猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测
学术研究doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2014.05.007氟喹诺酮类药物属第3代喹诺酮类抗菌药，适应于敏感病原菌所致的呼吸道、胃肠道等感染，具有吸收好、组织浓度高、半衰期长、抗菌谱广等优点，已成为兽医临床的常用药。
但随着临床用量的不断增长，因不合理用药或滥用药而导致的畜产品质量安全问题时有发生，并越来越引起社会的广泛关注。
本文在运用“农业部1025号公告-14-2008”标准[1]的基础上，结合本实验室的工作实际，随机选取8名本实验室的化验员，同时并独立完成猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测工作，得出检测回收率，分析和判断测定结果的准确性。
1仪器与试药1.1仪器天平，感应0.01g；分析天平，感应0.00001g；Aglient1200高效液相色谱仪-配荧光检测器；振荡器；组织匀浆机；离心机；Varian BondElut C18柱（100mg/mL）固相萃取柱；0.45μm微孔滤膜。
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测张漫1,李娜2,高木珍1,张宁1,刘晓辉1,王辉1（1.天津市兽药饲料监察所天津300402；2.天津市农产品质量监督检验测试中心天津300381）摘要：随机选取本实验室内的8名化验员，分别测定猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留量，通过对结果数据的分析，得出本实验室测定结果的准确程度。
通过磷酸盐缓冲溶液提取猪肉组织中的氟喹诺酮类药物残留，经C18柱净化后，用高效液相色谱法测定含量。
环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，批内变异系数均≤14%，批间变异系数均≤6%。
结果数据满足标准要求，证明本实验室能准确开展此项检测活动。
关键词：氟喹诺酮类药物；达氟沙星；恩诺沙星；环丙沙星；沙拉沙星；残留检测Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork TissueZhang Man1,Li Na2,Gao Muzhen1,Zhang Ning1,Liu Xiaohui1,Wang Hui1（1.Tianjin Institute of Veterinary Drugs and Feed Control,Tianjin,300402.2.Tianjin supervision and Testing Center of Agricultural Product Quality,Tianjin,300384）Abstract:We selecting8technicians in our laboratory randomly,letting they determine fluoroquinolonesresidues in pork tissues separately.Based on the analysis of the experimental data,we concluded the accuracy ofmy determination results.The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution,cleaned byC18SPE cartridge,then content was determined by HPLC.The average recoveries of four components were95.6%,86.9%,89.3%,95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below14%,intra-assay were below6%.The results meet requirements,so we can carry out the test.Key word:fluoroquinolones;danofloxacin;enrofloxacin;ciprofloxacin;sarafloxacin;residues determination. All Rights Reserved.学术研究1.2药品与试剂达氟沙星，批号10301，含量93.5%,Dr.Ehren-storfer Gmbh公司；恩诺沙星，批号H0081206，含量99.9%,中国兽医药品监察所；环丙沙星，批号130451-201203，含量84.2%,中国食品药品检定研究所；沙拉沙星，批号20629，含量95.0%,Dr. Ehrenstorfer Gmbh公司。
喹诺酮类药物残留量的测定 标准
喹诺酮类药物残留量的测定标准一、引言喹诺酮类药物是一类常用的抗菌药物，被广泛应用于畜禽养殖业和养殖水产业中，以预防和治疗动物植物的感染疾病。
然而，由于长期和滥用使用，喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量问题日益严重，给食品安全带来了一定的挑战。
为了保障消费者的健康和食品安全，加强对喹诺酮类药物残留量的测定标准显得尤为重要。
二、国内外对喹诺酮类药物残留量的测定标准1. 国际标准在国际上，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准，主要是由国际食品安全标准委员会（Codex Alimentarius Commission）和世界卫生组织（WHO）制定并发布的《动物兽药残留限量国际标准》。
在该标准中，对不同种类的喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量都有详细的规定和限定，以确保产品的安全合格。
2. 国内标准在我国，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准主要由国家食品安全标准委员会负责制定和管理。
国家食品安全标准委员会及其下属的各专业委员会，根据国家食品安全相关法律法规的要求，不断进行标准的修订和完善，以适应国内外食品安全形势的发展和变化。
三、喹诺酮类药物残留量的测定方法1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前国际上常用的一种喹诺酮类药物残留量测定方法。
该方法准确、灵敏度高，并且可对多种喹诺酮类药物进行同时测定，适用于不同类型的畜禽产品。
2. 超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）超高效液相色谱-串联质谱法是一种新型的分析技术，具有分辨率高、灵敏度高和分析速度快的特点。
