域的领先地位 推出第一台血气分析仪 最先推出火焰光度计 获得离心式分析技术的专利
Milano Office
生产商：IL公司简介
销售网络:
欧洲、中东、拉丁美洲、太平洋地区总部在Milano

完备的测试试剂、质控品、校正品组合 先进的基因重组试剂、合成试剂：PT（基因重组、WHO标 准）、APTT（合成）

检测动物标本结果可靠（ACL7000以上）
ACL各型号的共同特点

各检测方法的检测项目

凝固法 PT,APTT,TT,FIB(PT-Based & FIBClauss), FactorsII, V,VII,X,VIII,IX,XI,XII, Protein C, Protein S, APC-R, LAC,PCX,HPX 发色底物法 Anti-thrombin, Heparin(普通&低分 子), PLG, Plasmin Inhibitor, Protein C 免疫比浊法 D-Dimer, vWF Ag , vWF Act ,Protein S, HS-CRP
发色底物法

通过物质的反应显色，检测吸光度变化值。
免疫比浊法（透射比浊）

借助抗原抗体反应系统，检测反应终点吸光度 变化值；只表示含量，不反映所检物活性。
ACL 00/10000检测原理

凝固法（光散比浊检测）

波长：660nm(ACL00/10000)

发色底物法（透射光比色检测）

波长：405nm (ACL200以上仪器)
ACL810 ACL100/200/300/300R ACL1000/2000/3000/3000Plus ACL Futura ACL 6000 ACL 7000 ACL Advance ACL 9000 ACL 8000 ACL TOP
目前在市场上推出的ACL型号

ACL 100 ACL 200 ACL 7000 ACL 9000 ACL Advance ACL TOP


ACL ADVANCE检测原理

凝固法（透射比浊，880nm,180度角检测）
ACL ADVANCE检测原理

发色底物法：405nm
ACL ADVANCE检测原理

免疫比浊法：405nm
ACL TOP检测原理

凝固法（透射比浊，671nm,180度角检测）
ACL TOP检测原理

发色底物法：405nm
X IX
Blood Sampling Trisodium Citrate
IX
VIII
VII V IV III II I
VIII
VII V
without without
IV III II I I
IX X VII Ca2+, PL X Ca2+, PL II V III
37癈
测量凝血时间
Fibrin
正常范围 10-14 sec
PT INR

为了解决这一问题，目前国际 上采用给予 PT 试剂标定国际敏 感度指数(international sensitivity index, ISI）的方法 , 并进以通过 相关公式计算出: “国际标准化比值” International Normalized Ratio, INR 。
X IX VIII VII V IV
Blood Sampling Trisodium Citrate
IX VIII VII V 37癈 I
without without
IV III II I
without
III II I
IX X
Fibrin Measure Clotting Time
Calculated for Fibrinogen concentration
IV III II I
without
III II I
IX X
IV
Calcium (Ca +) Measure Clotting Time
2
37癈
X Ca2+, PL II I V
Normal Range 20-40 sec Fibrin
肝素与APTT



普通肝素通常采用APTT监测，以判断疗效， 该值一般应维持于正常值的1.5~2.5倍。 不同设备与试剂APTT参考值略有不同。 即使APTT在治疗范围内，也可出现严重的出 血并发症。 最初24~48小时内的APTT亚治疗量范围。
有出血症状
无出血症状 共同途径缺陷
凝血因子XII、PK、HMWK缺陷症 凝血因子I、II、V、X缺陷症 （遗传性、获得性） （遗传性、获得性）
FIB的检测原理 (Clauss方法)
in Blood
XIII XII IX
in Plasma
XIII XII
Thrombin Reagent
II
Thrombin
（意大利） 美国和加拿大总部在 Lexington （美国）
从1992年开始，BC与IL结成战略联盟，从产 品和市场双方面合作，共同领导全球血液和流 式细胞自动分析的发展。
ACL系列发展的轨迹



1985年 1988年 1991年 1995年 1996年 1997年 2000年 2001年 2002年 2005年
③
血管収縮 XII因子 内因系 組織因子 纤维蛋白 凝固系 活性化 外因系
内皮細胞
血小板
血管収縮
血管収縮 ②
血小板
凝固因子激活二次血栓形成 ④
XII因子 ｔ－PA 纤维蛋白原 線溶系 活性化 外因系
粘着 凝集
一次血栓 放出
内因系
血小板激活一次血栓形成
線溶系统激活血栓溶解
血液中包含的凝血因子
血凝瀑布学说
清洗缓冲液 Wash R Emulsion的作用：



清洗样本和试剂针内外表面； 作为光学凝固（散射比浊法）中的检测参比100％ 不能用其它自配的清洗液替代 20个独立反应杯； 每杯各有两个隔开的腔； 内圈装样本或第二试剂； 外圈只装试剂； 旋转过程，试剂和样本瞬间混匀；

反应盘Rotor：

ACL各型号的共同特点

光学凝固法:

常规检测：PT/FIB,APTT,TT

特殊检测：因子，FIB-Clauss，PC，PS，LAC，APC-R， 口服抗凝药试验 提供凝固反应曲线 PT衍生FIB法和FIB-Clauss法


FIB:两种检测方法

标准RS-232 接口，方便联网 条形码扫描器，方便样品信息输入和实验室管理 完美的仪器和仪器原厂试剂组合提供精确的结果
ACL TOP检测原理

免疫比浊法：671nm或405nm
光学凝固法检测优点


直接测定，结果可靠 数据连续监测、本底扫描

提供凝固反应曲线，为实验室及临床提供更多信 息 去处黄疸血、高脂血本底，消除干扰 准确测定低纤维蛋白原样品
结果可靠

光散检测原理

每次测试收集1100个数据点，连续平均数据处理方式，利用 先进的第一微分和第二微分法则测定结果，稳定可靠，精密 度高，重复性好