遗传病的基因诊断ppt课件
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? 直接采用PCR进行基因诊断 ? 采用PCR产物的限制性片段长度多态性分析（ PCR-
RFLPs ）进行基因诊断 ? 采用PCR结合等位基因特异性寡核苷酸探针（ ASO）
斑点杂交进行基因诊断 ? 通过PCR产物的反相点杂交 (RBD)进行基因诊断 ? 采用PCR产物的单链构象多态性 (SSCP)分析进行基因
9
Southern blot
是最经典的基因分析方法，不但能检出特 异的DNA片段，而且能进行定量和测定分子 量，可用于基因的酶切图谱分析、基因突 变分析等。
10
Northern杂交
用于RNA的检测，能对组织细胞中总RNA 或mRNA进行定性和定量分析。
11
斑点杂交（Dot blot）
可用基因组中特定基因及其表达的定性及定 量分析，方法简单、快速灵敏、样品用量 少；其缺点是不能鉴定所测基因的分子量， 特异性不高，有一定比例的假阳性。
12
原位杂交
（Colony in situ hybridization）
可查明染色体中特定基因的位置，用于染色体疾 病的诊断；原位杂交的结果是显示有关核酸序 列的空间位置情况，因此可检出含核酸序列的 具体细胞，细胞的具体定位，数目和类型，可 检出基因和基因产物的亚细胞定位。
13
2、利用PCR及结合其他技术进行基因诊断
7
核酸杂交方法分类
? 按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交 两种类型。
? 固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固 体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。
? 液相杂交所参加反应的两条核酸链都游离在溶液 中。
8
固相杂交分类
? Southern 印记杂交 ? Northern 印记杂交 ? 斑点杂交 ? 原位杂交
遗传病的基因诊断
药学2班 辛鑫
1
一、基因诊断的概念 及常用技术
2
（一）基本概念
基因诊断—利用分子生物学技术， 从 DNA/RNA水平检测基因的存 在,分析基因的结构变异和表 达状态，从而对疾病作出诊断。
3
（二）基因诊断常用方法
核酸分子杂交 PCR DNA序列测定 DNA芯片技术
4
1、核酸杂交
诊断 ? 采用PCR技术对靶核酸进行定量分析
14
寡核苷酸杂交分析 SNP和等位基因特 异寡核苷酸杂交 （ASO）
Leabharlann Baidu15
3、 DNA序列测定
DNA序列测定是进行基因突变检测的最 直接、最准确的方法，可以确定突变 的部位，突变的性质。
16
基本原理-------核酸变性和复性理 论
即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双 链解开，而在条件恢复后又可依碱基配对规律 形成双链结构。因此应用已知碱基序列的单链 核苷酸片段作为探针，就可检测样本中是否存 在与其互补的同源核苷酸序列。
5
probe
probe
6
核酸杂交的关键要素
? probe DNA ? target DNA ? signal detection
RFLPs ）进行基因诊断 ? 采用PCR结合等位基因特异性寡核苷酸探针（ ASO）
斑点杂交进行基因诊断 ? 通过PCR产物的反相点杂交 (RBD)进行基因诊断 ? 采用PCR产物的单链构象多态性 (SSCP)分析进行基因
9
Southern blot
是最经典的基因分析方法，不但能检出特 异的DNA片段，而且能进行定量和测定分子 量，可用于基因的酶切图谱分析、基因突 变分析等。
10
Northern杂交
用于RNA的检测，能对组织细胞中总RNA 或mRNA进行定性和定量分析。
11
斑点杂交（Dot blot）
可用基因组中特定基因及其表达的定性及定 量分析，方法简单、快速灵敏、样品用量 少；其缺点是不能鉴定所测基因的分子量， 特异性不高，有一定比例的假阳性。
12
原位杂交
（Colony in situ hybridization）
可查明染色体中特定基因的位置，用于染色体疾 病的诊断；原位杂交的结果是显示有关核酸序 列的空间位置情况，因此可检出含核酸序列的 具体细胞，细胞的具体定位，数目和类型，可 检出基因和基因产物的亚细胞定位。
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2、利用PCR及结合其他技术进行基因诊断
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核酸杂交方法分类
? 按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交 两种类型。
? 固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固 体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。
? 液相杂交所参加反应的两条核酸链都游离在溶液 中。
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固相杂交分类
? Southern 印记杂交 ? Northern 印记杂交 ? 斑点杂交 ? 原位杂交
遗传病的基因诊断
药学2班 辛鑫
1
一、基因诊断的概念 及常用技术
2
（一）基本概念
基因诊断—利用分子生物学技术， 从 DNA/RNA水平检测基因的存 在,分析基因的结构变异和表 达状态，从而对疾病作出诊断。
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（二）基因诊断常用方法
核酸分子杂交 PCR DNA序列测定 DNA芯片技术
4
1、核酸杂交
诊断 ? 采用PCR技术对靶核酸进行定量分析
14
寡核苷酸杂交分析 SNP和等位基因特 异寡核苷酸杂交 （ASO）
Leabharlann Baidu15
3、 DNA序列测定
DNA序列测定是进行基因突变检测的最 直接、最准确的方法，可以确定突变 的部位，突变的性质。
16
基本原理-------核酸变性和复性理 论
即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双 链解开，而在条件恢复后又可依碱基配对规律 形成双链结构。因此应用已知碱基序列的单链 核苷酸片段作为探针，就可检测样本中是否存 在与其互补的同源核苷酸序列。
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probe
probe
6
核酸杂交的关键要素
? probe DNA ? target DNA ? signal detection