该方法适用于对喹诺酮类药物残留量进行快速准确的测定，是当前国内外研究和应用的热点之一。
四、个人观点和理解在我看来，喹诺酮类药物残留量的测定标准是食品安全监管中的重要环节，它不仅关乎着畜禽产品的质量和安全，更关系着广大消费者的身体健康和生命安全。
当前，我国在食品安全监管方面已取得了一定的成绩，但也面临着一些挑战和问题，如标准的实施和监管不到位等。
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测黄 立（昆明市食品药品检验所，云南昆明 650032）摘 要：建立了猪肉、牛肉、鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共15种兽药残留量的快速检测方法。
样品经过Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液-2.5%乙酸乙腈溶液提取，经氯化钠、无水硫酸钠除水盐析后取乙腈相用高含碳量的C18吸附粉吸附净化，再用0.1%甲酸水乙腈（75+25）定容后上机检测。
结果显示，本方法测定三类混合药物的回收率在63.9%～104.0%，RSD在1.1%～12.2%，检测快速、灵敏度高、重复性好，定性定量准确可靠，适用于猪肉、牛肉及鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类药物残留的快速检测。
关键词：液相色谱-串联质谱法；磺胺；四环素；喹诺酮Rapid Detection of Multiple Types of Veterinary Drug Residues in Livestock and Poultry MeatHUANG Li(Kunming Institute for Food and Drug Control, Kunming 650032, China) Abstract: A rapid method was established for the determination of 15 veterinary drug residues of sulfonamides, tetracyclines and quinolones in pork, beef and chicken. The samples were extracted by Na2EDTA-Mcllvaine buffer-2.5% acetic acid acetonitrile solution, and the acetonitrile phase was purified by adsorption with high carbon content C18 adsorbent powder after dehydration salting by sodium chloride and anhydrous sodium sulfate, and then fixed with 0.1% formic acid aqueous acetonitrile (75+25) and detected on the machine. The results showed that the method determines the recovery of the three types of mixed were 63.9%～104.0%, RSD were 1.1%～12.2%, rapid detection, high sensitivity, good repeatability, accurate and reliable qualitative and quantitative, suitable for the rapid detection of sulfonamides, tetracyclines, quinolones drug residues in pork, beef and chicken.Keywords: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamide; tetracycline; quinolone合理使用兽药可以提高畜禽养殖效率，节省成本，缩短出栏周期，进而增加收益，但越来越多的人为追求经济效益滥用药物，导致了一些兽药以残留的形式流入人体，从而对身体健康造成威胁[1]。
浅析氟喹诺酮类兽药残留检测方法
３ 氟喹诺酮 类药物残 留的检测方法
目前 ，常用 于氟 喹诺酮 类药 物残 留 的检 测方 法 可分 为４ 液相色 谱法对 猪 肉组织 中恩诺沙 星和环 丙沙 星残 留量 进行 检 大类 ：微 生物法 、仪器分 析法 、化学发 光与 电化学发光 分析 测 ，结 果 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 的质量 浓度 在 ２ｇＬ～１ ０ ｇＬ ／ ０ ／ ｇｋ 。 法及免疫分析法。其中仪器分析法常见的有高效液相色谱法 范 围内呈线性关 系 ，它们 的最低定量限均为２／ｇ （ＰＣ Ｈ Ｌ ）、液一 质联用分析法 （ ＣＭ ）、高效毛细管电泳法 ３ ２ ２ 高效液相 色谱 一 Ｌ／Ｓ ．． 质谱联 用法 （ ｃ Ｍ ） 随着研究 的深 Ｌ— Ｓ （ Ｐ Ｅ）等 ；免疫 分析检测法包括 间接竞 争Ｅｉ 测定法 、免 入 和对食 品安全越 来越 高 的重 视 ，定 性准 确 ，灵 敏度更 高 的 ＨＣ ｌａ ｓ 疫传感器分析法 、免疫亲和色谱 （ＡＣ）分析法等【 。 Ｉ ｌ 液质联 用技 术渐渐 被人 们采纳 ，这种 技术不 仅可 以更精 确 的
兽 药 应 用
中国畜牧兽 医文摘
２ １年 ０１
２卷 ７
第３ 期
浅析氟喹诺酮 类兽药残 留检测方法
将 ，、 Ｊ武 ・
（ 南大 学荣昌校 区，重庆 西
４ ２６ ） ０ ４ ０
［ 要］ 解决兽 药残留监 控 问题是提 高动物源性食 品质 量，保障食品安全 的关键 性环节之一 ，因此在食 品检 验 中建立 一 摘 些 方便 快捷 的检测方 法显得 尤为重要 。本 丈以兽 药氟喹诺酮类为例 ，系统 阐述 了目前在临床检测 中 已经建立的有关 氟喹诺酮类 药物 残留的检 测技 术 ，以期能为其他药物残 留检测提供参考方 向。
固相萃取-UPLC-MS MS法测定猪肉中11种喹诺酮类兽药残留
固相萃取-UPLC-MS MS法测定猪肉中11种喹诺酮类兽药残留作者：何瑞雪来源：《现代食品》 2019年第1期在畜牧业生产、禽类饲养以及水产品养殖中,经常会使用大量兽药,主要有喹诺酮类、青霉素类等。
这些药物违规会通过食物链在人体内蓄积,从而在人体内产生耐药性和抗药性,严重的还会致突变、致畸和致癌[1]。
喹诺酮类药物具有广谱抗菌作用,大量用于人和的动物医疗以及饲料添加剂,以提高饲料利用率和促进动物生长[2-3]。
从1962 年萘啶酸问世以来,已经合成了数以千计的喹诺酮类化合物[4]。
近年来,喹诺酮类药物已在水、土壤和畜禽中均有不同程度的检出,因此要加强对此类药物残留的监控。
