骨性关节炎患者疼痛抑制中TRPM8表达的临床意义研究

组别
NS-NS 组 CFA-NS 组 CFA-Menthol 组 NS-Menthol 组
表 1 不同组别大鼠行为学指标比较（x±s,n=8）
抬爪次数
热痛敏分数
给药前 4.62±0.91 11.01±0.75 10.76±0.70 4.51±0.92
给药后 5.02±0.92 11.26±1.05 （14.76±0.70）* 4.64±1.05
正 确 ；②骨 性 关 节 炎 大 鼠 建 模 。 水 合 氯 醛 （10%）麻 醉 后 帮 助 大 鼠选择俯卧位，先用乙醇消毒其右侧外踝附近皮肤，随后从外 踝外侧凹陷部位用胰岛素注射器皮下穿刺， 随后转向足尖，刺 进腓骨 、距骨间踝关节腔 ，进针深 5 mm 左右 ，加压后 注 入 50 μL 弗氏佐剂，退针后用棉球按压一会；③给药。 把大鼠放置到固 定器中，从固定器颈部口引出导管，并与胰岛素注射器连接，先 向 导 管 内 注 入 5 μL 生 理 盐 水 ， 确 定 导 管 通 常 后 再 注 入 20 μL 试验用药，随后再注射一定量的生理盐水，让导管内药物完全 进 到 鞘 内 。 将 所 有 大 鼠 分 为 NS-NS 组 、CFA-NS 组 、CFA-Menthol 组 和 NS-Menthol 组 ，各 8 只 。 模 型 制 备 后 第 2 个 星 期 分 别 注 射 薄 荷 醇 或 生 理 盐 水 20 μL。 薄 荷 醇 剂 量 为 100 ug/kg。 用 药 前后测定和记录各组大鼠抬爪次数、热痛敏分数及机械痛敏阙 值等行为学指标。 另外用药后 1 个星期将大鼠处死，将右侧 L5DRG 保 存 在 灌 注 液 中 ，24~48 h 行 石 蜡 包 埋 处 理 ，制 成 4 um 切 片 ，同 时 行 免 疫 组 化 染 色 ，通 过 显 微 镜 观 察 TRPM8 表 达 。 1.3 统计方法
应用 SPSS16.0 统计学软 件 对 上述 相 关 Βιβλιοθήκη Baidu据 进 行 分析 ， 计 量 资料均数±标准差（x±s）表示，t 检验。 2 结果 2.1 不同组别大鼠行为学指标比较
与用 药 前比 较 ，CFA-Menthol 组 大 鼠 给 药 后 大 鼠 抬 爪 次 数 、 热痛敏分数及机械痛敏阙值有明显差异 ，差异有统计学意义 （P＜ 0.05）。 其 他 组用 药 前 后指 标 比 较，差 异 无 统 计 学 意 义 （P＞0.05）。 见表 1。
78.07±2.88
注：与 NS-NS 组比较，*P＜0.05。
3 讨论 3.1 TRPM8 在冷觉传导中的作用
相关 离 体 实验 表 明 ，在 DRG（背 根 神 经 节 ）细 胞 上 可 以 观 察 到 冷 觉 感 受 器 受 体 M8 与 冷 觉 感 受 器 受 体 V1 共 存 现 象 ， 提 示 TRPM8 可能参与伤害性冷刺激传导[3]。 相 关研 究 表 明缓 激 肽 、磷 脂等炎症因子都可能激活 TRPM8[4]。
[中图分类号] R684.3
[文献标识码] A
[文章编号] 1674-0742（2014）11（a）－0062-02
骨性关节炎（OA）是多发生于中老年人群的一种 退 行 性关 节 病，主要与软骨退变、滑膜炎症等有关，表现为关节疼痛、肿胀 等，严重影响患者生活质量。 目前临床上治疗 OA 常 见 药 物为 透 明质酸、非甾体抗炎药等，虽然能有效缓解疼痛及炎症，但副作 用大。 众所周知冰敷等适当冷刺激能缓解疼痛（如关节痛、偏头 痛 等 ），但 过 低 则 会 加 重 疼 痛 或 冷 觉 过 敏 ，表 明 冷 觉 和 疼 痛 间 存 在某种关联，但其作用机制还不是很了解[1]。 随着分子学、生物学 的不断进步，部 分 研 究证 明 TRPs（瞬 时受 体 电 位离 子 通 道 ）参 与 机 体温 度 感 知 ，而 TRPM8（冷 觉 感受 器 受 体 M8）是 TRPs 家 族 的 重要一员，在冷刺激感知上起重要作用[2]。 该研究就此于 2013 年 1 月—2014 年 1 月 通 过 骨 性 关 节 炎 小 鼠 建 模 试 验 分 析 TRPM8 表达在疼痛抑制中的作用。 现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料
