肿瘤细胞凋亡的关系

第10卷　第1期中　华　男　科　学

Vol.10　No.1

2004年1月

National Journal of Andrology

Jan.2004

・论著・

survivin 蛋白在前列腺癌中的表达及其与

肿瘤细胞凋亡的关系

高吴阳1,胡传义1,易慕华2

(三峡大学仁和医院,1.泌尿外科,2.病理科,湖北宜昌443001)

摘要:　目的:探讨新的凋亡基因survivin 蛋白在前列腺癌(PCa )的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。　方法:采用免疫组化SP 法和DNA 原位未端标记T UNE L 法分别测定42例PCa 组织及10正常前列腺(NP )组织中survivin 蛋白的表达和细胞凋亡。　结果:survivin 蛋白在PCa 中的阳性表达为80.59%,与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P <0.05),而NP 中无阳性表达;PCa 组织及NP 组织中细胞凋亡指数(AI )分别为3.03±1.33、1.07±0.77,其差异有显著意义(P <0.05);survivin 蛋白的表达与细胞AI 呈负相关(r =-0.679,P <0.001)。　结论:survivin 蛋白的异常表达而引起的细胞凋亡抑制,在PCa 的发生、发展中起一定的作用;联合检测survivin 蛋白和AI ,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价,以指导临床治疗及估计预后。关键词:survivin 蛋白;凋亡;前列腺癌;免疫组化

中图分类号:Q255;R737.25 文献标识码:A 文章编号:100923591(2004)0120012203

Expression of survivin Protein in Prostatic Carcinoma Tissues and Its Correlation

with Apoptosis of Cancer Cells

G ao Wuyang ,Hu Chuanyi ,Y i Muhua

Department o f Urology (Gao WY ,Hu CY ),Department o f Pathology (Yi MH ),Rehe Hospital ,Three Gorges Univer sity ,Yichang ,Hubei 430031,China Correspondence to :Gao Wuyang

Abstract :　Objective :T o investigate the expression of survivin protein in the tissues of prostatic carcinoma and its correlation with apoptosis of cancer cells.　Methods :Expression of survivin protein and apoptosis index (AI )were detected by immunohistochemical and terminal de 2oxynucleotidyl transterase 2mediated dUTP biotin nich end labeling (T UNE L )technique in the tissues of 42cases of prostatic carcinima (PCa )and 10cases of normal prostate (NP ).　Results :Survivin prosteins were expressed in 34of the 42(80.59%)cases of PCa.The positive rate of survivin was strongly ass ociated with pathological grades ,clinical stages and lymphmetastasis in PCa (P <0.05).In contrast ,NP did not express survivin.Survivin protein expressioin was negatively correlated with AI in PCa (r =-0.679,P <0.001).　Conclusions :Apop 2tosis inhibition by survivin may participate in the onset and progression of PCa ,and the detection of survivin protein and AI in PCa may help to evaluate the degree of cell diferentiation ,decide therapeutic strategies and estimate prognosis.　Natl J Androl ,2004,10(1):12214K ey w ords :survivin protein ;apoptosis ;prostatic carcinoma ;immunohistochemistry

前列腺癌(prostatic carcinoma ,PCa )是男性泌尿生殖系肿瘤中最重要的一种,其病因和发病机制尚

・21・收稿日期:2003207215;修回日期:2003210208

作者简介:高吴阳(19622),男,湖北宜昌市人,副主任医师,本科,从事泌尿男科学专业。通讯作者:高吴阳

未完全阐明。survivin是近年来分离出来的凋亡抑制基因家族中的新成员1,与其家族其他成员不同, survivin具有明显的细胞选择性,大多数肿瘤有不同程度的表达,这一点为肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点。国外研究表明,survivin蛋白的表达与PCa 的发生发展密切相关2,国内尚未见相关文献报道。本研究检测PCa组织中survivin蛋白的表达及肿瘤细胞的凋亡情况,以探讨其临床意义。