目前,用于喹诺酮类药物残留的检测方法有微生物法[5]、酶联免疫分析法[6]、高效液相色谱法[7]、高效液相色谱/ 质谱联用法[8]、毛细管电泳法[9-10] 和荧光分光光度法[11]等。
其中,高效液相色谱/ 质谱联用法定性更准确,灵敏度更高,国家标准检测方法中也其为主,但国标方法样品前处理复杂,耗时长,且干扰物净化效率低,因此对样品前处理方法的简化及提升净化效率,可大大缩短检验时长,提高检测的准确性。
1 材料与方法1.1 材料与试剂甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯,购自默克公司;喹诺酮类兽药标准品,包括诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星,购自上海安谱实验科技股份有限公司和农业部环境保护科研监测所。
1.2 仪器与设备XEVO-TQ-S Micro 三重四级杆质谱仪( 配有AcquityUPLC 超高效液相色谱仪及电喷雾离子源),Oasis Prime HLB 200mg/6mL 固相萃取柱(美国Waters公司);SIGMA 高速冷冻离心机(美国SIGMA);Milli Q 超纯水系统(美国Millipore 公司);IKA 刀式研磨仪(美国IKA);IKA 旋转蒸发仪(美国IKA)。
动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测研究
性、 生殖 毒 性 、 跟腱 炎 和局 部 刺激 症 状 等［ ， 动物 及 人类 健 康造 成 一 定 危害 。随着 Ｆ 药 物在 兽 医临 １对 ］ Ｑｓ 床和水 产养 殖应 用 的增 加 ， 副作 用 以及 耐药 菌 株逐 渐增 加 ， 毒 其残 留问题 已引起 广泛 的关 注 。 Ｆ Ｑｓ残 留除 了其 副 作用 直 接 危害 人类 外 ， 严重 的 问题是 食 品中残 留低浓 度 的药 物 可 能使 人 的致 更 病 菌 产生 耐 药性 ， 而 使 Ｆ 从 Ｑｓ对 人类 疾 病 的疗 效 降低 甚 至 失效 ， 开 发 的 Ｆ 新 Ｑｓ药 品 的市 场周 期大 大 缩 短 。因此 ， 必须 十分 重视 Ｆ Ｑｓ在 动物 性食 品 中 的残 留问题 。 为了监 控 Ｆ Ｑｓ在 动 物性 食 品中 的残 留 ， 联合 国粮 农 组织 （ ＡＯ） 世 界卫 生 组织 （ Ｆ ／ ＷＨＯ） 食 品添加 和 剂 联合 专家 委 员会 （Ｃ Ｆ 制 定 了单 诺 沙星 在 牛 、 、 的最 高残 留限量 ， 、 Ｊ Ｅ Ａ） 猪 禽 牛 家禽 的 肝 、 ４ ０￣ ／ ｇ 肾 ０ ｇｋ ，
Ｖｏ ． ５ Ｎｏ ３ １２ ．
Ｍ ａ Ｏ７ ｙ ２Ｏ
文 章 编 号 ：０ ８０ ７ （０ ７ ０ —０ ９０ １ ０ — １ １ ２ ０ ） ３ ０ ５ ～４
动物性食 品中氟 喹诺 酮类药物残 留检测研 究
廖 洁 丹
（ 山科学技术 学院 动 物 医学系， 东 佛 山 ５８０） 佛 广 ２ ０ ０
肌 肉 ２ Ｏ￣ ／ ｇ 脂 肪 及 鸡 的 皮 肤 １ ０￣ ／ ｇ 猪 的 肾 脏 ２ Ｏ￣ ／ ｇ 肌 肉 、 肪 １ ０￣ ／ ｇ 肝 脏 Ｏ ｇｋ ， ０ ｇｋ ； Ｏ ｇｋ ； 脂 ０ ｇｋ ，
肉制品中喹诺酮残留检测
I ustry科技文苑行业肉制品中喹诺酮残留检测□ 张宏博 王洋 王燕 王岩 靳志敏 范鑫 郑玉山（通讯作者） 内蒙古自治区食品检验检测中心摘 要：喹诺酮类药物是具有4-喹诺酮基本结构并且由人工合成的抗生素类药物，是一种人畜共用药，食用含有喹诺酮残留的食品会对人体造成危害。
本实验参照G B/T 21312-2007，采用液相色谱-质谱/质谱法对羊肉中6种喹诺酮类药物的残留量进行检测。
检测结果显示，环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星检出限分别为0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.05μg/kg；回收率为84.1%~102.1%，各物质的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%；空白对照值为零；本次实验所采集的12种羊肉样品均未检出环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星这6种抗生素类药物，符合农业部标准。
关键词：液相色谱-质谱/质谱法 喹诺酮类药物 氧氟沙星 环丙沙星 诺氟沙星1 引言抗生素类兽药长期无节制的使用会导致动物免疫力下降，同时降低了疫苗的作用，进而使细菌疾病成为家禽的重点传染疾病[1]。
喹诺酮是一类人畜通用药，因其具有组织浓度高、药物保留性好、抵抗多种细菌、杀菌作用强、抗菌时间长等特点而被广泛应用于水产和畜禽等疾病的治疗[7]。
尽管喹诺酮药物有诸多优良品质，但仍需重视其毒副作用，如造成肝损害、引发周围神经病变时间加快，甚至可能产生不可逆的转变——导致肌无力症状的患者病情加重等[8]。
喹诺酮是羊肉检测中最为常见的一种兽药残留，其严重影响羊肉制品的安全及羊养殖业的发5 建议本调查仅检测了食品原料中硼的本底值水平，不能反映加工食品中的硼含量。
此外，本次调查的样品多采自市售产品，对生产过程中是否施用硼肥等信息不明，因此未考虑硼肥施用对结果的影响。
在监管过程中，若产品的硼检测值高于该值则可以考虑存在人为添加的可能，但监管应考虑地域差异、加工过程中硼的减损或带入、原料与加工食品间干湿重的转换等因素，制订合理的监管值。
猪肉中氟喹诺酮类药物检测
依据 GB /T 22388-2008
1. 前处理（以猪肉为例）
预处理：
准确称取2g 猪肉样品，加入10mL 磷酸盐提取液（pH=7），水平振荡5min，10000g 离心 5min，吸取上层液，重复提取一次，合并上层液，上层液中加入10mL 正己烷，涡旋1min， 10000g 离心5min，吸取下层液体，待净化。
净化：
固相萃取小柱：
InertSep Pharma 3ml/60mg 货号5010-27101（品牌：岛津技迩）
活化、平衡：3ml 甲醇、3mL 磷酸盐提取液
上样：取预处理的5ml 下层液体过柱
淋洗：3ml 水
抽干
洗脱：2mL 流动相 0.05M 磷酸三乙胺：乙腈=18：82
过滤上机
2. 色谱分析
色谱柱：C18 , 250×4.6mm（i.d.）, 5μm
流动相：A:0.05M 磷酸三乙胺+B:乙腈=18+82，等度洗脱
柱温：35℃
检测波长：Ex:280nm; Em450nm
3. 基质加标回收率结果
三次平行实验结果的回收率（基质加标浓度均为0.05mg/kg）：
4. 结论
在此实验条件下，将固相萃取小柱InertSep Pharma 3ml/60mg 应用于猪肉中氟喹诺酮类残留前处理，基质去除效果好，回收率完全满足要求。
