海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究

关键词：地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省摘要:目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失（--SEA）、右侧缺失（-α3.7）和左侧缺失（-α4.2）三种α-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失（--SEA）、右侧缺失（-α3.7）和左侧缺失（-α4.2）三种α-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为12.69%;三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635，其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.0127、0.0305、0.0203，共发现--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα三种基因型，其中--SEA/αα5例，-α3.7/αα12例，-α4.2/αα8例。在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，携带率为56.72%，三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607，其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891，共发现--SEA/αα、-α3.7/αα、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2、-α4.2/αα、和-α4.2/-α4.2六种基因型，其中--SEA/αα3例，-α3.7/αα39例，-α3.7/-α3.76例，-α3.7/-α4.218例，-α4.2/αα38例，-α4.2/-α4.210例。结论海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体。关键词:地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省Investigationintothedeletiontypesofα

-thalassemiainHanandLINationalitiesinHainanProvince.

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheincidences、theallelicfrequenciesandthegenotypesfrequenciesofthreeα

-tha-lassemiadeletiontypes（--SEA、-α 3.7、-α 4.2）andtheirdistributionsinHanandLinationalitiesinHainanProvince.MethodsThreeα

-thalassemiadeletiontypes，i.eSoutheastAsiadeletion（--SEA），rightdeletion（-α3.7）andleftdeletion（-α 4.2），werescreenedbasedonpolymerasechainreaction（PCR）inHanandLinationalitiesinHainan.Results25carriersweredetectedin197Hanindividuals，andtheincidenceofcarrierswas12.69%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0 .0127，0.0305and0.0203respectively，totally0.0635inHannationalityinHainan.Threegenotypesof5（--SEA/αα）cases，12（-α 3.7/αα）casesand8（-α 4.2/αα）casesweredetected.Onthecontrary，114carriersweredetectedfrom201individualsinLinationality，andtheincidenceofcarrierswas56.72%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0 .0075，01716and0.1891respec-tively，totally0.3607inLinationality.Sixgenotypesweredetectedincluding3（--SEA/αα）cases，39（-α3.7/αα）cases，6（-α3.7/-α3.7）cases，18（-α3.7/-α4.2）cases，38（-α4.2/αα）casesand10（-α4.2/-α4.2）cases.ConclusionThereisahighincidenceofα

-thalassemiainHanandLinationalitiesinHainanprovince. [!--empirenews.page--] Keywords:Thalassemia;Polymerasechainreaction

（PCR）;Minoritynationality;HainanProvince α-地中海贫血（α-地贫）是一种严重危害人类健康的遗传病，其主要特征是α-珠蛋白链合成减少（α+地贫）或缺如（α0地贫）。α-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类［1］，α-珠蛋白基因缺失是导致α-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种α-珠蛋白基因缺失突变，在中国人中已发现7种，其中东南亚型缺失突变（--SEA）、右侧缺失型突变（-α3.7）和左侧缺失型突变（-α4.2）三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型［2～4］。为了研究海南省汉、黎族人群中α-地中海贫血的发病率及其基因型的分布特点，我们应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型α-地贫突变类型，现将结果报告如下。1材料与方法 1.1DNA

样品用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血，按Lahiri等方法［5］提取DNA，阳性对照标本由南方医科大学医学遗传学教研室徐湘民教授惠赠。

1.2PCR扩增东南亚型缺失突变分析按文献［6］进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照AmoldS.-C.Tan［7］等报道合成引物。扩增--SEA、-α3.7和-α4.2的多重PCR体系均采用TaKaRaLATaqTMJ及缓冲液（宝生物工程有限公司产品），PCR反应体积为25μl，在PCR 缓冲液（1×GCBufferⅡ，

2.5mmol/LMgCl2）中含模板DNA0.2μg，引物0.2～0.5μmol/L，dNTP为200μmol/L，1UTaqDNA聚合酶，循环参数为99℃变性5min，85℃加酶，56℃退火1min，72℃延伸2min，然后95℃1min，56℃1min，72℃2min，30个循环后72℃延伸7min。扩增产物在1%琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色在紫外光灯下观察结果并照相。2结果2.1--SEA、-α

3.7和-α

4.2缺失型突变的多重PCR扩增在PCR反应体系中同时扩增了α2基因的一个1800bp的片段，用以判断样品DNA的α2基因是否缺失，从而判断α-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无--SEA、-α3.7和-α4.2缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的α2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子（--SEA/αα）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外，还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子（-α3.7/αα）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp 的α2基因扩增片段外，还出现一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子（-α3.7/-α3.7）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子（-α4.2/αα）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外，还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子（-α4.2/-α4.2）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子（-α3.7/-α4.2）的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。[!--empirenews.page--] 图1--SEA、-α3.7和-α4.2缺失型突变的多重PCR检测结果（略）Fig1ThePCR-amplifiedresultof--SEA、-α3.7、-α4.2deletion 注:M为GeneRulerTMDNALadder（华美产品），泳道1-7对应的样本基因型分别为aa/aa，--SEA/αα，-α 3.7/αα，-α 3.7/-α 3.7，-α 4.2/αα，-α 4.2/-α 4.2，-α 3.7/-α 4.2。M:Themarker

（GeneRulerTMDNALadder）.Thegenotyesofsamplescorrespondingtofromlane1tolane7were aa/aa，--SEA/αα，-α3.7/αα，-α3.7/-α3.7，-α4.2/αα，-α4.2/-α4.2，-α3.7/-α4.2. 2.2 海南汉、黎族人群中α-地中海贫血（-- SEA 、-α 3.7 、-α 4.2 ）等位基因频率（见表1）。三种缺失在海南汉族人群中的频率分别为0.0127、0.0305和0.0203，在黎族人群中的频率分别为0.0075、0.1716和0.1891。两个人群中的三种缺失型α-地中海贫血突变经χ 2 检验均符合Hardy-Weinbery遗传平衡。 2.3 海南省汉、黎族人群中-- SEA 、-α 3.7 和-α 4.2 缺失突变的基因型（见表2）。在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为12.69%，共发现-- SEA /αα、-α 3.7 /αα和-α 4.2 /αα三种基因型，其中-- SEA /αα5例，-α 3.7 /αα12例，-α 4.2 /αα8例;在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，[1][2]下一页携带率为56.72%，共发现- -SEA /αα、-α 3.7 /αα、-α 3.7 /-α 3.7 、-α 3.7 /-α 4.2 、-α 4.2 /αα和-α 4.2 /-α 4.2 六种基因型，其中-- SEA /αα3例，-α 3.7 /αα39例，-α 3.7 /-α 3.7 6例，-α 3.7 /-α 4.2 18例，-α 4.2 /αα38例，-α 4.2 /-α 4.2 10例。表1 海南省汉、黎族人群中三种α-地中海贫血缺失突变的等位基因频率（略）Tab1 The allelic frequencies of threeα-thalassemia deletion mutation （-- SEA 、-α 3.7 、-α 4.2 ）in Han and Li nationalities of Hainan provinc 表2 海南省汉、黎族人三种缺失型α-地中海贫血突变的基因型结果（略）Tab2 The