急性、慢性和亚慢性毒性实验

急性毒性试验（一）经典的急性致死性毒性试验通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量—反应关系并求得LD50（ LC50）

1、实验动物常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备，

也可仅做雌性动物的 LD50 试验。小动物每组 10 只，狗等大动物可每组 6 只。

2、染毒剂量设计首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH 等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的

LD50（LC50）值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔（一般按

几何级数）染毒，找出找出10%~90%（或 0％~100％）的致死剂量范围，然后在这个剂量范

围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设 5 个剂量组，每组 10 只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组：

i=（lgLD90-lgLD10）／（n-1）或： i=（lgLD100-lgLD0）／（n-1）式中 i 为组距（相邻的两个剂量组对数剂量之差）;

n 为设计的剂量组数。

有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，

一般用 20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg （体重），对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg（体重）。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡（死亡率低于50%），则可得出LD50大于限量的结论。

3、观察

染毒后一般要求观察 14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。在实际工作中，依

据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。

观察内容包括：

（1）动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。

（ 2）动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。

（3）中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、惊厥、腹泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或竖毛。

（4）病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进行组织病理学检查。

4、LD50计算

（ 1 ）霍恩氏法（ 2）简化寇氏法

M = X - i（工 p - 0.5）

式中 : m — log LD50,

X —最高剂量组剂量对数值 ,

p —死亡率（用小数表示），

工p—死亡率总和，

i —相邻两组剂量对数之差。

（ 3 ）直接回归法：

死亡频率呈正态分布，则变化曲线为典型的“钟罩”型；死亡频率化为累积死亡频率，反应曲线呈S 形；累积死亡频率化为概率单位时，反应曲线呈直线。

（二）急性毒性试验的其他方法

1. 固定计量法

2. 急性毒性分级法

3. 上、下移动法

亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法

1、实验动物要求选拔两种实验动物，一种为啮齿类，首选是大鼠，另一种为非啮齿类，首选是狗。亚慢性毒性试验一般每个剂量组 20只大鼠，或每组 4~6只狗。慢性毒性试验每组 40只大鼠，狗每组 8 只或以上。

2、染毒途径常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和经皮肤染毒。

3、染毒期限

工业毒理学—— 3 －6 个月

食品毒理学—— 6 个月－ 1 年

环境毒理学—— 6 个月－ 1 年

致癌试验——接近或等于动物的预期寿命

4、剂量分组（1）亚慢性毒性的剂量选择：阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组急性毒性的阈剂量： 1/20~1/5 LD50 组距： 3~10倍，最低不小于 2 倍（2）慢性毒性的剂量选择

阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组亚慢性阈剂量： 1/50~1/5LD50 组距： 2~5 倍，最低不小于 2 倍

5、观察指标

（1）中毒症状（行为和外观）

（2）体重：每周称量一次

（ 3）食物利用率（试验动物每食入 100g 饲料所增长的体重克数）

（4）实验室检查

1）血液学检查

2）尿液检查

3）血液生化学检查

（5）病理及病理组织学检查对濒死动物进行解剖。试验结束及恢复期结束时，活杀实验动物。

1）系统解剖：消化道、肺、肝、肾、淋巴腺、眼、皮肤等，记录有无肉眼可见的异常变化。

2）脏器系数：是指某个脏器质量与体重的比值，又称脏体比值。常以100 g 体重或 1g 体重计。需称量脏器湿重并计算其脏器系数。

3）组织病理学检查

（6）特异性指标

6、结果分析：选择适当的统计学方法进行各剂量组与阴性对照组的比较。