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展张运尚，杜加茹，王伟东，樊剑鸣*（郑州大学公共卫生学院，河南郑州 450001）摘 要：氟喹诺酮类药物（FQS）是第3代喹诺酮类抗生素，具有良好的生物利用度和耐受性，不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用，还具有抗真菌和抗病毒活性，因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染。
但当人类过多食用含有FQS残留的食品后，将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性，因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要。
本文综述了FQS残留的检测标准和常用的检测方法及优缺点，酶联免疫分析法（ELISA）具有灵敏度高、操作简便等优势，预测ELISA法在今后FQS残留检测中发挥重要作用。
关键词：氟喹诺酮类药物；药物残留限量；残留检测技术；酶联免疫分析法中图分类号：S816.7 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200516-05氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQS）是第3代喹诺酮药物，其化学结构是在喹啉环的6位上加入了氟原子，7位上连有哌嗪基的一类衍生物，此特点使得原本亲脂性的吡酮类药物增加了适度的亲水性，同时降低了蛋白结合率，提高生物利用度[1-2]。
该类药物通过抑制细菌的DNA和RNA合成从而达到抑菌作用[3]。
相比第1代及第2代喹诺酮药物，FQS的抗菌活性明显增加，抗菌谱显著扩大，对革兰氏阳性菌（金葡球菌、链球菌、肺炎球菌）和革兰氏阴性菌（肠杆菌科、流感杆菌和奈瑟菌属）[4]以及一些衣原体、支原体和螺旋体均有抗菌作用[5]，因此被广泛应用在临床上治疗细菌感染性疾病。
FQS代表药物主要包括恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）、诺氟沙星（Norfloxacin，NOR）、达氟沙星（Danofloxacin，DAN）、氟罗沙星（Flero xacin，FLE）、沙拉沙星（Saraflaxacin，SFX）、依诺沙星（Enoxacin，EX）等。
猪肉中4种氟喹诺酮类药物含量检测探究
第14卷第02期 南方农业2020年1月Vol.14 No.02 South China Agriculture Jan. 2020氟喹诺酮是一类化学合成抗菌药物，1962年合成第一代喹诺酮类药物，只对大肠杆菌、痢疾杆菌、克雷白杆菌等少数菌有效，吸收效果差，副作用多，仅用于治疗尿路感染。
1974年合成第二代喹诺酮类药物，对革兰氏阴性杆菌致病菌的作用明显，抗菌活性也大大提高，口服少量吸收，不良反应也明显减少，用于治疗尿路和肠道感染等疾病。
1979年合成第三代喹诺酮类药，其母体都含有喹诺酮结构，母核6位C 上被氟取代，氟喹诺酮因此而得名[1]。
第三代药物结构发生了改变，增加了脂溶性，增强了对组织细胞的穿透力，因而吸收好，大大增加了该类药物的抗菌谱和杀菌效果。
随着构效关系的研究进一步展开，新的氟喹诺酮类药物如雨后春笋，成为一个十分活跃的研究领域[2]。
自1979年合成第三代喹诺酮（即诺氟沙星）以来，经过40年的发展，氟喹诺酮已成为在临床上应用广泛的广谱、高效、低毒抗菌药，常用于细菌性感染疾病，如呼吸道感染、消化道感染、泌尿系统感染等疾病的治疗[3]。
喹诺酮类抗生素也广泛用于治疗牲畜疾病。
喹诺酮类药物具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其 他抗菌药物无交叉耐药性以及毒副作用小等特点，被广泛应用于水产、畜牧等养殖业中，包括在牛、鸡、鸭、猪等的养殖中用于疾病防治[4]。
恩诺沙星是喹诺酮类抗生素的一种，对于预防和治疗畜禽的细菌性感染及支原体病有良好的效果，在猪病防治中，对包括大肠杆菌、克雷伯氏菌、肠杆菌属、弯曲杆菌属、绿脓杆菌、沙门氏菌属、气单胞菌属、嗜血杆菌属、耶尔森菌属、沙雷氏菌属、弧菌属、变形杆菌属等在内的革兰氏阴性杆菌和球菌，对布鲁氏菌属、巴斯德氏菌属、丹毒丝菌、博德特氏菌、葡萄球菌、支原体属和衣原体也有效[5-7]。
近年来，氟喹诺酮类药物被养殖户广泛使用，作为饲料添加剂来预防动物疾病的发生，随之新的问题出现了，过度使用该类药物，致使动物体内该药物的残留量积累的越来越多。
百胜猪肉原料药残监控清单
20
日本兽残肯 氟喹诺酮类 定列表
GB/T 20366-2006
高效液相色谱法HPLC （1025号公告-142008）：最低检测限 20ppb 液相色谱质谱法LC-MSMS（1025号公告-122008） 液相色谱质谱法LC-MSMS（1025号公告-122008） 液相色谱质谱法LC-MSMS（1025号公告-122008）
农业部1025号公告-18-2008
GB/T 22286-2008动物 源性食品中多种β-受体 激动剂残留量的测定液 相色谱串联质谱法 GB/T 22286-2008动物 源性食品中多种β-受体 激动剂残留量的测定液 相色谱串联质谱法 GB/T 22286-2008动物 源性食品中多种β-受体 激动剂残留量的测定液 相色谱串联质谱法 GB/T 20752-2006
农业部《2013年动 物及动物产品兽药 残留监控计划》， 猪：肌肉100ppb。 NY235公告无该药 物的标准。
33
甲类
金霉素
Parent Chlortetracy 所有食品动 drug，单个 cline 物：肌肉 或复合物 Parent Oxytetracycl 所有食品动 drug，单个 ine 物：肌肉 或复合物 Parent 所有食品动 Tetracycline drug，单个 物：肌肉 或复合物 Doxycycline Doxycyclin 猪：肌肉 e
NY235公告： 100ppb
31
甲类
沙拉沙星
Sarafloxacin
Sarafloxaci 猪：肌肉 n
100
GB/T 20366-2006
NY235公告，鸡/火 鸡：肌肉，10ppb。 日本兽残肯定列表 对猪肉中该药没有 限量标准
动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测研究进展
２１ ， ． 温元祥报道 几种 Ｆ 类药物 的发生率顺序 Ｑｓ
依次为培氟沙星＞环丙沙星＞诺氟沙星＞依诺沙星
＞氧氟沙星 ， 中以培氟沙星和环丙沙星 口服制剂 其 最常见。Ｆ 类药物导致 的中枢神经系统症状为头 Ｑｓ
痛 、 昏、 头 眩晕 、 眠 、 睡 、 虑 、 郁 及 神 经 过 敏 失 嗜 焦 抑
Ｆ 在动 物 组织 中的浓 度 比相关血 液 中的浓度 Ｑｓ
现 将 国内外有关 Ｆ Ｑｓ的残 留及 研究 方 法做一 综述 。
１ 动物性食品 中 Ｆ 类药物残 留的危害 Ｑｓ
１ １ 过 敏 反 应 ．
