实验7 动物染色体标本的制备
染色体标本的制备及组型观察 实验报告
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
实验动物染色体标本的制备
5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将
固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片 的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直 立载玻片空气干燥。
Giemsa染色
改良苯酚品红染色
2020体标本的制备成败决定于取材， 若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少， 不易获得较多的中期分裂相。
2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染 色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。
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五、实验结果
取前肢1：找到关节所在。
四、实验步骤
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取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。
四、实验步骤
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四、实验步骤
注意，每组做2片 蒸汽固定法
3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻 轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置， 低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。
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人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）
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三、实验用品
• 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固 定液, 蒸馏水，Giemsa染液。
• 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪， 离心管，注射器，染色缸。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
[计划]实验七小鼠染色体制备与观察
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[计划]实验七小鼠染色体制备与观察小鼠染色体制备与观察【实验目的】1. 了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。
2. 初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。
3. 观察动物细胞染色体的数目和形态。
【实验原理】染色体是遗传物质的载体，它具有种属特异性，通常不同物种以不同亚种的核型是不同的。
通过对各种动物染色体核型的研究可以丰富物种的信息系统，对了解物种的遗传变异进化以及物种的分类均有一定的意义。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。
骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或、其它组织那样要经过体外培养;对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点:1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处;2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上;3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
制作染色体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能力选择活跃的组织:胸腺，骨髓，睾丸，小肠施加药物使细胞分裂:PHA2. 设法得到大量的中期细胞:秋水仙素A( PHA:粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞B( 秋水仙素:破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。
C( 低渗作用:水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开D( 空气干燥:使细胞和染色体展开E(固定:用甲醇:冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告实验目的：本次实验的目的是通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握常规细胞检测技术。
实验原理：细胞核持有着生物体的遗传信息，而染色质可以分为染色体和非染色体两种，其中染色体是由DNA及其辅助蛋白组成的。
通过细胞分裂过程中，染色体会缩短、厚度增加、染色带可清晰分辨等特点来进行分类和编号。
利用这些特点可以制备出动物骨髓细胞染色体标本。
实验步骤：1. 首先准备动物骨髓细胞样品，可通过小鼠骨髓涂片或静脉血（受试者需要同意），将样品转移到已经预处理好的无菌平板上。
2. 在离心管中加入10ug/ml的柱前荧光素-ethidium bromide(PI)，再将细胞样品加入离心管中，轻轻摇晃片刻，稍微放置几分钟。
3. 用宽口的滴管取少许制片液，滴在已经处理好的载玻片上，尽量保证滴管斜着滴落制片液，避免气泡出现，将载玻片浸泡于制片液中。
4. 轻轻捞取离心管中的细胞样品，均匀地滴在制片液的中心处，然后放置在湿度大于80%，温度为37°C的恒温箱内1-2h。
