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病毒灭活苗制作过程

随着生物工程技术和生物化学、分子生物学的发展，兽用生物制品的动物疫苗种类，类型上均有重要的进展，各种新疫苗不断研制成功。大体分为：灭活疫苗、弱毒疫苗、单价疫苗、多价疫苗、混合疫苗、同源疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗。

灭活疫苗：又称死疫苗。将细菌或病毒利用物理的或化学的方法处理，使其丧失感染性或毒性，而保持免疫原性，接种动物后能产生主动免疫的一类生物制品。灭活疫苗分为组织灭活疫苗、培养物灭活疫苗。其特点是：易于保存运输，疫苗稳定，便于制备多价或多联苗。其缺点是：注射剂量大，多次注射，不产生局部免疫力。

弱毒疫苗：又称活疫苗。微生物的自然强毒株通过物理的、化学的和生物的方法，使其对原宿主动物丧失致病力，或引起亚临床感染，但以保持良好的免疫原性、遗传特性的毒株用以制备的疫苗，此外，也有从自然界筛选的自然毒株，同样有人工育成弱毒株的遗传特性，同样可以制备弱毒疫苗，如：鸡新城疫LaSota疫苗。

灭活疫苗和弱毒疫苗的利和害，发展重与轻，学者历来都有争论，现将两者的优缺点简介见灭活疫苗与弱毒活疫苗比较

灭活疫苗

优点:比较安全，不发生全身性副作用，不出现返祖现象，有利于制备多价多联的混合疫苗；制品稳定，受外界条件影响小，有利于运输保存。

缺点接种次数多，剂量多而大，免疫途径必须注射，不产生局部免疫，需要高浓度抗原物质，生产成本高。

弱毒活疫苗

优点:一次免疫接种即可成功，可采取自然感染途径接种（如注射、滴鼻、饮水、喷雾、划痕等），可引起整个免疫应答，产生广普性免疫及局部和全身性抗体，免疫持久，有利于消除局部野毒，产量高，生产成本低。

缺点: 残毒在自然界动物群体中持续传递后毒力有增强返祖危险，疫苗中存在的污染毒有可能扩散；存在不同抗原的干扰现象，从而影响免疫效果；要求在低温条件下运输储存。

单（价）疫苗：利用同一种微生物菌（毒）株或同一种微生物中的单一血清型的菌（毒）株增殖培养物制备的疫苗称为单（价）疫苗。单苗对单一血清型微生物所致的病有免疫保护效能，但单价苗仅能对多血清型微生物所致病中的对应型有保护作用，而不能使免疫动物获得完全的免疫保护。

多价疫苗：指同一种微生物中若干血清型菌（毒）株的增殖培养物制备的疫苗。多价疫苗能使免疫动物获得完全的保护力，且可适于不同地区使用。

混合疫苗：又称多联疫苗。指利用不同种类的微生物的增殖培养物按免疫学原理、方法组合而成。接种动物后能产生相应疾病的免疫保护，具有减少接种次数，使用方便等优点，是一针防多病的生物制剂。

制作过程

1.匀浆

取患病个体的肝、脾、肾（有时取症状明显部位）在研钵中研磨成匀浆，研磨需灭菌，尽量保证无菌操作。研磨中添加适量的已灭菌的生理盐水。

2.反复冻融

将匀浆放入-40℃冷冻，待冷冻完全后拿到室温融化，如此反复冻融3次以上。

3.离心

冻融后的匀浆在50ml离心管，8000r离心机中离心15min。取上清放于已灭菌的空瓶中并稀释后添加抗生素。

4.灭活

根据稀释后的体积添加4‰～7‰福尔马林灭活。37℃放置36h-48h。

5.离心

50ml离心管，8000r离心机中离心15min将加入福尔马林产生的沉淀去除，收集上清。再次将上清静置过夜，离心收集上清。如此反复2～3次。

6.抽滤

将上清液经0.22um滤膜过滤除菌。收集滤液。

7.检测活性

将疫苗接BHI平板过夜，看是否有菌长出，若有菌生长则添加抗生素或重新抽滤。将无菌的疫苗注射实验动物观察死亡情况。