Ｆ 类 药物 引起 的过 敏 反 应 以皮 疹 多 见 ， 出 Ｑｓ 可
要高 ， 它适用于人和家畜， 尤其是家禽的一些疾病 。
动 物体 内残 留的 Ｆ 对 消 费 者有 很 大 的潜 在危 害 ， Ｑｓ 滥 用 Ｆ 类 药 物 导 致 细 菌 产 生 了抗 药 性 。 欧盟 规 Ｑｓ
Ｆ 在 肝脏 和 肾脏 中最 大药 物残 留量 现 荨麻疹 、 红斑或 皮 肤发红 、 热 、 痒 、 睑及结 膜 定 ， Ｑｓ 动物肌 肉 、 发 瘙 眼 ０ｔ ｋ （ ｇ ， 充血， 以诺 氟沙 星 和 环 丙 沙 星 引 起 的最 为 常 见 。二 为 ３ ｔ／ ｇ 恩诺 沙 星 和环 丙 沙 星量 之 和） 沙拉 沙
杜 付 彬 谭 建 华 ，
（． １ 吉林大学畜牧兽 医学院 ． 吉林长春 １ ０ ６ ；． ３０ ２ ２ 军事医学科学 院军事兽 医研 究所 ． 吉林长春 １０ ６ ） ３０ ２
中 图 分 类 号 ：８ ９８ ；８ ９ ７ ６ Ｓ ５ ． ４ ￥ ５ ． ９
文 献标 识 码 ： Ａ
文章 编 号 ：０ ７５３ （０ ６ １—０ ９０ １ ０—０ ８ ２０ ） ２０ ３—５
畜禽肉蛋及水产中4种氟喹诺酮类药物残留的快速测定_张鑫
*
药物名称 环丙沙星 恩诺沙星 沙拉沙星 达氟沙星 图1 四种氟喹诺酮类药物混合对照品谱图 收实验
* 冻干鱼粉加 4 倍重量的纯水溶胀 10 min，再进行添加回
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第 28 卷增刊 2009 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
药物名称 环丙沙星
药物名称 环丙沙星 达氟沙星 恩诺沙星 沙拉沙星
鸡蛋中添加四种氟喹诺酮类药物回收率 添加浓度 w / （ ng / g） 平均回收率 / % 10 ， 20 10 ， 20 10 ， 20 2， 4 83. 6 ， 86. 5 92. 7 ， 92. 2 87. 9 ， 90. 2 88. 3 ， 89. 6
表1 四种氟喹诺酮类药物标准曲线方程及相关系数 保留时间 / min 8. 387 10. 023 11. 622 18. 256 线性方程 相关 系数 表3
猪肉兽药残留检测技术防控措施
猪肉兽药残留检测技术防控措施随着我国经济水平的不断提升，人们的生活质量也有了很大的提高，猪肉作为我国居民的主要食用肉类，其安全性受到广大人民群众的重视，尤其是猪肉中兽药残留问题，成为了人们日常注重的重点问题。
为了提高猪肉的安全性，必须要做好猪肉中兽药残留的检测工作，并依据检测结果加强对容易出现问题的环节的防控工作，从而保障市场上猪肉的安全性，让人们吃上安全、放心的猪肉。
一、猪肉中兽药残留检测技术介绍在生猪的养殖过程中，兽药是必不可少的一种物质。
兽药能够有效提髙生猪的存活率，但是因为很多养殖户并没有对兽药的危害性有正确认识，所以在生猪养殖过程中大量使用兽药，最终导致猪肉中兽药残留严重，近年来猪肉中兽药残留严重超标的问题时有发生。
人们若经常食用这种兽药残留超标的肉类，会对身体健康有很大的负面影响，严重时甚至致畸、致癌。
不过，随着我国技术的进步，畜牧养殖行业也在不断朝着集约化、规模化、自动化方向发展，肉制品中药物残留问题也在慢慢减少。
猪肉中最常见的残留兽药有磺胺类、四环素类、佛喳诺酮类以及各种抗生素类药物。
当前，我国已经将兽药残留检测作为猪肉流通前的重要一环，通过专业的检测不但能够及时发现猪肉中存在的问题，还能最大程度保证猪肉的安全性。
下面，作者简单介绍一下猪肉中兽药残留的相关检测技术。
1・免疫分析法。
我国用于检测猪肉中兽药残留的技术有很多，大多都是对猪肉中一些元素成分的含量进行分析，免疫分析法就是我国最常见的猪肉兽药残留检测方法。
免疫分析法主要是利用了抗原和抗体，能够进行特异性结合和可逆性反应的特点而进行兽药残留检测。
这种检测方法的优点在于能够快速筛选，同时还有很高的选择性，且操作简单。
常见的免疫分析法主要包括酶免疫测定法、荧光免疫测定法、胶体金免疫测定法。
其中酶免疫测定法是使用范围相对较广、操作步骤也比较简单的测定方法，这种方法的具体原理是用特定的酶标记猪肉兽药残留中的一些元素以及同位素。
酶联免疫吸附法就是其中被大力推广的检测方法，它能够很好地测定猪肾脏中残留的镇静剂、氯丙嗪、B阻断剂卡拉洛尔等的含量，是我国当前猪肉兽药检测的主要方法。
胶体金法快速检测猪尿中氟喹诺酮类药物的残留
胶体金法快速检测猪尿中氟喹诺酮类药物的残留林少华;罗红霞;许文涛;寥国周;商颖;葛长荣【摘要】本文采用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体构建出一款试纸条,它可以特异性地检测猪尿中氟喹诺酮类药物的残留.通过透射电子显微镜进行表征,确定所制备的胶体金颗粒平均直径为40 nm;通过紫外-分光光度计扫描得到的胶体金氟喹诺酮单克隆抗体最大吸收波长为524 nm.浓度为1 mg/mL的该单克隆抗体最佳加入量为10μL.用该方法制备的试纸条,可以检测猪尿中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星和恶喹酸等9种氟喹诺酮类药物,检出限为20 μg/L,在37℃时可以保存160天左右,在4℃时可以保存24个月.【期刊名称】《中国猪业》【年(卷),期】2018(013)008【总页数】5页(P63-67)【关键词】氟喹诺酮;胶体金;猪尿;残留【作者】林少华;罗红霞;许文涛;寥国周;商颖;葛长荣【作者单位】北京农业职业学院,北京102442;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;北京农业职业学院,北京102442;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;云南农业大学食品科学技术学院,云南昆明650201;昆明理工大学食品安全研究院,云南昆明650093;云南农业大学食品科学技术学院,云南昆明650201【正文语种】中文【中图分类】S859.84为了保证消费者的饮食卫生与食用安全，中国规定了动物源食品中兽药的最大残留限量（Maximum Residue Limits,MRL）[1]，然而随着兽药的广泛使用，引起了人们一系列的不良反应，对人体和动物的机体造成了一定的损伤，因此，兽药在动物源食品中的残留问题越来越受到人们的关注。
氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQs）是一类近年来被广泛应用的对许多细菌具有抑制作用的人工合成兽药[2]，它对金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、衣原体、支原体、螺旋体等致病菌具有极强的抑制作用，适用于临床常见的各种细菌感染性疾病，已成为继青霉素类药物和磺胺类药物之后治疗畜禽疾病的第三代喹诺酮类药物[3]。
氟喹诺酮类药物检测(酶联免疫吸附法).
