遗传转化技术PPT课件
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（2）选择基因：主要是该基因的表达产物对给予植物细胞一种选择压 力，至使未转化植物细胞不能生长、发育和分化，淘汰掉。如抗庆大每素 基因 （Gent）；氯霉素转移酶基因（Cat基因）；抗卡那霉素基因（NPT2基因） 等抗抗生素基因。
（3）上述两种基因也统称选择报告基因。单独使用或联合使用。 必须符合两个情况：A 其表达产物或产物的类似功能在未转化的
四 转基因植物的应用和现状 1 在农业上应用 2 在医药方面的应用 3 存在问题： A 相对的盲目性 B基因沉默与目的不吻合 C 在禾本科等单子叶植物中相对困难 D 基因逃逸与环境安全性问题
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
植物细胞内并不存在；B 便于检测；C 基因较小，可构成嵌合基因。 （3）真核生物启动子（基因）：用于目的基因、选择报告基因在宿主 细胞的启动表达。一般为花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子。
三 根癌农杆菌转化方法 4 根癌农杆菌转化技术程序流程
工程质粒的提取、纯化
质粒载体构建
（包括目的基因、筛选报告今音、启动子连接到Ti质粒的T-DNA序列内）
植物组织培养的一般概念和分类
2 几种培养类型及相关关系图解 外植体（茎、叶、根、胚、花药等等）
丛生芽、茎（茎及茎尖）
植物 快繁、脱毒
愈伤组织
遗传转化 无性系筛选
原生质体培养 悬浮细胞培养
体细胞融合 次生代谢产物生产
单倍体 （花药培养 ） 三倍体（胚乳培养） 胚培养
单倍体育种 多倍体育种 胚挽救、远源杂交
You Know, The More Powerful You Will Be
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
2 植物遗传转化与植物组织培养技术的关系 A 植物离体培养是植物遗传转化的最基本的操作平台： a 离体 b 微型 c 可控
B 可以用做遗传转化平台或受体的组织培养技术有： a悬浮细胞培养体系 b 原生质体培养—植株再生体系 c 愈伤组织—植株再生培养体系（包括体细胞胚） d 单倍体—植株再生培养体系 e 外植体（根、茎、叶）—直接再生体系（快繁）
二 转基因程序及主要方法 1 一般程序
二 转基因程序及主要方法 2 基因介导方法和用到的离体培养物
二 转基因程序及主要方法
2 基因介导方法和用到的离体培养物
除上述方法外近年来报道新方法还有： 激光微束介导法 花粉管导入法 根癌农杆菌-真空介导法 离子束介导法 转座子系统介导法
根癌农杆菌方法
外源目的基因、真核生物启动子、选择基因、报告基因片段
体外连接到质粒中
质粒转化进入到根癌农杆菌
感染植物外植体
Agrobacterium tumefaciens
三 根癌农杆菌转化方法
3 根癌农杆菌技术涉及到的概念：
（1）报告基因：或筛选标记基因，指示基因。用于指示目的基因在宿 主细胞内的整合状况。目前用到的基因主要有：B-葡萄糖苷酸酶基因（GUS 基因）；冠瘿碱 合成酶基因（章鱼碱合成酶基因，胭脂碱合成酶基因）； 荧光蛋白基因等。
第十六章 植物的遗传转化
一 引言 二 转基因程序及主要方法 三根癌农杆菌转化方法 四 转基因植物的应用和现状 五 课后问题
一 引言源自文库
1 概念： 植物遗传转化（转基因）就是将外源基因导入植物细胞，经过 组织培养将细胞培养成植株，并且导入 的基因在植物体内能 够稳定表达和遗传。这样的植物称为转基因植物。
根癌农杆菌的转化
（包括感受态根癌农杆菌的制备、工程质粒向根癌农杆菌的转化）
植物细胞的转染
（含工程质粒根癌农杆菌的扩增、与植物离体培养物在含抗生素的培养基上的共培养）
植株再生
转基因植株的鉴定
三 根癌农杆菌转化方法 4 转基因植株的筛选和检测 （1）选择基因可以在培养阶段对转化细胞、组织
有主动筛选作用 （2）报告基因可在获得再生植株后进行组织显微镜 细胞、常规生化的初步检测 （3）转基因植物中目的基因的检测 基因水平：PCR检测，Southern Blot RNA水平: RT-PCR;Nouthern Blot 蛋白质水平: Wethern Blot，血清学反应，表 达蛋白的分离纯化 （4）转基因植物的性状分析
病毒表达系统介导
三根癌农杆菌转化方法
1 根癌农杆菌介绍：
