梅毒的实验室诊断

（三）、繁 殖
繁殖方式与其生活环境有关 近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体内 适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂成长 短两段 分裂增代时间为30—33小时 当条件不利时，以分芽子繁殖 生活发育周期:颗粒期、球形体期及螺旋体期，与 所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关






（九）、抗 原 1．表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体及密螺 旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体 2．螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原 性螺旋体有交叉反应 3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵 入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗 原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体， 称为反应素（Aegagin），可与牛心肌或其他正常动物心肌 提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反 应（华氏试验）


检测方法-梅毒螺旋体血清试验
TPPA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用
梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞， 此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生 可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红 色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。
2.
3.
暗视野显微镜检查
检测方法-血清学检测
根据检测所用抗原不同，临床血 清试验分为两大类：
1.非梅毒螺旋体抗原血清试验
2.梅毒螺旋体抗原血清试验
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验
性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 血浆反应素环状卡片试验（RPR、 TRUST）

抗梅毒治疗后的血清反应
(1)血清阴转 (2)血清滴度降低不阴转，血清抵抗


体内仍有潜在的活动性病变存在 病人体内的免疫力持久(反应素长久存在) 对抗梅药物有耐药性或剂量不足

(3)血清反应复发
谢 谢!
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验


所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本 成分都一样,其基本成分是心磷脂 、卵磷脂 和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀 颗粒 被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验

RPR试验特点： 在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉 淀的指示物 用白色的硬纸片替代玻片 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒 携带方便 操作简单 价格便宜 试验的结果可长期保存


检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点

前带现象
指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中 存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴 性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将 血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该 现象称为前带现象。
检测方法-梅毒螺旋体血清试验
采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反 应。 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）

（六）、宿 主
梅毒螺旋体只感染人类

人是梅毒的唯一传染源



（七）、毒力因子 目前未证明具有内毒素或外毒素 粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子 荚膜样的粘多糖能保护菌体免受环境中不 良因素的伤害，在体内可阻止大分子物质 （如抗体）穿透，从而保护菌体，还有抗 吞噬作用 粘多糖酶与对组织细胞的吸附，对组织基 质的分解和荚膜的合成有密切关系
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验
甲苯胺红试验(TRUST)特点： 其原理和成分与RPR试验相同 用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 其余的特点均与RPR相同

非梅毒螺旋体血清试验原理示意图
RPR结果
TRUST结果
检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义

非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏
感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效 观察、判愈、复发或再感染的指征。



（八）、致 病 性 由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖，荚膜 中含有的N-乙酰-D-半乳糖胺，不能自行合成，须 从宿主细胞获得 其粘多糖酶吸附含粘多糖的组织细胞表面的粘多 糖受体上，分解宿主细胞的粘多糖、获取合成荚 膜所需的物质 由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成 分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤 破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管 腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡 等病变
梅毒的实验室诊断
一、概述-梅毒病原体


（一）、名 词
由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病 是我国卫生部规定的8种重点防治性病之一 《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病

世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一


梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP ）







(五）、生存条件 厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存 干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可 于短时间将其杀死 在血液中4℃经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传 染性 温度的影响：41-42℃时可生活1-2小时，在48℃仅半小时即失去感染 力，100℃立即死亡。对寒冷抵抗力大，在0℃时，可生活48小时，如 将梅毒病损标本臵于冰箱内，经1周仍可致病。在低温（-78℃）保存 数年，仍可保持其形态、活动及毒性 在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右 在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时 在干燥环境中可见迅速死亡 。

治疗前
一期
治疗后
早 期
二期
早期潜伏
晚 晚期潜伏 期 三期 阳性 阴性
梅毒血清学试验结果的临床意义总汇
USR RPR VDRL _ TPHA TPPA FTA-ABS _ 意义
+ + --
+ -+
排除梅毒 一期梅毒的早期 艾兹病患者合并梅毒 现症梅毒(梅毒孕妇所生 的婴儿除外) 生物学假阳性 早期梅毒经治疗后




（四）、培 养 一般不能人工培养 Nichols株（有毒株）能接种在家兔睾丸中或眼前房内繁殖， 能保持毒力 转种至加有多种氨基酸的兔睾丸组织碎片的特殊培养基中， 25℃厌氧环境下能使螺旋体保持运动能力4-7天 1981年Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞在1.5%氧的大 气环境进行培养，经9-12天孵育后，螺旋体数比接种数平 均增加49倍，对兔仍保持毒力 Reiter株能生长繁殖，已丧失致病力 Nichols株和Reiter株已广泛用作多种梅毒血清学的诊断抗 原
二、检测方法-病原体检查

梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方 法。
诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的 渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在 暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态 和运动方式. 病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、 镀银染色法和直接荧光法


1.
暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克 隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可 确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野 显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项 目之一。 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者 的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十 分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，
假阴性反应


在梅毒螺旋体感染后1～2周内可呈阴性反应 梅毒螺旋体感染不久即开始治疗 晚期梅毒患者的血清中反应素含量低，敏 感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应 在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应， 前带现象(prozone phenomenon)
血清学检测的几个特点


在最初的两周可能是阴性结果 FTA、TPPA和ELISA在所有阶段都最敏感 VDRL和RPR在三期梅毒期可能为阴性 VDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒
检测方法-梅毒螺旋体血清试验

FTA-ABS
FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原 理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂
（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成
抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免 疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗 体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光， 即为阳性反应。


(十）、免 疫 以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅助防御 作用 当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍可出现 一期梅毒症状 此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内产生的 免疫力有关 机体免疫力强，螺旋体能变成颗粒形或球形，在 体内一些部位潜伏起来，一旦机体免疫力下降， 螺旋体又可侵犯体内某些部位而复发。
是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋 体


（二）、生物学特性 小而纤细的螺旋状微生物 长5～20μm，粗细<0.2μm 有6 ～ 12个规则的螺旋 基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕
行动缓慢而有规律 - 围绕其长轴旋转中前后移动 - 伸缩其圈间之距离而移动 - 全身弯曲如蛇行

梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故 TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。

TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒 螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图
治疗前
早 期
一期 二期 早期潜伏 期晚 晚期潜伏 三期
治疗后
阳性
阴性
梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图
Tቤተ መጻሕፍቲ ባይዱPA/TPHA
+
Sheep red cell T.pallid um Sensitise d cell
+
Sensitise d cell Specific Antibody
Hemaggluti nation
检测方法-梅毒螺旋体血清试验的临床意义

作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本 的确证试验。
梅毒血清假阳性反应


技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本溶 血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成为阴 性。 生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验是 非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病， 也可释放心拟脂至血液中，产生反应素，如麻风、 麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性肺炎、传染性 单核细胞增多症，系统性红斑狼疮，非典型性肺 炎、甚至妊娠都可出现阳性，但这类患者血清反 应滴度低，很少超过1：8。而且半年内渐转成阴 性。另外可用特异性的梅毒血清反应证实。如用 FTA－ABS试验