中外医疗 ２０１４ ＮＯ．３１ China &Foreign Medical Treatment
基础医学
骨性关节炎患者疼痛抑制中 ＴＲＰＭ８ 表达的 临床意义研究
潘永春 杨朝晖 山西医科大学第二医院骨创科，山西太原 030001
[摘要] 目的 研究骨性关节炎患者疼痛抑制中 TRPM8 表达的临床意义。 方法 选择 32 只成年健康 SD 大鼠为研究对象，对其
NS-NS 组、NS-Menthol 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 2。
表 2 各组大鼠 TRPM8 表达比较（x±s,n=8）
组别
TRPM8 表达
NS-NS 组 CFA-NS 组
78.07±3.30 155.85±1.91*
CFA-Menthol 组
157.35±1.47*
NS-Menthol 组
机械痛敏阙值
给药前
给药后
22.24±0.80
22.10±1.04
6.71±0.56
6.65±0.65
6.52±0.44
（17.36±0.64）*
22.01±0.93
22.14±1.11
基础医学
中外医疗 ２０１４ ＮＯ．３１
China &Foreign Medical Treatment
2.2 各组大鼠 TRPM8 表达比较 CFA -NS 组 、CFA -Menthol 组 大 鼠 TRPM8 表 达 明 显 高 于
选择 32 只 成 年健 康 SD 大 鼠为 研 究 对象 ，鼠 龄 基本 相 近 ，平 均 体 重 （300.5±18.5）g，饲 养 在 安 静 环 境 ，不 限 制 其 自 由 活 动 。 材 料 ：本 研 究 包 括 弗 氏 佐 剂 、微 量 注 射 器 针 头 、 显 微 镜 、TRPM8 抗 体、薄荷醇等。 1.2 方法
① 鞘 内 置 管 。 大 鼠 腹 腔 中 注 射 300~350 mg/kg 水 合 氯 醛 ， 将其麻醉后于大鼠枕骨大孔处行纵切口，依次切开皮肤、皮下 组织后把硬脊膜暴露出来，将其剪开待脑脊液流出后于蛛网膜 下 置 入 导 管 （PE-10 聚 乙 烯 ），长 度 为 7 cm 左 右 ，随 后 依 次 缝 合 且固定导管，同时通过向导管中注射利多卡因检查其置入是否
痛作用机制为：TRPM8 阳性表达传导到神经纤维中 ，释放出一定 量 的葡 萄 糖 （Glu），介 导 ivilin 后 达 到 镇 痛 的 目 的 ，其 机 制 为 激 活 伤害性传入纤维突触前或突触后 II/III mGluRs，进而使疼痛相关 神经损伤缓解引起。
薄荷醇具有清凉作用，可用于医用刺激药，外用有清凉止痒 功效，内服可止痛，适用于头痛、咽喉痛等疾病。 从表 1 可知， CFA-Menthol 组大鼠给药前后大鼠抬爪次数、热 痛敏 分 数 及机 械 痛敏阙值比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 表明薄荷醇的止痛作 用。 且 表 2 中 ，CFA-NS 组、CFA-Menthol 组 大 鼠 TRPM8 表达 明 明显比 NS-NS 组、NS-Menthol 组高，差异有统计学意义（P＜0.05）， 从侧面表明 TRPM8 可以有效被薄荷醇激活 ，发挥 其 疼 痛抑 制 作 用。
行鞘内置管， 且经由弗氏佐剂构建骨性关节炎大鼠模型 ， 将其分为 NS-NS 组、CFA-NS 组、CFA-Menthol 组和 NS-Menthol
组，各 8 组，比较 4 组用药前后大鼠行为学指标及 TRPM8 表 达。 结 果 CFA-Menthol 组 大鼠 给 药 前后 大 鼠 抬爪 次 数 、热痛 敏
分数及机械痛敏阙值比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 另外 CFA-NS 组、CFA-Menthol 组大鼠 TRPM8 表达明显高于 NS-NS
组、NS-Menthol 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 薄荷醇可以激活 TRPM8 受体以加强冷觉过敏，发挥冷镇痛效果。
[关键词] 骨性关节炎；疼痛抑制；TRPM8 表达；意义