1　材料与方法

1.1　材料来源　收集我院1990～2002年42例(年龄49～73岁,平均61岁)前列腺切除术的PCa组织石蜡包埋标本(PCa组)和10例正常前列腺周围带标本(NP组,为尸体解剖标本,年龄23～48岁,平均32岁),均为10%中性甲醛固定。所有患者术前均未接受任何治疗,以上标本均经苏木精2伊红染色,病理诊断明确。PCa参照G leas on3的分级标准,按腺体分化程度将PCa分为高分化腺癌组12例、中分化腺癌组17例、低分化腺癌组13例;按文献4临床分期标准分为A～B期23例、C～D期19例;有淋巴结转移组16例。石蜡标本4μm厚连续切片,分别行复查诊断、survivin蛋白免疫组化检测和细胞凋亡检测。

1.2　检测方法　免疫组化采用超高敏SP法。一抗为鼠抗人survivin单克隆抗体(1∶

100),二抗为羊抗鼠IgG(1∶

120),以上抗体及SP试剂盒均购自福州迈新公司。具体按操作说明书进行,以0.01m ol/L、pH7.4 P BS液代替一抗作为阴性对照。检测细胞凋亡采用DNA原位末端标记(T UNE L法),试剂盒为德国宝灵公司产品,检测程序参照试剂盒说明书。以乳腺癌标本作为阳性对照,P BS液代替TdT反应液作为阴性对照。

1.3　结果判断

1.3.1　survivin染色程度判断　组织切片中胞质染为黄色至棕黄色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按其数量及显色程度分为3级:表达弱阳性(+),即阳性细胞数<10%、显色强度为淡黄色或个别细胞黄至棕黄色;表达强阳性(+++),即阳性细胞数>60%,多数细胞呈黄至棕黄色;表达中度阳性(++),即阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间。凡显色强度与背景无明显差异者为阴性。

1.3.2　凋亡细胞计数　细胞核上有黄至棕色颗粒着色为阳性标志,光镜下随机观察5～10个视野,计数每高倍镜视野(×400)中平均阳性凋亡细胞数,其阳性细胞数百分比为凋亡指数(apoptosis index,AI)。

1.4　统计学分析　计量资料结果以x±s表示,采用t检验;计数资料采用χ2检验和S pearman等级相关分析检验。

2　结果

2.1　PCa中survivin蛋白的表达　survivin蛋白在前列腺组织中的表达见表1,NP组织中未见表达。PCa 组织中胞质着色弥漫分布,呈黄至棕黄色(图1);阳性率为80.59%,其中强阳性9例、中度阳性18例、弱阳性7例。低分化和中分化组survivin蛋白阳性表达率明显高于高分化组,其差异有显著意义(P< 0.05)。低、中分化组间survivin蛋白阳性表达率差异亦有显著意义(P<0.05)。有淋巴结转移组阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。

表1　survivin蛋白在前列腺组织中的表达与细胞凋亡情况

T able1.Expression of survivin protein and the cell apoptosis

G roup n

survivin positive

n(%)　AI

NP100(0) 1.07±0.77

PCa4234(80.95) 3.01±1.33 Pathological grade

　Low differentiation1212(100) 2.01±0.77

　M iddle differentiation1715(88.24) 3.11±1.19

　H igh differentiation137(53.85) 3.86±1.36 Clinical stage

　A～B2315(65.22) 3.54±1.38

　C～D1919(100) 2.41±0.99

Lym phmetastasis

　P ositive1616(100) 2.27±0.94

　Negative2618(69.23) 3.50±1.34 2.2　PCa细胞凋亡情况　凋亡细胞阳性定位于细胞核,在PCa组织中散在分布(图2),细胞凋亡情况见表1。PCa组AI明显高于NP组,两者之间差异有显著性意义(P<0.05);低分化组AI显著低于中分化组及高分化组(P<0.05);而中、高分化组间差异无显著意义(P>0.05);有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P<0.001)。

2.3　survivin蛋白的表达与AI的相关性　统计分析表明,PCa组织中survivin蛋白的表达与AI呈极显著性负相关(r=-0.679,P<0.001)。

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第1期 高吴阳等　survivin蛋白在前列腺癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系