4．氢氧化钠。
5．十二水合磷酸氢二钠。 6．二水合磷酸二氢钠。
试剂和材料
7．氟喹诺酮类快速检测试剂盒： 2℃-8℃冰箱中保存。 （1）氟喹诺酮类系列标准溶液： 0ug/mL、1ug/mL、3ug/mL、 9ug/mL、27ug/mL、81ug/mL。 （2）包被有氟喹诺酮类药物偶联抗原的96孔板：12条×8孔。 （3）氟喹诺酮类药物抗体工作液。 （4）酶标记物工作液。
下层有机相 6mL 于10mL 离心管中，于50℃下氮气吹干；加 0.02mol/L 磷酸 盐缓冲液0.5mL，涡动2min，加正己烷1mL,涡动30s，4000r/min离心5min； 取下层清液50μ L分析。稀释倍数为0.5倍。
测定
（六）测定 1．使用前将试剂盒在室温（19℃-25℃）下放置1h-2h。
缩洗涤液+19份水），用于酶标板的洗涤。4℃保存，有效期1个月。
10．0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠加水溶解稀释至100mL。 11．乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（84:16，v/v）：取乙腈84ml加到0.1mol/L 氢氧化钠溶液16mL中混合均匀。
试剂和材料
12．乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（50:10，v/v）：取乙腈50ml加到0.1mol/L 氢氧化钠溶液10ml中混合均匀。
7．天平：感量0.01g。
8．微量移液器：单道20uL-200uL、100uL-1000uL；多道250uL。
试料的制备
试料的制备包括。 1. 取制备后的供试样品，作为供试试料。 2. 取制备后的空白样品，作为度的标准溶液作为空白添加试料。
测定
1．鸡肌肉、鸡肝脏、猪肌肉、猪肝脏前处理过程 称取 3g±0.03g 试样于 50mL 离心管中 ， 加乙腈 -0.1mol/L 氢氧化钠溶液
畜禽肉制品中氟喹诺酮类药物残留检验检测方法的研究进展
畜禽肉制品中氟喹诺酮类药物残留检验检测方法的研究进展摘要：氟喹诺酮类药物在畜牧、水产等养殖业应用广泛，但由于其给药过程中仅有一部分药物能被生物体吸收转化，并以代谢产物的形式排除体外，大部分的药物则以原型药物的形式经生物体进入自然环境，因此对各类畜、禽产品氟喹酮类抗生素残留量的检测越来越受到监管部门和检测机构的重视。
本文将综述氟喹诺酮药物残留的重要检测方法,并阐述我院关于肉类食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展。
关键词：氟喹诺酮类药物；联用技术；固相萃取1 氟喹诺酮类药物介绍氟喹诺酮类药物是上个世纪80年代开发出来的第三代喹诺酮类抗菌药物，代表产品有诺氟沙星（Norfloxacin hydrochloride）、氧氟沙星（Ofloxacin）、环丙沙星（Ciprofloxacin）、恩诺沙星（Enrofloxacin）、盐酸沙拉沙星（Sarafloxacin hydrochloride）、加替沙星（Gatifloxacin）、巴洛沙星（Balofloxacin）等。
氟喹诺酮类药物因为其有结构相似、取代位点多、抗菌谱广、药物活性高等特性而受到广泛的应用。
上述常见的氟喹诺酮类药物结构式如图1所示，这类药物的作用机理是可直接作用于细菌的细胞核，通过抑制细菌的DNA旋转酶，使旋转酶不能在DNA的双链上引入切口，进而从分子机制上破坏细菌的代谢和增殖，如此既能杀灭细菌也能抑制细菌繁殖。
图1 几种常见氟喹诺酮药物的分子式欧盟自1999年开始对动物的肌肉、肝和肾中氟喹诺酮类兽药残留量规定限值；在中国加入WTO后，对我国出口的动物源性食品中氟喹诺酮类抗生素的残留量实施监测，将检测残留限量控制在0.05mg/kg以内。
联合国粮农组织FAO规定氟喹诺酮类抗生素在牛、猪、禽等可食用肌肉组织中的允许残留量为0.2mg/kg。
我国虽然对喹诺酮类药物开发应用研究较晚，但目前氟喹诺酮类药物经过药监局批准的已经有十余种，其中主要有诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星等。
屠宰场猪肉中沙星类抗生素的测定
养殖与饲料2018年第1期的血浆淀粉酶活性最高，其次为七彩山鸡，黑凤鸡最低。
张志等[6]认为淀粉酶活性的高低与机体的化学反应速率有关，而杨华等[7]认为淀粉酶的活性具有较高的遗传力，由此表明珍珠鸡属于代谢水平较高的一种禽类，也是其特有的生物学属性。
而碱性磷酸酶是一种底物特异性不高的酶类，广泛存在于血液和细胞中，其含量大小与成骨细胞的活跃度[6，8]和生产性能与蛋品质有关[9]。
黑凤鸡的碱性磷酸酶活性显著高于野鸡和珍珠鸡的活性（＜0.01），表明本次选定的黑凤鸡处于一个生长快、产蛋旺盛的时期，酯酶作为一种水解低级脂肪酸酯的脂肪酶，在3种鸡血浆中的活性差异不显著（＞0.05），说明酯酶活性没有品种间差异。
参考文献[1]李立，朱开明.野生环颈难与美国七彩山鸡杂交繁殖技术研究[J].湖南林业科技，1996，23（4）：39-42.[2]唐继高，吴松成，黄波.七彩山鸡常规营养成分及氨基酸含量测定与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2014（1）：60-62.[3]陈铁桥，欧兰香，谭运华，等.七彩山鸡肌肉及肝脏中12种矿物元素测定分析[J].经济动物学报，2004，8（1）：36-38.[4]陈玉琴，俞诗源.红腹锦鸡、石鸡和雉鸡的部分血液生理生化指标[J].动物学报，2007，53（4）：674-681.[5]崔福生.医学生化检验手册[M].天津：天津科学技术出版社，1982：314-315.[6]张志，谢塔，王润莲，等.隐性白鸡快慢羽系和地方鸡种部分血液酶活力的测定比较[C]//第十一次全国家禽学术讨论会论文集，2003：174-177.[7]杨华，傅衍.猪血液生化指标与生产性能的关系[J].国外畜牧科技，2001，28（1）：34-37.[8]陈彬，陆曼姝，俞渭江.家鸡种内血清同工酶活性的研究[J].山地农业生物学报，1992，11（2）：95-100.[9]王雪燕.蓝孔雀血液生理生化指标及蛋品质特性研究[D].兰州：甘肃农业大学，2009.摘要采集屠宰场65头生猪里脊肉，采用高效液相色谱法进行抗生素检测，测定猪肉中沙星类抗生素残留量。
猪肉中15种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱法研究