5. 制片完成后，对载玻片进行显微镜检查，选择细胞密度适当、染色较清晰的染色体标本进行下一步操作。
6. 将载玻片放置在冷却的媒体溶液（0.075mol/L KCl及0.9%NaCl）中，冷冻10-20min。
7. 取出载玻片，使用正差相干显微镜观察着染色体的分布和形态，并进行拍照记录。
8. 得到的染色体标本可用于常规染色体学诊断。
实验结果：通过本次实验制备得到的动物骨髓细胞染色体标本，可以进行常规染色体学分析，观察细胞核中的染色体数目、形态和结构等特征，并可以用于细胞遗传学研究和临床诊断。
实验结论：本次实验通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深了对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握了常规细胞检测技术。
通过观察和分析染色体标本的形态和结构，可以进行细胞遗传学的研究与临床诊断。
蛙骨髓染色体标本的制备与观察 PDF PDF
蛙骨髓染色体标本的制备与观察 PDF PDF 实验描述：
本实验旨在通过制备蛙骨髓染色体标本，观察染色体在不同表观状态下的形态和结构。
实验步骤：
1.实验器材准备：离心机、组织培养纸、组织培养液、注射器、移液管、生理盐水、荧光素铵、显微镜、蛙卵、0.075mol/L KCl和醋酸盐-染色液。
2.取空心注射器，在其内端塞入一张组织培养纸，然后用组织培养液将其灌满，将卡扣锁紧。
3.将塞有组织培养纸和液体的注射器插入蛙卵中，轻轻旋转注射器，使蛋浆流出。
接着，用生理盐水冲洗卵母细胞，使细胞膜裂开，核外膜消失。
然后，在生理盐水中挂滴0.075mol/L KCl，使细胞外渗，退缩成球形，用固定液将其固定在玻片上。
4.经过细胞外渗的处理，将卵母细胞放置在醋酸盐-染色液中，使其染色体解开，然后取出细胞，嫁接于另一片玻片上，将其挤压，使细胞分裂。
5.将细胞再次放置于醋酸盐-染色液中，使染色体上颜色变浅的区域缩小或消失，此时，立即取出细胞固定。
6.倒掉固定液，用荧光素铵在玻片上滴上适量的荧光素铵溶液，静置2~3分钟，然后将其吹干。
7.将制备好的标本在显微镜下观察，记录染色体的数目、形态和结构等信息。
实验结果：
制备出的标本中，蛙骨髓染色体的数目、形态和结构均符合正常情况下的表皮状态。
染色体在荧光素铵的作用下呈现出明亮的荧光。
其中，常见的染色体形态有“V”字形、“L”字形和“T”字形等。
本实验制备出的蛙骨髓染色体标本可用于进行染色体形态和结构的观察，有助于我们更深入了解染色体的表皮状态。
同时，荧光素铵在染色体观察中可以得到有效应用。
细胞生物的学实验7染色体制备技术
实验7 染色体制备技术〔实验目的〕1、学习染色体标本的制备技术2、掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤〔实验原理〕每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。
〔试剂材料〕1、试剂（1）0.1%秋水仙素溶液〔生理盐水配置〕（2）1mol/L盐酸（3）1%柠檬酸钠溶液（4）0.067mol/L磷酸盐缓冲液〔pH6.8〕Na2HPO4﹒12H2(Na2HPO4﹒2H2O 5.92g)KH2PO4蒸馏水至1L（5）Giemsa原液〔pH6.8〕〔pH6.8〕Giemsa染粉1g，甘油 33ml, 甲醇 45ml 染粉在乳钵中滴加少许甘油研磨至无颗粒，再将全部甘油参加，放入60-65℃保温2小时后参加甲醇混匀。
棕色瓶中保存。
用时和磷酸缓冲液1：10混合〔6〕低渗液：0.4%KCl2、材料（1）洋葱根尖（2）女性口腔上皮（3）蟾蜍〔内容方法〕X染色体标本制片与观察1、取材：女性漱口后取口腔上皮细胞，涂在干净的载玻片上2、固定：95%乙醇固定10分钟，空气枯燥3、水解：1mol/L盐酸室温水解10分钟，然后用新鲜蒸馏水冲洗4次，晾干4、染色：Giemsa染色10分钟，蒸馏水冲后90%乙醇分色1分钟，酒精灯过火脱水。
也可用0.2%甲苯安蓝染色5-15分钟，冲洗后枯燥，观察须知事项：1、女性口腔、牙签和载波片要干净，防止杂质干扰。
2、口腔内第一次获取的上皮细胞要弃去，然后在一样部位再获取新鲜的上皮细胞。
3、上皮细胞涂片时尽量使细胞分散开，重叠的细胞影响观察。
4、人的X小体紧贴细胞核膜内侧，但是一般上皮细胞中只有30%-50%的细胞可以观察到X小体。
小鼠骨髓染色体制备1、小鼠按照4μg/g体重经腹腔注射秋水仙素，3-4小时后杀死动物，取后肢股骨和胫骨，纱布剥离所有肌肉，生理盐水洗净后剪去骨两端。
实验七 动物染色体标本的制备与观察
实验七动物染色体标本的制备与观察实验目的1．初步掌握动物骨髓染色体标本制备过程，了解操作步骤的原理。
2．了解常用实验动物染色体的数目及特点。
实验原理染色体的分析往往是选择细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后细胞进入分裂的动物组织。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。
给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析是非常有用的。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
因此骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
实验用品一、材料无尾两栖类蛙属或蟾蜍属动物二、器材水平离心机、显微镜、刻度离心管（10ml）、注射器（1ml）、载玻片、烧杯（400ml）、量筒（100ml）、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管。
三、试剂1．1%柠檬酸钠溶液：称取1g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml 蒸馏水中。
2．500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。
3．Giemsa（姬姆萨）原液（pH6.8）Giemsa染粉1g甘油（丙三醇，glycerine, AR）33ml甲醇（methyl alcoholA, AR）45ml将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保温箱中保温2h后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。