给药前 0.87±0.38 7.35±0.27 7.34±0.30 0.85±0.30
给药后 1.06±0.31 7.30±0.26 （2.65±0.26）* 0.98±0.43
注 ：与 给 药 前 比 较 ，*P＜0.05。
62 中外医疗 Ｃｈｉｎａ ＆Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
神经 元 亚 群中 若 含 有 C 类 神 经 纤维 及 类 Aδ，则 可 能 对 15~ 30℃、15℃以下的温度产生行为反应 。 相关研究表明慢性疼痛大 鼠机体 TRPM8（阳性 C 纤维、阳性 Aδ 纤维）上调，则表明 TRPM8 表达可能通过参与薄荷醇起镇痛效果[8]。 Produfoot等[9]人 研 究 发现 皮肤温度下降到 16℃、 薄荷醇或 icilin 等对 TRPM8 受体产 生 刺 激作 用 ，导 致其 参 与 到神 经 病 理性 疼 痛 大鼠 镇 痛 过 程 ，且 该 镇 痛 效果无法被纳洛酮拮抗 ，表明 TRPM8 抑 制 疼痛 的 作 用原 理 和 传 统 阿 片 镇 痛 没 有 关 联 。 但 研 究 发 现 该 镇 痛 效 果 却 可 以 被 II/III mGluRs 拮抗 剂 选 择性 的 逆 转 ， 表 明 TRPM8 激 活后 镇 痛 作用 主 要由中枢介导，且依赖于 II/III mGluRs。 这是因为 II mGluRs 在初 级 传 入 感 觉 神 经 通 路 突 触 前 、突 触 后 中 比 较 常 见 ，而 III mGluRs 绝 大 部 分分 布 在 突触 前 ， 将 II/III mGluRs 激活 后 便 可对 脊 髓 背 角传入神经引发的电位变化起抑制作用。 相关文献表明培养基 与切片脊髓背角、DRG 的某些突触 ，给予薄荷醇补充后能提高突 触 后 电 位 （兴 奋 性 ）频 率 ，这 和 TRPM8 表 达 阳 性 传 入 神 经 激 活 ， 释放出大量的谷氨酸一致[10]。 骨 性关 节 炎 病发 后 TRPM8 介 导镇
TRPM8 在不同神经细胞亚群中 均 有 表达 ， 且 不 同亚 群 感 觉 能力也不一样 ，当 TRPM8 被激活后产生的 冷 知觉 则 由 其他 机 制 影响。 Bautista[7]等人研究发现对于缺陷 TRPM8 的小鼠模型来说， 它们对 15~25℃的感知能力丧失，但却对 15℃以下的冷温度有一 定的逃避能力 ，这提示 TRPM8 的主要作用 是 参与 非 伤 害性 冷 刺 激及部分伤害性冷刺激 ，这从侧面 反 映 除了 TRPM8 传 导 冷刺 激 外，还有其他作用机制，特别是对伤害性冷刺激起传导作用。 3.2 TRPM8 在疼痛抑制中的可能机制
另外， TRPM8 不仅可以被薄荷醇 、icilin 激活 ， 而且还受 pH 值影响 ， 当 pH 值 在 6 以 下 时 ，TRPM8 对 冷 刺 激反 应 完 成消 失 ； 当 pH 值在 6.5~8.1 之间时，TRPM8 激活温度在 15~27℃之间。 同 时细 胞 内 pH 值变 化 对 TRPM8 激活 能 力 影响 比 较 大 ， 当 pH 值 增加到 7.4 时，icilin 激活 TRPM8 能力较之前提高 4 倍；当 pH 值 下降到 6.5 时，icilin 激活 TRPM8 能力则明显下降。 但 pH 值变化 对 薄 荷 醇 激 活 TRPM8 的 能 力 基 本 没 有 影 响 ， 当 icilin 失 去 TRPM8 激 活 能 力 后 ，薄 荷 醇 还 是 可 以 激 活 TRPM8，提 示 TRPM8 激活机制在两种及以上，但具体机制有待进一步研究。
冷反应的介导主要由 C 类神经纤维及类 Aδ 负责，而这些物 质能产生一种或多种冷感觉。 动物实验表明大鼠大部分冷反应 主要与 TRPM8 受体有关，TRPM8 通过电流能被 26℃以下的温度 激活，包括伤害性冷刺激[5]。 但实验也发现 TRPM8 缺陷小鼠对非 伤害性冷刺激感知能力下降， 且同时失去对伤害性冷刺激的自 我保护行为，另外对这些小鼠 C 类神经纤维及类 Aδ 研究发现冷 刺激引发的行为反应明显减少或者缺失。 可见 TRPM8 在冷觉传 导中 起 重 要作 用[6]。