猪肉中15种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱法研究张志刚;张洁;刘宗保【摘要】利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱建立了猪肉中15种喹诺酮类药物残留的同时、快速分析方法.猪肉样品中残留药物用1％乙酸-乙腈均质提取,浓缩后用0.1％甲酸-乙腈定容,正己烷脱脂,用Kinetex C18色谱柱(100mm×2.1 mm,2.6 μm)分离,以0.1％甲酸-乙腈作为流动相梯度洗脱,采用基于正离子扫描的MRM监测模式,用保留时间和离子对(母离子和碎片离子)定性,响应值高的碎片离子作为定量离子,基质匹配外标法定量.结果表明,15种喹诺酮类药物在1～500 μg/kg范围内具有良好的线性关系,定量限在1～8 μg/kg之间.在3个添加水平下,加标回收率为60.1％～91.4％,相对标准偏差为0.42％～6.28％.该方法操作简便、灵敏度高、特异性好,可用于猪肉中喹诺酮类药物残留的高通量检测.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2013(040)024【总页数】5页(P91-95)【关键词】猪肉;喹诺酮;液相色谱;质谱;残留【作者】张志刚;张洁;刘宗保【作者单位】肉食品安全生产技术国家重点实验室,食品安全与营养协同创新中心,厦门银祥集团有限公司,福建厦门361100;中国科学院城市环境研究所,福建厦门361100;华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】O657.63喹诺酮类( quinolones，QNs) 又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的广谱性抗菌药物，因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、蛋白结合率低且与其他药物无交叉耐药性等优点，在动物和人类的感染性疾病的预防和治疗方面得到了广泛应用[1]。
但是，由于这类药物的过量或者不当使用，可能造成在动物体内的残留，可通过食物链的传递对人体健康造成潜在危害，比如其本身的毒副作用，而且可能诱导致病菌产生耐药性，影响临床治疗效果[2]。
210966159_酶联免疫吸附法检测猪肉中喹诺酮类药物步骤及注意事项
672023.2酶联免疫吸附法检测猪肉中喹诺酮类药物步骤及注意事项任艳娥（朝阳县畜产品安全监察所，辽宁 朝阳 122000）喹诺酮类药物常见的有洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等4种原料药的各种盐、脂及其各种制剂，是由人工合成的一类广谱抗菌药，对呼吸道疾病具有很好的治疗效果，对厌氧菌、衣原体等也具有一定的作用，此类药在2016年前被广泛应用在畜禽、水产等养殖环节中，后经过相关专家的研究考评发现此类药化学性质稳定，半衰期长，人类在食用了含有喹诺酮类药物的动物相关产品后会在其体内蓄积，可引起耐药性和潜在的致癌性，对人类身体健康产生一定危害，从而引起社会的广泛关注。
因此2016年1月1日国家已经明文规定在所有养殖环节中全面停用喹诺酮类药物（洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等4种原料药的各种盐、脂及其各种制剂）。
2012年以来，酶联免疫吸附法成为辽宁省各县区实验室快速筛查动物产品及组织中喹诺酮类药物残留的主要检验检测技术手段，此方法快速便捷、灵敏度高、易操作、受环境因素影响相对较小、成本相对较低等特点，适合广大基层实验室大批量的筛查检验，因此受到县一级检测机构的青睐。
酶联免疫吸附法操作简单其反应原理浅显易懂，样品中的喹诺酮类药物和试剂盒酶标板上固定的抗原进行特异性竞争抗体，加入酶标记物，再加入底物，底物受到催化显色，然后根据显色的深浅莱判断样品中奎诺酮类药物的含量，显色越深含量越少，反之显色越浅含量则越多。
笔者从事化验室残留检验检测多年，在实际操作中积累了一定的惭怍经验，下面将以检测猪肉中喹诺酮类药物为例简述检验检测相关步骤及其注意事项。
1 样品的前处理及注意事项使用试剂盒前，仔细阅读说明书(本文使用的是北京维德维康生物技术有限公司生产的喹诺酮类酶联免疫试剂盒Ⅳ型96孔）。
不要使用过了有效期的试剂盒，试剂盒应在冰箱冷藏环境中存放，不同批号试剂盒中的试剂不得混用，稀释或掺杂使用会引起灵敏度、OD值变化，最后导致结果的不准确。
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猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测
作者：张漫李娜高木珍张宁刘晓辉王辉
来源：《中国动物保健》2014年第05期
摘要：随机选取本实验室内的8名化验员，分别测定猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留量，通过对结果数据的分析，得出本实验室测定结果的准确程度。
通过磷酸盐缓冲溶液提取猪肉组织中的氟喹诺酮类药物残留，经C18柱净化后，用高效液相色谱法测定含量。
环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，批内变异
系数均≤14%，批间变异系数均≤6%。
结果数据满足标准要求，证明本实验室能准确开展此项
检测活动。
关键词：氟喹诺酮类药物；达氟沙星；恩诺沙星；环丙沙星；沙拉沙星；残留检测
Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork Tissue
Abstract: We selecting 8 technicians in our laboratory randomly, letting they determine fluoroquinolones residues in pork tissues separately. Based on the analysis of the experimental data, we concluded the accuracy of my determination results. The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution, cleaned by C18 SPE cartridge, then content was determined by HPLC. The average recoveries of four components were 95.6%, 86.9%, 89.3%, 95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below 14%, intra-assay were below 6%. The results meet requirements , so we can carry out the test.