4．0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）Na2HPO4·12H2O 11.81g(或Na2HPO4·2H2O 5.92g)KH2P04 4.5g溶解于蒸馏水中至1000 ml。
5．1:10 Giemsa磷酸缓冲液（pH6.8）：取1ml 姬姆萨原液用9ml 0.067mol/L 磷酸盐缓冲液(pH 6.8)稀释即可。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察
姓名系年级组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察一．实验目的1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。
2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。
3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。
二．实验原理（一）染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：1.数目（2n=？）2.长度（绝对长度、相对长度）3.着丝粒位置（M/SM/ST/T）4.随体与次溢痕的数目、大小和位置5.带型分析（二）操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。
利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。
通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。
用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。
哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。
小鼠染色体标本制作、染色及观察
小鼠染色体标本制作、染色及观察小鼠是生产药物和进行基因研究的重要实验动物之一。
了解其染色体特征和行为对于生物学和医学研究非常重要。
本文将介绍如何制作小鼠染色体标本，以及染色和观察的步骤。
制作小鼠染色体标本需要使用小鼠肺部组织。
以下是制作步骤：1. 首先将小鼠处死，取出肺部组织并剪成小块。
2. 将肺组织移入一个离心管中，并添加10毫升10％KCl溶液。
3. 用注射器向管中注入溶液，轻轻摇动以使组织浸泡在KCl中。
4. 将溶液和组织离心5分钟，然后倒掉上层液体。
5. 用少量冰冷等渗氨水将沉淀悬浮并再次离心。
6. 倒掉上层液体，重复该步骤直到样品中不含有明显的碎片和其他杂质。
7. 最后，在离心管中滴加10毫升3：1（甲醇：冰醋酸）混合液，并轻轻混合。
8. 将混合液沿离心管壁滴加，使其缓慢地沉淀到底部。
变态反应需要放置在-20°C 的60分钟以上。
9. 滴掉液体，并用75％乙醇固定沉淀。
染色将固定的小鼠染色体标本染色需要的材料如下：1. 铬酸盐染液2. 蒸馏水3. 复方玫瑰红4. 静电纸和制作装置染色步骤如下：1. 将铬酸盐染液溶解在蒸馏水中（比例为1：3），搅拌混合。
2. 将小鼠染色体标本放在静电纸上，用制作装置连接到正离子极板上。
3. 用玫瑰红溶液覆盖标本，使其均匀覆盖。
4. 将正极板移动到离开标本1-2厘米的位置，并接通电源。
5. 在2-5分钟内，染色体将升起并接触到铬酸盐染液，染色体将呈现出不同的条纹状。
观察1. 显微镜2. 移相仪1. 将小鼠染色体标本放在显微镜上，并使用20倍至100倍的放大倍数进行观察。
2. 用相机或移相仪将图像捕捉下来以进行记录和分析。
总结小鼠染色体标本制作、染色和观察需要精细的技术和专业知识。
掌握这些技能对于研究小鼠染色体特征和行为非常重要。
希望本文的介绍有助于读者理解有关小鼠染色体标本制作、染色和观察的相关知识。
哺乳动物染色体制片与观察实验报告
哺乳动物染色体制片与观察实验报告实验目的本实验旨在通过制作哺乳动物染色体制片，观察和探索哺乳动物染色体的结构和特点。
实验材料- 哺乳动物染色体样本（例如人类、小鼠等）- 表皮组织刮片- 表皮细胞培养基- 血红素盐酸盐溶液- 醋酸（5％）- 钠苏尔法米红（0.1％）实验步骤1. 采集表皮组织刮片：使用无菌的刮片工具从待观察的部位取得表皮细胞样本，并将其转移到表皮细胞培养基中。
2. 表皮细胞培养：将表皮细胞样本转移到培养皿中，加入适量的表皮细胞培养基，放入恒温培养箱中，保持适当的温度（通常为37摄氏度）和湿度，培养一段时间，直至细胞增殖到一定数量。
3. 细胞收集：当细胞增殖到一定程度时，将培养皿中的细胞用生理盐水冲洗，以去除培养基中的残留物。
4. 染色体制片制备：将经过冲洗的细胞用生理盐水悬浮，滴于一块干净的玻璃片上，使细胞均匀分布。
然后从玻璃片的一端倾斜，使细胞均匀地涂布在玻璃片上。
待玻璃片干燥后，放入醋酸（5％）中固定细胞。
5. 细胞处理：将醋酸固定的玻璃片放入血红素盐酸盐溶液中，静置一段时间，左右观察细胞的形态。
6. 染色：将经过血红素盐酸盐处理的玻璃片转移到钠苏尔法米红溶液中，静置一段时间，使细胞染色。
7. 清洗与封片：将玻璃片转移到蒸馏水中，轻轻冲洗几次，然后用纸巾吸干水分。
在制片机上加热一段时间，待玻璃片完全干燥后，将其与载片胶片粘合在一起，制成染色体制片。
实验结果与讨论通过观察染色体制片，我们可以明显地看到哺乳动物细胞中染色体的形态和数量。
在制片过程中，醋酸的固定作用有助于细胞形态的保持，血红素盐酸盐和苏尔法米红的处理使染色体变得更加可见和易于观察。
实验结果显示，哺乳动物染色体一般为线状结构，且数量多为偶数。
根据染色体的形状、大小和着色情况，我们可以初步判断其所属的染色体类型（如性染色体、常染色体等），进一步研究染色体的特点。
这个实验不仅可以帮助我们了解哺乳动物染色体的基本结构和形态，还可以在遗传学和进化生物学研究方面提供重要的数据和信息。
实验七 动物骨髓细胞染色体的制备与观察.
实验七动物骨髓细胞染色体的制备与观察[实验目的]1. 通过青蛙或小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。
2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。
[实验原理]骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。
