鸡新城疫血凝(HA)及血凝抑制(H1)试验

鸡新城疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验（一）目的意义：

1.掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法；

2.了解HA与HI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。

(二)基本原理：

许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。

血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。

（三）器材及试剂:

待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；

待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；

生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。（四）实验步骤：

一、血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作：

1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul 为红细胞对照；

2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为

2-1~2-12 。

3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震

荡器震荡2min混匀。

4、室温静置10-30分，观察结果（见下表）。

5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI 效价，用2n表示。

二、血凝抑制试验（HI）

取一96孔板，按以下步骤操作：

1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释

度。

2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入

50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔，依次

稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。

3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀；

4、室温静置20min；

5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。

6、室温静置10-30分，观察结果（见下表）；