Key word: fluoroquinolones;danofloxacin; enrofloxacin; ciprofloxacin; sarafloxacin; residues determination
氟喹诺酮类药物属第3代喹诺酮类抗菌药，适应于敏感病原菌所致的呼吸道、胃肠道等感染，具有吸收好、组织浓度高、半衰期长、抗菌谱广等优点，已成为兽医临床的常用药。
但随着临床用量的不断增长，因不合理用药或滥用药而导致的畜产品质量安全问题时有发生，并越来越引起社会的广泛关注。
本文在运用“农业部1025号公告-14-2008”标准[1]的基础上，结合
本实验室的工作实际，随机选取8名本实验室的化验员，同时并独立完成猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测工作，得出检测回收率，分析和判断测定结果的准确性。
1 仪器与试药
1.1 仪器
天平，感应0.01 g；分析天平，感应0.000 01 g；Aglient 1 200高效液相色谱仪-配荧光检
测器；振荡器；组织匀浆机；离心机；Varian BondElut?誖C18柱（100 mg/mL）固相萃取柱；
0.45 μm微孔滤膜。
1.2 药品与试剂
达氟沙星，批号10301，含量93.5%, Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司；恩诺沙星，批号
H0081206，含量99.9%,中国兽医药品监察所；环丙沙星，批号130451-201203，含量84.2%,中国食品药品检定研究所；沙拉沙星，批号20629，含量95.0%,Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司。
磷酸、氢氧化钠、甲醇、三乙胺、磷酸二氢钾均为分析纯；乙腈为色谱纯；超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18Analytical，5 μm， 4.6×250 mm；流动相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）V/V，使用前经0.45 μm微孔滤膜过滤；柱温：25℃；流速：0.8 mL/min；进样量：20μL；检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm。
2.2 样品制备
2.2.1 空白样品的制备取猪肌肉组织200 g绞碎，作为空白样品。
2.2.2 标准储备液的制备精密称取达氟沙星对照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2 mg/mL的标准储备液；分别精密称取恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星对照品各50 mg，依次置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为1 mg/mL的标准储备液，置于4℃冰箱中保存[2]。
2.2.3 标准工作液的制备分别精密量取1 mL达氟沙星标准贮备液、0.2 mL恩诺沙星标准贮备液、环丙沙标准贮备液星和沙拉沙星标准贮备液于同一100 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容，制成浓度依次为2 μg/mL的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准工作液，备用。
2.2.4 阳性添加样品的制备8批（人）分别各自称取空白样品4个，每个样品称取2
（±0.05）g，其中一个作为空白样品，其余三个样品分别依次添加浓度为2 μg/mL的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星混合标准工作液0.2 mL，制成200μg/kg的阳性样品，用于测定回收率[3]。
2.3 提取净化方法
将称取的2（±0.05）g猪肌肉组织样品置于30 mL匀浆杯中，加磷酸盐冲溶液10.0 mL，10 000 r/min匀浆1 min。
匀浆液转入离心管中，中速振荡5 min，以10 000r/min离心5 min，取上清液待用。
用磷酸盐缓冲溶液10.0 mL清洗刀头及匀浆杯，转入离心管中，洗残渣，混匀，中速振荡5 min，以10 000r/min离心5 min。
合并两次上清液，混匀，备用。
固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2 mL预洗。
取上清液5.0mL过柱，用水1 mL淋洗，挤
干。
用流动相1.0 mL洗脱，挤干，收集洗脱液。
经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱测定[4]。
2.4 试验结果
2.4.1 标准曲线在选定的色谱条件下，0.005～0.5 μg/mL的范围内标准曲线及相关系数如下，线性良好。
配制浓度见表1。
环丙沙星：y=603.580 19x-0.229 998, r=0.999 39
达氟沙星：y=5 406.704 01x+0.941 808, r=0.999 75
恩诺沙星：y=1 303.249 25x+2.133 35, r=0.999 78
沙拉沙星：y=484.622 58x+0.153 636, r=0.999 93
2.4.2 测定结果环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星分离良好，无干扰，定量限为20μg/kg，添加浓度为200 μg/kg，批内变异系数均小于14%，批间变异系数均小于6%。
环丙
沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，
总体回收率（%）范围为77～113。
达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星回收率见表2，色谱图见图1～3。
3讨论
环丙沙星和沙拉沙星平均回收率为95%以上；达氟沙星和恩诺沙星平均回收率在85%～90%区间，总体回收率较好。
批内变异系数的大小和化验员工作熟练程度及工作经验有直接关系，熟练的化验员所测得的回收率批内变异系数较低，工作时间较短的化验员所测得的回收率批内变异系数较高。
环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星检测残留量的批间变异系数（%）均小于6%，误差较低。
以上为本实验室的检测数据，为其它实验室开展同类检测提供数据支持。
■（编辑：狄慧)
参考文献：
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