由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。
这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。
秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。
其次是要能够清楚的观察染色体的形态。
为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。
固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。
染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。
制备优良的标本可获得满意的观察效果。
利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。
一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。
[实验用品]1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。
2. 试剂：0.02﹪秋水仙素、0.075mol/l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。
3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。
[实验内容与方法]一、试剂配制1. 0.02﹪秋水仙素溶液：秋水仙素2mg，灭活生理盐水（蛙类0.65﹪、哺乳类0.85﹪的nacl）10ml溶解，避光保存。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
实验动物染色体标本的制备与观察
二、实验原理
1、染色体的中期阻断法
材料:具有高度分裂能力的细胞
植物细胞染色体制备:常规的压片法 动物细胞染色体制备:滴片法
2、几种试剂的Βιβλιοθήκη 用秋水仙素 柠檬酸钠 KCl溶液 固定剂 姬姆萨染液 姬姆萨 （ Giemsa ‘ s stain ；天青 - 伊红）
3、小白鼠染色体的特点：呈“U”型，全部 为端着丝粒染色体； 40条（19对常+1对性）
2如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素所制备的染色体制片会出现怎样的情3在该实验中常常会观察到一些大大小小的被染成紫色或兰色的近似圆形的结构是未被打散的细胞核吗
实验动物染色体标本的制备与观察
一、实验目的
初步掌握动物骨髓细胞染色体标本制备的 基本过程，了解操作步骤的原理；
了解一些哺乳动物染色体的数目和特点。
颈椎脱臼法
股骨
取骨髓细胞
滴片
图: 小白鼠染色体
拓展实验
1、实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素 （每组2只）
2、注射秋水仙素后2h、 4h、 6h、 8h 后再进行试验
五、作业及思考题
1、制备的小白鼠染色体标本，分裂相是否 多，染色体分散程度如何？有什么不足处， 原因何在？
2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水 仙素，所制备的染色体制片会出现怎样的情 况？
一些常见动物的染色体数目： 家兔：44 野兔：48 猪：38 黄牛：60 马：64 驴子：62 骡子：63 猩猩：48 金丝猴：44 猫：38 狗：78
三、实验材料与仪器
1、材料：小白鼠 2、试剂：
2%柠檬酸钠、0.1%秋水仙素（现用现 配）、Giemsa染液（pH6.8） 0.4%Kcl溶液
0.067mol/L的磷酸盐缓冲液（pH6.8） 1：10Giemsa磷酸盐缓冲液（pH6.8） 固定液：甲醇：冰醋酸（3：1） 3、器材和仪器：
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异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，
使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理， 使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预 冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可 以制成染色体标本。
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人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）
取前肢1：找到关节所在。
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四、实验步骤
取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。
2017/3/Байду номын сангаас4
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四、实验步骤
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四、实验步骤
注意，每组做2片
蒸汽固定法
3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻 轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置， 低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。 4.在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞 的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入 固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3） 室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。 5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将 固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片 的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直 立载玻片空气干燥。
