实验六：草莓花药离体培养

实验六：草莓花药离体培养

一、实验目的

了解草莓花药离体培养的原理，初步掌握花药离体培养的方法。

二、实验器材和用具

材料：草莓花瓣

试剂：V/V为70%的酒精、无菌水、0.1%的氯化汞溶液、醋酸洋红试剂

器具：显微镜、胶头滴管、吸水纸、培养皿等

草莓花药培养基配方

1 刘浩，阮玉妹，陈丽君MS＋6-BA 2mg/L＋NAA 0.2mg/L＋糖30g/L+琼脂8%

2 李丕海，蒋英军MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L +蔗糖30g/L+琼脂8%

3 廖璐莎，施洁燕MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8%

4 黄健，黄忠，梁幸MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+糖30g/L+琼脂8％

5 谢蜜蜜，林珍珍MS+KT 1.5mg/L+6-BA 0.2mg/L+NAA 1.5mg/L+糖25g/L+琼脂8%

6 梁嘉麟梁新榜MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂8%

7 覃佳，林秋萍，陈甘霖MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+糖30g/L+琼脂8％

三、实验步骤

1、材料的选取

用醋酸洋红法确定花粉发育时期，通过镜检来确定其中的花粉是否处

于单核期。

注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。

2、材料的消毒

1、花蕾用V/V为70%的酒精浸泡30秒

2、无菌水清洗

3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分

4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为

1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）

5、无菌水冲洗3~5次

用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即。

3、接种和培养

灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。