根癌农杆菌是一种能够感染植物特别是双子叶植物 的细菌；根癌农杆菌含有一个以上的质粒（Ti，核外遗传单位）；根癌 农杆 菌感染植物后，质粒可以进入植物细胞内，进行复制，并有把DNA整合到 宿主染色体上的能力（表现为瘤状突起，冠瘿瘤）。
2 根癌农杆菌介导方法思路：
（3）上述两种基因也统称选择报告基因。单独使用或联合使用。 必须符合两个情况：A 其表达产物或产物的类似功能在未转化的
四 转基因植物的应用和现状 1 在农业上应用 2 在医药方面的应用 3 存在问题： A 相对的盲目性 B基因沉默与目的不吻合 C 在禾本科等单子叶植物中相对困难 D 基因逃逸与环境安全性问题
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
植物细胞内并不存在；B 便于检测；C 基因较小，可构成嵌合基因。 （3）真核生物启动子（基因）：用于目的基因、选择报告基因在宿主 细胞的启动表达。一般为花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子。
三 根癌农杆菌转化方法 4 根癌农杆菌转化技术程序流程
工程质粒的提取、纯化
质粒载体构建
（包括目的基因、筛选报告今音、启动子连接到Ti质粒的T-DNA序列内）
植物组织培养的一般概念和分类
2 几种培养类型及相关关系图解 外植体（茎、叶、根、胚、花药等等）
丛生芽、茎（茎及茎尖）
植物 快繁、脱毒
愈伤组织
遗传转化 无性系筛选
原生质体培养 悬浮细胞培养
体细胞融合 次生代谢产物生产
单倍体 （花药培养 ） 三倍体（胚乳培养） 胚培养
单倍体育种 多倍体育种 胚挽救、远源杂交
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谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
2 植物遗传转化与植物组织培养技术的关系 A 植物离体培养是植物遗传转化的最基本的操作平台： a 离体 b 微型 c 可控
B 可以用做遗传转化平台或受体的组织培养技术有： a悬浮细胞培养体系 b 原生质体培养—植株再生体系 c 愈伤组织—植株再生培养体系（包括体细胞胚） d 单倍体—植株再生培养体系 e 外植体（根、茎、叶）—直接再生体系（快繁）
二 转基因程序及主要方法 1 一般程序
二 转基因程序及主要方法 2 基因介导方法和用到的离体培养物
二 转基因程序及主要方法
2 基因介导方法和用到的离体培养物
除上述方法外近年来报道新方法还有： 激光微束介导法 花粉管导入法 根癌农杆菌-真空介导法 离子束介导法 转座子系统介导法
根癌农杆菌方法
外源目的基因、真核生物启动子、选择基因、报告基因片段
体外连接到质粒中
质粒转化进入到根癌农杆菌
感染植物外植体
Agrobacterium tumefaciens
三 根癌农杆菌转化方法
3 根癌农杆菌技术涉及到的概念：
（1）报告基因：或筛选标记基因，指示基因。用于指示目的基因在宿 主细胞内的整合状况。目前用到的基因主要有：B-葡萄糖苷酸酶基因（GUS 基因）；冠瘿碱 合成酶基因（章鱼碱合成酶基因，胭脂碱合成酶基因）； 荧光蛋白基因等。
第十六章 植物的遗传转化
一 引言 二 转基因程序及主要方法 三根癌农杆菌转化方法 四 转基因植物的应用和现状 五 课后问题
一 引言源自文库
1 概念： 植物遗传转化（转基因）就是将外源基因导入植物细胞，经过 组织培养将细胞培养成植株，并且导入 的基因在植物体内能 够稳定表达和遗传。这样的植物称为转基因植物。
根癌农杆菌的转化
（包括感受态根癌农杆菌的制备、工程质粒向根癌农杆菌的转化）
植物细胞的转染
（含工程质粒根癌农杆菌的扩增、与植物离体培养物在含抗生素的培养基上的共培养）
植株再生
转基因植株的鉴定
三 根癌农杆菌转化方法 4 转基因植株的筛选和检测 （1）选择基因可以在培养阶段对转化细胞、组织
有主动筛选作用 （2）报告基因可在获得再生植株后进行组织显微镜 细胞、常规生化的初步检测 （3）转基因植物中目的基因的检测 基因水平：PCR检测，Southern Blot RNA水平: RT-PCR;Nouthern Blot 蛋白质水平: Wethern Blot，血清学反应，表 达蛋白的分离纯化 （4）转基因植物的性状分析
病毒表达系统介导
三根癌农杆菌转化方法
1 根癌农杆菌介绍：
根癌农杆菌是一种能够感染植物特别是双子叶植物 的细菌；根癌农杆菌含有一个以上的质粒（Ti，核外遗传单位）；根癌 农杆 菌感染植物后，质粒可以进入植物细胞内，进行复制，并有把DNA整合到 宿主染色体上的能力（表现为瘤状突起，冠瘿瘤）。
2 根癌农杆菌介导方法思路：