牛蛙称重，按每克体重2 μ g的剂量腹腔注射 秋水仙碱溶液(用0．65％生理盐水配制)。注射
后3.5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。
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四、实验步骤
1．每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫 腓骨等长骨。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚 露出骨髓组织为宜。每组保证有1根后肢长骨，或者2根前肢 长骨。 2．在小烧杯中加入3 ml的0.65％生理盐水，取带针头 的注射器，吸入1 ml 0.65％生理盐水，将针头沿骨的长轴 方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细 胞冲洗到10ml离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶 液喷出，损失骨髓细胞。此3ml的生理盐水要反复使用，直 到把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨髓冲出物中大块白色 脂肪组织用针头挑出弃去。
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实验 7
动物染色体的制备
--牛蛙骨髓细胞染色体标本的制备、观察
一、实验目的
1.了解制备中期染色体标本的原理。 2.熟悉并初步掌握制备骨髓染色体的操作方法。
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二、实验原理
染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、 性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时 需要制备染色体标本。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有 丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特
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四、实验步骤
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四、实验步骤
取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。
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四、实验步骤
取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。
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四、实验步骤
取后肢3：剪开后的后腿关节。
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四、实验步骤
Giemsa染色
改良苯酚品红染色
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注意事项
1.骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，
若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，
不易获得较多的中期分裂相。
2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染
色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细
胞破碎，染色体丢失。
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五、实验结果
1．找出最好的几个分裂相，数出染色体条数. 2. 画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔， 对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。
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三、实验用品
• 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固 定液, 蒸馏水，Giemsa染液。 • 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪， 离心管，注射器，染色缸。 • 材料：肉用成体牛蛙
2017/3/24
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四、实验步骤
动物的药物处理（课前已经完成）
3. 取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？
牛蛙染色体，2n = 26
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五、实验结果
45°
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四、实验步骤
蒸汽固定法
7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充 分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将 Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染2030分钟。 8.用蒸馏水稍洗使脱去浮色，吸水纸吸干载玻片底面和周围的 水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不 需要盖玻片。