性激素

分析方法在性激素检测中的应用

摘要：本文阐述了性激素的概念及其研究意义，分别从色谱法和免疫分析法等多种分析方法对性激素性进行检测，并对未来性激素的检测方法进行了展望。

关键词：性激素；检测方法

性激素是指由性腺分泌的激素。性激素在人体的生长、发育、成熟和衰老过程中起着极为重要的作用。性激素主要包括雄激素、雌激素、孕激素等。卵巢、睾丸和肾上腺皮质都能合成这些激素。雄激素是一类含有19个碳原子的甾体激素，是所有雄性激素的总称。在男性，雄激素主要来源于睾丸的间质细胞。女性体内也有少量雄激素，来源于肾上腺皮质网状带和卵巢。雌激素分为雌二醇、雌酮、雌三醇。性激素的作用可能通过性激素受体介导。根据公认的Jenson模式，性激素弥散入细胞后，先与靶细胞浆中的特异受体结合，形成激素受体复合物，具有新的分子构型，能够进入细胞核内，与核内物质反应，主要结合在染色质上，影响DNA 转录，激活基因，从而合成新的mRNA，形成新的蛋白质或酶，进而影响细胞的生理功能[1]。

近年来, 性激素项目在临床上得到广泛使用, 其在诊断不孕症患者、更年期综合症、卵巢早衰、继发性闭经方面具有重要的临床意义, 并和甲状腺功能障碍有联系[2]。由此可见，性激素对于人的身体健康有很大的影响，也正因为如此，性激素的检测变得尤为重要。到目前为止，性激素的检测方法有气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用(GC-MS) 法、液相色谱- 质谱法、毛细管电泳法、免疫分

析法等。

1、气相色谱法( GC)

性激素是高沸点、低挥发性物质, 不适宜采用气相色谱法直接进行测定, 一般需要经过衍生化后再用气相色谱仪进行分离测定。胡伟等人采用气相色谱, 氢火焰离子化检测器, 对雌二醇的测定方法进行了研究, 采用三氟乙酸酐为衍生化试剂, 着重讨论了衍生化条件、气化温度对结果的影响, 并确定了最佳测定条件[3]。

2、高效液相色谱法(HPLC)

高效液相色谱是根据被检物在流动相与固定相之间相互作用的差别引起移动速度的不同而将混合物中的各组分进行分离和定量，分离后的各组分随着流动相流经相应的检测器进行检测，并通过记录仪以出峰的形式记录下来，混合物中各组分有其各自相应的保留时间，以峰高或峰面积定量[4]。HPLC是目前应用最广泛的测定性激素的方法, 具有分离效能高、分析速度快、应用范围广等特点, 适用于分离和分析高沸点、大分子、不稳定热性化合物。刘宏程等人采用基质固相分散技术, 对牛奶中己烯雌酚、烷己雌酚和双烯雌酚残留进行提取和净化处理，并通过高效液相色谱进行分离。3种雌激素的平均回收率为84. 1% ~ 95. 3% , 相对标准偏差为3. 5% ~ 7. 8% 。己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚的检出限分别为0. 004、004 和0. 006 mg/ kg, 定量限分别为0. 01、01 和0. 02 mg/ kg[5]。刘虹等人建立了测定奶粉中己烯雌酚的高效液相色谱法, 样品经甲醇超声萃取、离心, 提取液浓缩后经0.45m滤膜过滤进高效液相色谱分析。测定己烯雌酚的线

性范围0. 5~ 20 g / ml,相关系数r 0. 9995, 平均回收率92. 2% , 检出限为0. 06 g[6]。迂君等人建立了牛奶中雌性激素高效液相色谱测定方法。样品经乙腈沉淀蛋白,超声波提取,正己烷脱脂净化,在优化的色谱条件下,采用二极管阵列检测器对牛奶中雌二醇、雌三醇、雌酮3种雌激素残留进行检测,回收率大于85% 。该方法灵敏度较高,干扰少, 结果令人满意[7]。赵金莲等人建立了牛奶中3 种雌激素残留量( 雌二醇、己烯雌酚、雌酮)的HPLC检测方法。色谱条件采用体积比1: 1的乙腈- 水作为流动相; 检测波长为230 nm; 流速为1. 0ml/ min。采用该方法对市售鲜牛奶中3 种雌激素残留量进行测定, 结果表明: 其分离效果良好, 平均回收率范围82. 2% ~95. 5% , 相对标准偏差为2. 0% ~ 4. 7% , 最低检出限达1. 0~ 2.0 ng/ ml。该方法具有灵敏、准确、精密、无杂质干扰等优点[8]。

3气相色谱-质谱联用(GC-MS) 法乳制品中性激素残留分析精度和检测要求越来越高。传统的GC和HPLC由于无法获得物质的结构信息, 存在假阳性的风险, 难以满足痕量残留分析的要求。色谱与质谱技术联用, 既发挥了色谱的高分离能力又发挥了质谱的高鉴别能力, 特别适用于确证性分析。

4液相色谱- 质谱法( LC- M S) 液质联用技术将液相色谱高效的在线分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力相结合, 可以同时得到化合物的保留时间、分子量及特征结构碎片等丰富的信息, 是组分复杂样品和微重样品分离分析最有力的研究手段[9]。LC- M S 的应用不受沸点的限制并能对热稳定性的待测物进行分离、分析, L

C- M S 已成功应用于分析热稳定性差, 分子量大的化合物。王全林等建立了测定牛奶和婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的超高效液相色谱- 串联质谱方法。方法采用氘代诺龙- d3为内标进行定量检测。牛奶和婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的检出限分别为0.07、0.39u g / kg, 定量下限分别为0. 2、0.95u g/ kg。在4、10ug/ kg加标水平下,牛奶和婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的回收率为76% ~ 90% ,相对标准偏差为5. 0% ~ 15. 2%[10]。

5免疫分析方法

免疫分析法的原理是被分析药物(Ag)和标记后的该药物(Ag*)与该药物的特异性抗体(Ab)竞争有限的结合部位未标记药物(Ag)的浓度决定于标记药物(Ag*)与特异性抗体(Ab)结合的量。标记物可能是放射性同位素、荧光物质或化学发光物质, 依据标记的属性, 测定其放射性、酶反应后的UV 吸收和荧光强度[11]。目前使用最普遍的是放射免疫分析法和酶联免疫分析法和化学发光免疫分析。

放射免疫分析(RIA)法是最早建立的一种免疫分析法, 是放射性同位素测定法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素分析技术。该法具有灵敏度高、特异性强、标记物容易制备以及放射性强度容易检测等优点, 特别适合复杂样品中微量或痕量物质的分析。

酶免疫分析法( EIA )1966年A vraneas和U rie l首先将酶偶联于抗原和抗体, 1974年Syvaco首先报道了均相酶测免疫分析(EMIT ) , 开创了酶免疫分析的临床应用。EIA法操作方便、安全、费用低廉、宜于大规模操作，故近年来发展十分迅速，从发展趋势上看，有可能